AtATM3和CYP2E1基因增強(qiáng)轉(zhuǎn)基因紫花苜?？怪亟饘俸陀袡C(jī)物能力研究.pdf

1、近年來(lái)，隨著工業(yè)化進(jìn)程的加快，我國(guó)的環(huán)境污染形勢(shì)日益嚴(yán)峻，土壤污染問(wèn)題凸顯，嚴(yán)重阻礙經(jīng)濟(jì)發(fā)展和損害人體健康，因此控制與修復(fù)土壤污染勢(shì)在必行。目前，土壤污染修復(fù)主要包括物理/化學(xué)修復(fù)和生物修復(fù)兩大類(lèi)。植物修復(fù)技術(shù)因更加快速、高效、費(fèi)用低，且便于推廣，近年來(lái)呈現(xiàn)出良好的發(fā)展前景。
　　本研究旨在利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將兩個(gè)基因轉(zhuǎn)入紫花苜蓿以提高其對(duì)土壤重金屬和有機(jī)物復(fù)合污染的修復(fù)能力;AtATM3和細(xì)胞色素氧化酶基因CYP2E1是兩種分別與重

2、金屬和有機(jī)物抗性、積累相關(guān)的基因。目前，國(guó)內(nèi)外尚未出現(xiàn)同時(shí)利用這兩個(gè)基因進(jìn)行土壤修復(fù)的報(bào)道。
　　實(shí)驗(yàn)構(gòu)建含有CYP2E1基因的植物表達(dá)載體:用目的基因替換表達(dá)載體pBI121上的Gus基因，構(gòu)建P35S-CYP2E1-T35S表達(dá)盒，即質(zhì)粒pBI121-CYP2E1。然后通過(guò)凍融法將表達(dá)載體pBI121-CYP2E1，同另一植物表達(dá)載體pCambia-AtATM3轉(zhuǎn)入同一農(nóng)桿菌LBA4404中。
　　實(shí)驗(yàn)選取“阿爾岡金”紫

3、花苜蓿下胚軸作為基因轉(zhuǎn)化受體，通過(guò)組織培養(yǎng)研究，篩選并優(yōu)化胚性愈傷組織的誘導(dǎo)分化條件，構(gòu)建并優(yōu)化了適合“阿爾岡金”的遺傳轉(zhuǎn)化再生體系。經(jīng)共轉(zhuǎn)化將AtATM3基因和CYP2E1基因?qū)搿鞍枌稹弊匣ㄜ俎Ｖ?。?jīng)共培養(yǎng)、選擇培養(yǎng)最終獲得了186株抗卡那霉素的轉(zhuǎn)基因植株。
　　篩選出的186株抗性植株應(yīng)用PCR和RT-PCR進(jìn)行分子學(xué)水平檢測(cè)后，對(duì)轉(zhuǎn)基因植株的抗重金屬和有機(jī)物功能進(jìn)行了鑒定。結(jié)果表明所獲得抗性紫花苜蓿植株整合了外源目的基