寡養(yǎng)單胞菌G1對有機磷農(nóng)藥降解的研究.pdf

1、本實驗室已經(jīng)分離篩選出一株可降解毒死蜱但不能進一步降解代謝產(chǎn)物三氯苯酚的微嗜酸寡養(yǎng)單胞菌（Stenotrophomonas acidaminiphila）G1，并從中克隆出一段長4018堿基的DNA片段，其中包含一段編碼有機磷水解酶基因mpd，長度為996pb?，F(xiàn)發(fā)現(xiàn)該菌能高效降解甲基對硫磷(MP)，本論文研究了該菌對MP的降解特性、降解酶的定位并測定了降解譜。
　　結(jié)果顯示在24h內(nèi)，G1對200mg·L-1的MP的降解率達95

2、％以上。實驗過程中發(fā)現(xiàn)對硝基苯酚(PNP)的含量先逐漸升高然后保持不變。通過OD600值的測定，發(fā)現(xiàn)細菌濃度在整個實驗過程中幾乎無變化。結(jié)果表明，G1能夠高效降解MP，但是不能進一步降解代謝產(chǎn)物對PNP。同樣，G1也僅能降解轉(zhuǎn)化甲基對氧磷和丙溴磷為PNP和4，Br-2，Cl苯酚，并不能完全降解甲基對氧磷和丙溴磷，也不能利用甲基對氧磷和丙溴磷為唯一碳源生長。
　　將活化后的菌接種于富集培養(yǎng)基中，37℃，120 r·min-1下培養(yǎng)2

3、4h[1]后，5000r·min-1離心15min，棄去上清液，收集菌體。菌體用生理鹽水洗滌兩次。重懸于無機鹽培養(yǎng)基中，于600nm處調(diào)節(jié)光密度(OD600)至1.0，制成菌懸液母液。利用正交實驗設(shè)計軟件，設(shè)計正交實驗表。按實驗表分別向9組實驗組添加一定體積的MP母液（丙酮配制），待溶劑揮發(fā)干后，加入一定體積的無機鹽培養(yǎng)液使體系中MP濃度分別為50mg·L-1、100mg·L-1和200mg·L-1;并分別接入10％、20％和30％(v

4、/v)的菌懸液母液，最終溶液總體積為5mL?？瞻讓φ战M以等體積的磷酸緩沖溶液代替菌懸液母液。結(jié)果經(jīng)過SPSS軟件進行方差分析和多重比較，得出MP降解半衰期最短的條件為50mg·L-1底物濃度、20％接菌量、40℃溫度。在此條件下，MP的半衰期為1.60h。
　　本文確定了由甲基對硫磷水解酶基因mpd編碼的甲基對硫磷水解酶(MPH)在細胞中的定位。由于G1為革蘭氏陰性菌，可采用滲透休克法提取細胞周質(zhì)，超聲破碎去壁細胞提取胞內(nèi)粗酶。分