血管內(nèi)皮生長因子C(VEGF-C)融合蛋白的原核表達及純化.pdf

1、血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)作為一種強有力的血管生長介質(zhì)，不僅能特異性地作用于血管內(nèi)皮細胞，刺激細胞分裂、增生和移行，而且在血管成熟和重塑中起著重要作用，促進治療性血管的新生。VEGF-C是一種特異性的血管、淋巴管內(nèi)皮細胞調(diào)節(jié)因子，主要作用為增加血管內(nèi)皮細胞的通透性，介導(dǎo)淋巴管內(nèi)皮細胞的趨化性、細胞增殖和淋巴管的增生。許多研究提示，腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移和VEGF-C密切相關(guān)。因此，VEGF-C為腫瘤的抗淋巴轉(zhuǎn)移治療提供新的途徑。本研究通過

2、構(gòu)建VEGF-C基因的pGEX/VEGF-C重組體，在大腸桿菌中表達，獲得高效表達的重組VEGF-C蛋白，以進一步研究其結(jié)構(gòu)和功能，深入了解腫瘤發(fā)病機制，推進抗腫瘤藥物市場的發(fā)展。 主要研究內(nèi)容及結(jié)果如下： 1、本試驗采用化學(xué)合成法制備VEGF-C基因，插入pGEX-6p-1融合蛋白表達載體中，構(gòu)建重組質(zhì)粒pGEX/VEGF-C。經(jīng)轉(zhuǎn)化宿主菌E.coli BL21，篩選高效率轉(zhuǎn)化子，搖瓶培養(yǎng)，用IPTG誘導(dǎo)高效表達蛋白質(zhì)

3、。表達產(chǎn)物采用谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析純化，并用Lowry法測定蛋白含量。 2、成功構(gòu)建了原核表達質(zhì)粒pGEX/VEGF-C；SDS-PAGE分析顯示經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，重組表達質(zhì)粒pGEX/VEGF-C在大腸桿菌中表達了分子量為61kD左右的融合蛋白；通過優(yōu)化誘導(dǎo)條件，在16℃、0.4mM IPTG誘導(dǎo)16小時后蛋白的表達量達到高峰。 3、在大腸桿菌中表達的重組融合蛋白經(jīng)谷胱甘肽-瓊脂糖親和層析純化后得到較高濃度的VEGF