硫酸慶大霉素膠囊抗生素效價的測定及評價-本科畢業(yè)論文

1、<p>　　***********大 學(xué)</p><p>　　本 科 畢 業(yè) 論 文</p><p>　　題目：硫酸慶大霉素膠囊抗生素效價的測定及評價</p><p><b>　　姓 名：</b></p><p><b>　　學(xué) 號：</b></p><p&

2、gt;<b>　　專 業(yè)： </b></p><p><b>　　年 級： </b></p><p><b>　　完成日期： </b></p><p><b>　　指導(dǎo)教師： </b></p><p>　　本科生畢業(yè)論文（設(shè)計）獨創(chuàng)性聲明<

3、;/p><p>　　本人聲明所呈交的畢業(yè)論文（設(shè)計）是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，本論文中沒有抄襲他人研究成果和偽造數(shù)據(jù)等行為 。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。</p><p>　　論文（設(shè)計）作者簽名： 日期： </p>

4、<p>　　本科生畢業(yè)論文（設(shè)計）使用授權(quán)聲明</p><p>　　海南師范大學(xué)有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交畢業(yè)論文（設(shè)計）的復(fù)印件和磁盤，允許畢業(yè)論文（設(shè)計）被查閱和借閱。本人授權(quán)海南師范大學(xué)可以將本畢業(yè)論文（設(shè)計）的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)印手段保存、匯編畢業(yè)論文（設(shè)計）。</p><p>　　論文（設(shè)計）作者簽名：

5、 日期： </p><p>　　指 導(dǎo) 教 師 簽 名： 日期： </p><p><b>　　目 錄</b></p><p>　　摘要………………………………………………………………………………1</p><p>&l

6、t;b>　　1.前言2</b></p><p>　　2. 材料與方法3</p><p>　　2.1實驗材料與儀器設(shè)備3</p><p>　　2.1.1實驗材料3</p><p>　　2.1.2培養(yǎng)基配方4</p><p>　　2.1.3實驗試劑4</p><p>　

7、　2.1.4實驗儀器4</p><p><b>　　2.2實驗方法4</b></p><p>　　2.2.1短小芽孢桿菌菌懸液的制備4</p><p>　　2.2.2培養(yǎng)皿的選擇5</p><p>　　2.2.3操作環(huán)境系統(tǒng)的監(jiān)測5</p><p>　　2.2.4磷酸緩沖溶液的選擇5&

8、lt;/p><p>　　2.2.5 平均裝量6</p><p>　　2.2.6標準品與供試品溶液的制備6</p><p>　　2.2.7雙碟的制備7</p><p>　　2.2.8放置牛津杯8</p><p>　　2.2.9滴加抗生素8</p><p>　　2.2.10抑菌圈測定儀的使用

9、9</p><p><b>　　3.結(jié)果與分析9</b></p><p>　　3.1操作環(huán)境系統(tǒng)的監(jiān)測9</p><p><b>　　3.2緩沖體系9</b></p><p>　　3.3 平均裝量11</p><p>　　3.4試驗菌濃度11</p>

10、<p>　　3.5樣品測試結(jié)果12</p><p>　　3.5.1實驗結(jié)果圖12</p><p>　　3.5.2實驗結(jié)果統(tǒng)計13</p><p><b>　　3.6 討論16</b></p><p><b>　　4.結(jié)論17</b></p><p>&l

11、t;b>　　致謝17</b></p><p><b>　　參考文獻18</b></p><p>　　硫酸慶大霉素膠囊抗生素效價的測定及評價</p><p>　　作者： 指導(dǎo)老師： </p><p>　　摘 要：為了解我市某藥品生產(chǎn)企業(yè)生產(chǎn)的硫酸慶大霉素膠囊質(zhì)量是否合格，本研究采用管碟法對該抗生

12、素效價，通過全自動抑菌圈測定儀進行效價分析，結(jié)果表明測試的2批藥品T131156和T110109的R值分別為0.2659和0.2702，均小于0.273；2批藥品回歸比較均顯著( P < 0.0 1 )，偏離平行均不顯著 (P > 0.0 5 )，標準品和檢測品均呈平行直線關(guān)系；2批藥品T131156和T110109的平均可信限率Pt的FL%分別為4.2428%和3.4479%，均小于5%；2批藥品T131156和T1101

13、09的測定效價分別為662.0827u/mg和646.1536u/mg，均高于估計效價的90%且低于估計效價的110%。綜上所述，測試的2批藥品抗生素效價均符合藥典要求，質(zhì)量合格。</p><p>　　關(guān)鍵詞：硫酸慶大霉素；抗生素效價；抑菌圈測定儀</p><p>　　Abstract：In order to understand whether the quality of Gentam

14、icin sulfate capsules which Produced by a pharmaceutical factory of Hai Kou is qualified or not, we had do the antibiotic titer evaluation analisysed by cylinder-plate method and the Automatic inhibition zone determinato

15、r. The R value of T131156 and T110109 which had determined was 0.2659 and 0.2702, they were all less than 0.273. Comparison of two batches of drugs were significantly regression(P<0.01),no significant deviation from t

16、he</p><p>　　Key words：gentamicin sulfate；antibio tic titer；inhibition zone tester</p><p><b>　　1.前言</b></p><p>　　抗生素微生物效價測定是利用抗生素抗菌的程度，作為客觀指標來衡量抗生素有效成分的一種方法，是藥典檢定的常規(guī)方法，在國

17、際上通用。此方法符合臨床應(yīng)用的要求，能確定抗生素的醫(yī)療價值。隨著儀器設(shè)備的發(fā)展，部分抗生素可以用物理或化學(xué)的方法測定其含量，但微生物效價測定法依然作為抗生素效價的主要方法并被各國藥典所采用?？股匚⑸镄r有三種方法：管碟法、稀釋法、比濁法[1]。稀釋法一般用于測定藥物的 MIC，該方法未被藥典收載過；比濁法儀器設(shè)備要求較高，操作時菌種很容易被污染，所以一直也沒有被中國藥典采用；而管碟法卻是是國際通用法，靈敏度高，具有準確性重復(fù)性好，易

18、于操作等特點，被廣泛用于進行抗生素效價，其主要原理是將抗生素的標準品溶液和未知濃度的檢測品溶液，滴定到放置在含有敏感性試驗菌的菌層培養(yǎng)基上的鋼管里，經(jīng)過培養(yǎng)，形成一定大小的抑菌圈，測量抑菌圈的直徑進行抗生素效價。管碟法分為三種：一劑量法、二劑量法、三劑量法。一劑量法操作較繁瑣，《中國藥典》在1977年版后該方法已被淘汰。二劑量法屬于反應(yīng)平行線測定法，反應(yīng)平行線測定法的原理是根據(jù)標準品和供試品的劑量反應(yīng)呈線性關(guān)系，且在標準品與供試品所形成

19、的直線</p><p>　　無論采用哪種方法進行抗生素微生物效價，對操作環(huán)境的潔凈度都有一定的要求，即需對環(huán)境操作系統(tǒng)進行監(jiān)測。管碟法對抗生素微生物效價潔凈度要求為300000級【3】，我國GMP及國標GB/T16294-1996均以直徑為90mm平皿在0.5h內(nèi)的最大允許菌落數(shù)為各潔凈區(qū)的沉降菌限度標準。潔凈控制標準如下表：</p><p>　　表1 潔凈控制標準</p>

20、<p>　　如果潔凈區(qū)內(nèi)每個取樣點的沉降菌含量均小于相應(yīng)級別下相同測量時間的沉降菌最大允許含量，則該環(huán)境符合沉降菌潔凈度的要求，否則，應(yīng)當加強清潔和消毒，直到潔凈度符合標準。</p><p>　　在符合標準的環(huán)境操作系統(tǒng)下所得的實驗結(jié)果，需符合2010年版《中國藥典》的規(guī)定：標準品與供試品兩條直線應(yīng)相互平行(P>0.05)時，且可信限率<5%，實驗結(jié)果才是有效的；統(tǒng)計時，應(yīng)列舉管碟法中的原

21、始數(shù)據(jù)和數(shù)值范圍，將原始數(shù)據(jù)中的最高值減去最低值得出每一列的數(shù)據(jù)范圍，比率（R）=數(shù)值的最大范圍值/所以數(shù)值范圍的總和，R值不應(yīng)超過0.273【4】，R值是衡量效價測定的抑菌圈數(shù)據(jù)是否合理，如果超過了0.273，則需要檢查列中的最大范圍異常反應(yīng)。另規(guī)定，測定結(jié)果經(jīng)計算所得的效價，如低于估計效價的90%或高于估計效價的110%時，應(yīng)重新調(diào)整其估計效價進行試驗【5】。 </p><p>　　基于藥典對抗生素微生物效

22、價的標準，本實驗選用硫酸慶大霉素膠囊進行抗生素效價。硫酸慶大霉素膠囊內(nèi)容物為白色或類白色的粉末或顆粒，計算其稱樣量需先確定其平均裝量，藥典規(guī)定取藥品10粒，每粒裝量與平均裝量相比較，裝量差異限度應(yīng)在±10%以內(nèi)，超出裝量差異限度的不得多于2粒,并不得有1粒超出限度1倍【6】。</p><p>　　近年來，藥品的質(zhì)量問題所引發(fā)的事故越來越多，已經(jīng)是人類健康所關(guān)注的一重大問題?？股匦缕贩N不斷的涌現(xiàn)和種類越

23、來越多，臨床應(yīng)用也越來越廣，對該抗生素進行效價測定檢測是否符合藥典規(guī)定，對指導(dǎo)臨床用藥，保證藥物療效等方面具有重要的現(xiàn)實意義。</p><p><b>　　2. 材料與方法</b></p><p>　　2.1實驗材料與儀器設(shè)備</p><p><b>　　2.1.1實驗材料</b></p><p>

24、　　2.1.1.1 實驗菌種 </p><p>　　短小芽胞桿菌[CMCC（B）63202]</p><p>　　2.1.1.2 實驗藥品 </p><p>　　標準品：硫酸慶大霉素(批號201403,效價575.7u/mg,廣州市齊云生物技術(shù)有限公司)</p><p>　　供試品：硫酸慶大霉素普魯膠囊（樣1：批號 T131156， 樣2：

25、批號 T110109，海南普利制藥股份有限公司）</p><p>　　2.1.2培養(yǎng)基配方 </p><p>　　蛋白胨10g，牛肉膏3g ，氯化鈉5g ，瓊脂15～20g ，蒸餾水1000mL， 121℃高壓滅菌30min </p><p>　　2.1.3實驗試劑 </p><p>　　磷酸氫二鉀，磷酸二氫鉀，氫氧化鈉</p&g

26、t;<p>　　2.1.4實驗儀器 </p><p>　　表2 主要儀器設(shè)備信息</p><p><b>　　2.2實驗方法</b></p><p>　　2.2.1短小芽孢桿菌菌懸液的制備</p><p>　　2.2.1.1 菌種活化 </p><p&g

27、t;　　從-80℃冰箱中將裝有短小芽孢桿菌的塑料管取出，置于冰塊中直到塑料凍管內(nèi)部結(jié)冰全部液化，在超凈工作臺里將短小芽孢桿菌轉(zhuǎn)接到平板上，置于35℃-37℃的培養(yǎng)箱里培養(yǎng)24h。</p><p>　　2.2.1.2 菌種培養(yǎng) </p><p>　　將已活化好的菌種轉(zhuǎn)接到平板中，在35℃-37℃培養(yǎng)箱里培養(yǎng)7天。</p><p>　　2.2.1.3 菌懸液的制備 &

28、lt;/p><p>　　向已培養(yǎng)了7天的短小芽孢桿菌的平板加入2- 3mL無菌蒸餾水，用涂布棒將菌種洗下，轉(zhuǎn)移到滅過菌的錐形瓶里，置于4℃冰箱里保存?zhèn)溆谩?lt;/p><p>　　2.2.2培養(yǎng)皿的選擇</p><p>　　培養(yǎng)皿底部不平時，會使培養(yǎng)基厚度不均勻，培養(yǎng)基厚度大，抑菌圈半徑變小，培養(yǎng)基厚度小，抑菌圈半徑大【8】，容易造成實驗誤差，故應(yīng)該選擇底部平整，厚度均勻且

29、規(guī)格一樣的培養(yǎng)皿。選擇時，可將培養(yǎng)皿放在水平臺上，底部墊一層白紙，分別加入3-4mL的水，然后滴加藍色墨水，觀察藍色是否深淺一致，如顏色深淺一致則表示培養(yǎng)皿底部平整【9】。</p><p>　　2.2.3操作環(huán)境系統(tǒng)的監(jiān)測</p><p>　　操作環(huán)境系統(tǒng)的潔凈度采用沉降菌進行檢測。本次實驗用的是操作室分為兩部分，中間由玻璃門隔開，其中一部分為無菌操作室，另一部分為半無菌操作室，這兩部操作

30、室都設(shè)有紫外滅菌燈。將制備好的營養(yǎng)瓊脂倒在6平皿里，凝固后，將1個平板放在無菌操作室的超凈工作臺上，2個平板放在及無菌室里兩個不同的位置，剩下3個平板放在半無菌操作室的三個不同位置，分別打開平板30min以上，之后置于35℃-37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h。</p><p>　　2.2.4磷酸緩沖溶液的選擇</p><p>　　稱取磷酸氫二鉀5.59g，磷酸二氫鉀0.41g，加水蒸餾水1000m

31、L，制成磷酸緩沖液，用NaOH溶液調(diào)整其pH值。2010版的《中國藥典》規(guī)定效價硫酸慶大霉素用的磷酸緩沖溶液pH=7.8，且不添加任何物質(zhì)。但有文獻表明，硫酸慶大霉素微生物的效價測定，高劑量的抑菌圈直徑大小很難達到18-22mm，在pH7.8-8.8之內(nèi)，其抑菌圈的大小隨緩沖液pH值的增大而增大，且在緩沖液中加入4%以上的氯化鈉，直徑能達到18-22mm這個范圍【10】。為了選擇最適條件的磷酸緩沖液，本實驗做了兩組對照，一組pH值為7.

32、8不滴加NaCl與滴加NaCl的磷酸緩沖液，另一組pH值為8.4不滴加NaCl與滴加NaCl磷酸緩沖液。</p><p>　　2.2.5 平均裝量</p><p>　　傾出供試品硫酸慶大霉素膠囊的內(nèi)容物迅速稱量，記錄每粒膠囊的重量，每個批號分別稱量10粒，并計算每個批號的平均裝量。</p><p>　　表3 供試品的平均裝量</p><p&

33、gt;　　2.2.6標準品與供試品溶液的制備</p><p>　　抗生素吸濕性很強，稱量的時候很容易吸收操作環(huán)境空氣中的水分而影響精確度，稱量時要用精確度達到1/10萬的分析天平快速一次性稱量，稱量完后立即將藥品蓋好，以免吸水。藥品的稱樣量可根據(jù)海南普利制藥有限公司質(zhì)檢部提供的公式計算：</p><p>　　稱樣量=（R×23.5×638u/mg×平均裝量）／

34、標示量。</p><p><b>　　R：一般取值為1</b></p><p>　　23.5×638u/mg：是指藥品要達到15000個單位</p><p>　　2.2.6.1 標準品溶液的制備</p><p>　　標準品的標示量是575.7u/mg，要達到15000個單位需要稱量0.026g。稱量前，先將標準

35、品從4℃冰箱取出，置于室內(nèi)待其溫度與室溫平衡后，再稱量0.026g用50mL容量瓶加超純水定容至50mL。充分混勻后，取2mL標準品溶液分別用100mL和50mL裝量的磷酸緩沖液稀釋成高濃度為12u/mL、低濃度為6u/mL的標準溶液，稀釋前，先將已配制好的磷酸緩沖液潤洗要稀釋用的容量瓶，量取過濾液的吸管要用過濾液潤洗2-3次。</p><p>　　2.2.6.2 供試品溶液的制備</p><

36、p>　　樣1的平均裝量是0.2726g,樣2的平均裝量是0.2675g，代入以上公式得樣1稱樣量=0.4089g，樣2稱樣量=0.40125g。重新拿新的膠囊進行稱量，避免藥品吸收水分而影響結(jié)果，稱量好后分別裝入50mL容量瓶加超純水定容至50mL,并用濾紙過濾收集液體，收集液體用的器皿要用過濾液潤洗。標準品和供試品所用的磷酸緩沖液應(yīng)是同一瓶，防止?jié)舛然騪H值不一樣而影響實驗結(jié)果。稀釋時和標準品操作方法一樣，需要用磷酸緩沖液潤洗要

37、稀釋用的容量瓶和量取過濾液的吸管，分別取2mL標準品溶液分別用100mL和50mL裝量的磷酸緩沖液稀釋成高濃度為12u/mL、低濃度為6u/mL的樣液。</p><p>　　2.2.7雙碟的制備</p><p>　　2.2.7.1試驗菌濃度的確定 </p><p>　　由于實驗過程中是用平板培養(yǎng)試驗菌，沖洗時沒有固定無菌水的用量，在制備菌層培養(yǎng)基時無法確定試驗菌的濃

38、度，所以可通過加最適量的菌懸液來取得最佳結(jié)果。200mL培養(yǎng)基加菌量范圍是3.5mL-5.5mL【11】,故可先測試培養(yǎng)基加菌量分別為3.5mL、4mL、4.5mL、5mL所形成的抑菌圈效果哪個最好，選出最適加菌量。</p><p>　　2.2.7.2制備底層培養(yǎng)基</p><p>　　從無菌操作室里選擇一個較平的超凈工作臺，如果超凈工作臺面凹凸不平，可以在操作臺上放置一塊大的玻璃板，以保

39、證放置平皿的位置平整。加注底層培養(yǎng)基前，先將滅過菌的培養(yǎng)皿底部平均劃分為4個區(qū)域，分別標注上標準品和供試品的高低濃度，之后用10mL的滅菌大口移液管吸取20mL培養(yǎng)基加注到平整培養(yǎng)皿里，作為底層培養(yǎng)基。加注時避免培養(yǎng)基溫度太低，防止培養(yǎng)基內(nèi)部結(jié)塊而影響培養(yǎng)基表面水平。</p><p>　　2.2.7.3制備菌層培養(yǎng)基</p><p>　　將已滅菌的200mL裝量的培養(yǎng)基加熱融化后冷卻，注意

40、培養(yǎng)基溫度過高會使菌種致死，導(dǎo)致無圈或者抑菌圈破圈。細菌一般是冷卻到48℃-50℃，芽孢可冷卻到60℃左右【12】，加入已經(jīng)制備好的短小芽孢桿菌菌懸液3.5mL-5.5mL,搖勻。用滅菌的10mL大口移液管吸取含有菌液的培養(yǎng)基5mL，注入到底層培養(yǎng)基上，輕輕晃動，使含有菌液的培養(yǎng)基均勻的平鋪在底層培養(yǎng)基上，置超凈工作臺上待凝固備用。</p><p>　　2.2.8放置牛津杯</p><p>

41、;　　用鑷子將已滅菌的牛津杯等距離的放置到制備好的雙碟培養(yǎng)基上，放置后，靜置5-10min，再滴加標準品和供試品溶液。</p><p>　　2.2.9滴加抗生素</p><p>　　每批供試品至少準備6個雙碟，用滅過菌的膠頭滴管滴加抗生素溶液，滴加前先用滴加液潤洗2-3次。按已經(jīng)劃分好的區(qū)域滴加，滴加順序為SH→TH→SL→TL，也可以是SL→TL→TH→SH（S：標準品，T：供試品，H：

42、高濃度，L：低濃度），但由于抑菌圈測定儀系統(tǒng)固定的檢測順序是TH→SH→TL→SL,故本次實驗的添加順序沒有按藥典規(guī)定的順序添加，而是根據(jù)抑菌圈測定儀檢測順序TH→SH→TL→SL添加抗生素，最終都不會影響檢測結(jié)果。滴加的溶液應(yīng)與鋼管口平滿，如果過滿，需用膠頭滴管輕微吸取多余的部分，且滴加抗生素的時間間隔不能太長，會引起抗生素擴散的時間不同而影響實驗結(jié)果。滴加時膠頭滴管如果有氣泡或開口端有液體殘留時，應(yīng)重新吸取溶液滴加，避免滴加過程氣泡

43、破裂或濺落使培養(yǎng)基表面破圈。滴加完畢后，輕輕的將雙碟平穩(wěn)放入35℃-37℃培養(yǎng)箱，放置雙碟時應(yīng)保持一定的距離，以免受熱不均勻影響抑菌圈的大小，最后用滅過菌的陶瓷蓋蓋住雙碟，培養(yǎng)16-18h【13】。</p><p>　　2.2.10抑菌圈測定儀的使用</p><p>　　檢查：檢查軟件鎖、掃描儀數(shù)據(jù)連接線均已正確連接上電腦的USB 接口，掃描儀的安全鎖均處于開鎖狀態(tài)且掃描儀電源處于打開狀態(tài)

44、；</p><p>　　打開：插上測定儀的密鑰，在桌面上找到抑菌圈自動測定的快捷方式，點擊打開；</p><p>　　設(shè)置：打開設(shè)置頁面，將成像方式選擇掃描儀，選擇六皿；</p><p>　　標定：選擇標定中的掃描時自動標定，系統(tǒng)會自動根據(jù)掃描的分辨率將圖像尺寸與實際大小進行對應(yīng)；</p><p>　　掃描及分析：用酒精擦掉平皿底部劃分的區(qū)域

45、，分別在雙碟邊緣上標出標準品的位置，然后選出6個雙碟按一定順序安置在掃描儀上進行掃描，調(diào)整好每個目標區(qū)的大小及位置，選擇“六皿抑菌圈正片”，點擊執(zhí)行，則抑菌圈的直徑大小均測量出來。</p><p>　　效價分析：點擊效價分析，接著點擊統(tǒng)計即可得出結(jié)果統(tǒng)計表。</p><p><b>　　3.結(jié)果與分析</b></p><p>　　3.1操作環(huán)境

46、系統(tǒng)的監(jiān)測</p><p>　　表4 沉降菌落數(shù)</p><p>　　從上表4中可知，無菌操作室沉降菌平均菌落數(shù)為0，半無菌操作室平均菌落數(shù)不到1，操作環(huán)境系統(tǒng)達到100級，而抗生素微生物效價要求300000潔凈區(qū)，操作環(huán)境系統(tǒng)遠遠符合潔凈度要求。</p><p><b>　　3.2緩沖體系</b></p><p>

47、　　在不同試驗條件下的磷酸緩沖液所形成的抑菌圈直徑大小如下：</p><p>　　表5 磷酸緩沖液pH=7.8的抑菌圈直徑</p><p>　　表6中數(shù)值顯示，pH=8.4的磷酸緩沖液比pH=7.8的磷酸緩沖液所形成的抑菌圈直徑大1-2mm，且數(shù)值大小及差異范圍均比pH=7.8的大。pH=8.4且不滴加NaCl的磷酸緩沖液比率(R)= 0.890/(0.695 + 0.890+ 0.46

48、5+ 0.715)=0.322>0.273；滴加NaCl的磷酸緩沖液比率（R）=0.959/(0.959 + 0.834+ 0.874+ 0.73)=0.282>0.273，pH=8.4的抑菌圈數(shù)值比率均大于0.273，數(shù)值存在異常值，在是否滴加NaCl的數(shù)值范圍上與pH=7.8的情況一樣，不滴加NaCl的磷酸緩沖液比滴加NaCl的磷酸緩沖液所形成的抑菌圈直徑小，但數(shù)值大小差異也小。兩個不同條件的磷酸緩沖液統(tǒng)計結(jié)果表明，pH

49、=8.4所形成的抑菌圈直徑大，但出現(xiàn)異常值的機率也大，pH=7.8且不滴加NaCl的磷酸緩沖液所形成的抑菌圈數(shù)值符合藥典規(guī)定，效果最佳。</p><p><b>　　3.3 平均裝量</b></p><p>　　樣1平均裝量為0.2726，樣2平均裝量為0.2675，每個批次的每粒裝量與各平均裝量大小相比范圍如表7：</p><p>　　表7

50、 每粒裝量與平均裝量相比大小范圍</p><p>　　慶大霉素膠囊每粒裝量與其平均裝量相比較所得的結(jié)果，所有裝量差異限度都在10%以內(nèi)，符合2010年版《中國藥典》規(guī)定。</p><p><b>　　3.4試驗菌濃度</b></p><p>　　試驗菌濃度過低,抑菌圈邊緣會模糊不清; 試驗菌濃度過高會使抑菌圈太小而影響抗生素效價【14】。不同加

51、菌量所形成的抑菌圈直徑大小及清晰度如下：</p><p>　　表8 菌懸液用量與抑菌圈直徑及清晰度的關(guān)系</p><p>　　表8數(shù)據(jù)表明，抑菌圈直徑隨菌懸液用量的增加大小變化不大，均在18-22mm范圍內(nèi)。加菌量為4.5mL時，抑菌圈邊緣很清晰，應(yīng)是最適加菌量。</p><p><b>　　3.5樣品測試結(jié)果</b></p>

52、<p>　　3.5.1實驗結(jié)果圖</p><p>　　圖1 樣1抑菌圈</p><p>　　圖2 樣2抑菌圈</p><p>　　3.5.2實驗結(jié)果統(tǒng)計</p><p>　　在結(jié)果統(tǒng)計前，需檢查抑菌圈直徑大小是否存在異常值，將最大值范圍值和所有數(shù)值范圍的總和代入公式：比率（R）=數(shù)值的最大范圍值/所以數(shù)值范圍的總和，當比率

53、（R）<0.273時，測定值是合理的。根據(jù)2010年版《中國藥典》規(guī)定，藥品的測定效價應(yīng)高于估計效價的90%及低于估計效價的110%，兩個批次的供試品估計效價都是638u/mg，即當測定效價值在574.2 u/mg -701.8u/mg這個范圍內(nèi)，所檢測的藥品是合格的。</p><p>　　表9 樣1結(jié)果統(tǒng)計表</p><p>　　發(fā)報告日期：04/07/2014

54、14:40:48</p><p>　　實驗內(nèi)容：硫酸慶大霉素膠囊效價測定 </p><p>　　檢品名稱：慶大霉素普魯卡因膠囊</p><p>　　批號： T131156</p><p>　　樣1統(tǒng)計表顯示：比率（R）=數(shù)值范圍的最大值/所有數(shù)值的范圍總和=0.519/1.952=0.2659，比率0.2659未超過0.273限值，即表

55、中所有抑菌圈直徑測定值均是合理的；變異來源中的回歸比較顯著( P < 0.0 1 )，偏離平行不顯著 (P > 0.0 5 )，即標準品和檢測品呈平行直線關(guān)系；平均可信限率Pt的FL%= 4.2428 %<5% ，實驗結(jié)果成立。本實驗的樣1的慶大霉素膠囊測定效價是662.0827 u/mg，高于估計效價的90%且低于估計效價的110%，符合2010年版《中國藥典》規(guī)定，該藥品合格。</p><p&g

56、t;　　表10 樣2 結(jié)果統(tǒng)計表</p><p>　　發(fā)報告日期：04/07/2014 12:16:57</p><p>　　實驗內(nèi)容：硫酸慶大霉素膠囊效價測定</p><p>　　檢品名稱：慶大霉素普魯卡因膠囊</p><p>　　批號： T110109</p><p>　　樣2結(jié)果統(tǒng)計表中顯

57、示：比率（R）=數(shù)值范圍的最大值/所有數(shù)值的范圍=0.500/1.850=0.2702，小于0.273,故統(tǒng)計表中所有測定值均是合理的；回歸比較顯著( P < 0.0 1 )，偏離平行不顯著 (P > 0.0 5 )，標準品和檢測品呈平行直線關(guān)系,平均可信限率Pt的FL%= 3.4479%<5% ，實驗結(jié)果成立。樣2的測定效價是646.1536 u/mg，高于估計效價的90%且低于估計效價的110%，符合2010年版《

58、中國藥典》規(guī)定，該藥品合格。</p><p><b>　　3.6 討論</b></p><p>　　抗生素微生物效價測定的操作步驟比較繁瑣，影響因素較多，任何一個環(huán)節(jié)操作不當或粗心大意都造成很大的誤差，甚至會導(dǎo)致整個實驗的失敗。如加菌量過少，抑菌圈邊緣模糊，加菌量過多，抑菌圈直徑變小；磷酸緩沖溶液pH值過高或過低，對效價結(jié)果影響也很大；試驗菌的濃度、抗生素稱樣量、培養(yǎng)

59、溫度、培養(yǎng)時間等也會有所影響，除了這些因素外，可能還存在其他因素，只有不斷進行具體實驗研究，才能不斷認識和掌握問題所在和找到解決方法，使實驗結(jié)果更接近真實值，誤差更小。</p><p><b>　　4.結(jié)論</b></p><p>　　用管碟法對硫酸慶大霉素膠囊進行抗生素效價，得出了其最適的實驗方案：加菌量4.5mL,緩沖液pH=7.8且不添加任何物質(zhì)，在36℃培養(yǎng)箱

60、里培養(yǎng)16個h，得到抑菌圈邊緣較清晰，標準品高劑量的抑菌圈直徑都在18-22mm范圍內(nèi)。經(jīng)過抑菌圈測定儀測定供試品兩個批次的抗生素的比率（R）都小于0.273，回歸比較顯著( P < 0.0 1 )，偏離平行不顯著 (P > 0.0 5 )，平均可信限率小于5%，符合2010年《中國藥典》的規(guī)定，這兩個批次的慶大霉素膠囊均合格，也證實了抗生素效價的準確性及有效性。</p><p><b>　

61、　致謝</b></p><p>　　論文在一個月的時間里不斷的修改，終于畫上了完美的句號。在這，我非常感謝我的導(dǎo)師—吳**老師。</p><p>　　本次論文課題學(xué)校沒有開設(shè)過，大三的時候就聯(lián)系吳老師說要做藥品檢測方面的實驗，想提前做畢業(yè)論文，吳老師很熱情很爽快的答應(yīng)了。但很慚愧，由于種種原因，事隔一年才開始動手，辜負了老師的期望。在最后的這幾個月里，基于吳老師的精心講解與耐心

62、指導(dǎo)下，實驗做的很順利，所得的實驗結(jié)果很樂觀。論文從初稿到定稿，吳老師不厭其煩的指導(dǎo)和幫助我反復(fù)修改，直到順利完成。跟吳老師學(xué)習的這段時間，讓我受益匪淺，從吳老師身上不僅學(xué)到了很多專業(yè)知識，更感受到他在工作中兢兢業(yè)業(yè)，在生活中平易近人，他嚴謹?shù)闹螌W(xué)態(tài)度和忘我的工作精神都值得我去學(xué)習，非常感謝吳老師無私的幫助，感謝您的默默奉獻，您的盡職盡責，在這里請接收我誠摯的謝意。</p><p><b>　　參考文獻

63、</b></p><p>　　[1] 郭福慶.抗生素微生物效價檢定法及其影響因素.天津藥學(xué)，2000,12（4）：53.</p><p>　　[2] 金錄勝.管碟法測定抗生素效價中抑菌圈圓正及清晰度的控制.中國獸藥雜志,1992,27（2）：38.</p><p>　　[3] 常任厚.抗生素效價測定中影響實驗結(jié)果的因素探討.江蘇藥學(xué)與臨床研究,1999,

64、7（4）：60.</p><p>　　[4] 潘友文.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)工業(yè)微生物實驗室質(zhì)量管理與驗證技術(shù).北京.中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社,2004:107.</p><p>　　[5] 國家藥典委員會.抗生素微生物檢定法.中華人民共和國藥典[ M ] .二部.北京： 化 學(xué)工業(yè)出版社, 2010： 附錄93 </p><p>　　[6] 國家藥典委員會.膠囊劑.中華人民共和國

65、藥典[ M ] .一部.北京： 化 學(xué)工業(yè)出版社,2010：附錄Ⅰ L </p><p>　　[7] 郭家瑞,王衛(wèi)國,李 磊, 何泓良.慶大霉素研究概述.海峽藥學(xué),2009，21 （10）：7.</p><p>　　[8] 黃英.管碟法測定抗生素效價的影響因素分析.中國藥師,2005,8（8）：689.</p><p>　　[9] 郭家瑞,王衛(wèi)國. 慶大霉素研概述

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