CYP2E1和GST基因雙元表達(dá)載體的構(gòu)建及其在紫花苜蓿中的表達(dá).pdf

1、隨著工業(yè)化的發(fā)展、城市化進(jìn)程的深入，我國(guó)的環(huán)境污染不斷加劇。土壤環(huán)境污染物種類和數(shù)量在不斷增加，嚴(yán)重?fù)p害經(jīng)濟(jì)發(fā)展和人體健康。目前，土壤污染修復(fù)主要有物理/化學(xué)修復(fù)和生物修復(fù)兩大類。植物修復(fù)是指為利用綠色植物去除環(huán)境中的污染物。與傳統(tǒng)修復(fù)技術(shù)相比，植物修復(fù)技術(shù)因具有更加快速、高效、費(fèi)用低、便于推廣等優(yōu)點(diǎn)，近年來(lái)呈現(xiàn)出良好的發(fā)展前景。
　　本研究旨在利用基因工程技術(shù)將兩個(gè)基因轉(zhuǎn)入紫花苜蓿中以提高其對(duì)土壤重金屬和有機(jī)物復(fù)合污染的修復(fù)能力

2、;谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶基因GST和細(xì)胞色素氧化酶基因CYP2E1是兩種分別與重金屬和有機(jī)物抗性、積累相關(guān)的基因。目前，國(guó)內(nèi)外尚未出現(xiàn)同時(shí)利用這兩個(gè)基因進(jìn)行土壤修復(fù)的報(bào)道。
　　本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建含有CYP2E1基因的植物表達(dá)載體:用目的基因替換表達(dá)載體pBI121上的Gus基因，構(gòu)建P35S-CYP2E1-T35S表達(dá)盒，即質(zhì)粒pBI121-CYP2E1。然后通過(guò)凍融法將表達(dá)載體pBI121-CYP2E1轉(zhuǎn)入含目的基因GST的農(nóng)桿菌LBA440

3、4中。
　　本實(shí)驗(yàn)選取“阿爾岡金”紫花苜蓿的下胚軸作為基因轉(zhuǎn)化受體，通過(guò)組織培養(yǎng)研究，篩選并優(yōu)化出胚性愈傷組織的誘導(dǎo)分化條件，構(gòu)建并優(yōu)化出適合“阿爾岡金”的遺傳轉(zhuǎn)化再生體系。經(jīng)共轉(zhuǎn)化將GST基因和CYP2E1基因?qū)搿鞍枌稹弊匣ㄜ俎Ｖ小＝?jīng)共培養(yǎng)、選擇培養(yǎng)最終獲得了240株抗卡那霉素的轉(zhuǎn)基因植株。
　　篩選出的240株抗性植株應(yīng)用PCR和RT-PCR進(jìn)行分子學(xué)水平檢測(cè)后，對(duì)其轉(zhuǎn)基因植株的抗重金屬和有機(jī)物功能進(jìn)行了鑒定。結(jié)果