抗生素效價的測定

1、抗生素效價微生物檢定法,趙永成 生工1001 4104100139,1.概述,一、抗生素的概念及抗生素的生物檢定 抗生素是由微生物所產(chǎn)生的極微量便具有選擇性地殺死或抑制其他病原微生物生長的一類天然有機化合物。 抗生素的生物檢定是以抗生素對微生物的抗菌效力作為效價的衡量標(biāo)準(zhǔn)。,,一、抗生素的效價和單位 抗生素的含量用效價和單位表示。該詞有時不加區(qū)別統(tǒng)稱為效價單位。

2、 效價（ｐotency），指檢品的實際單位數(shù)與其標(biāo)示量的比值。常表示為效價的百分?jǐn)?shù)。 單位（unit,u）單位是衡量抗生素有效成分的具體尺度。,,１、重量單位 以抗生素的生物活性部分重量作單位１微克（ｕｇ）＝１單位，１毫克＝１０００單位。２、類似重量單位 以特定的純粹抗生素鹽類的重量作為１單位。如純粹金霉素鹽酸鹽及四環(huán)素鹽酸鹽（包括無生物活性的鹽酸根在內(nèi)）１微克（ｕｇ）＝１單位，１毫克＝１０

3、００個單位。這是根據(jù)國際使用習(xí)慣而來的。３、質(zhì)量折算單位 以特定的純抗生素鹽的質(zhì)量為單位而加以折算。青霉素0.6ug為1單位４、特定單位 以特定的抗生素標(biāo)準(zhǔn)品的某一質(zhì)量定為一單位。,微生物發(fā)的分類,稀釋法濁度法雙碟法,,,2、濁度法系利用抗生素在液體培養(yǎng)基中對試驗菌生長的抑制作用，通過測定培養(yǎng)后細菌濁度值的大小，比較標(biāo)準(zhǔn)品與供試品對試驗菌生長抑制的程度，以測定供試品效價的種方法。,,3、管碟法：是利用抗生素在含敏感試驗菌的

4、瓊脂培養(yǎng)基中的球面擴散滲透作用，從而形成一定的抑菌圈。通過瓊脂培養(yǎng)基，可觀察并測量出抑菌圈的大小。,管碟法測定抗生素效價原理和方法,一 原理 在一定的抗生素濃度范圍內(nèi)，對數(shù)劑量(濃度)與抑菌圈的表面積或直徑成正比，可以得出一條曲線。 抗生素濃度換算成對數(shù)，則抑菌圈直徑與抗生素對數(shù)成直線關(guān)系,管碟法的材料,一，儀器菌種 培養(yǎng)基 培養(yǎng)皿 牛角杯 陶瓦圓蓋二，試劑無菌生理鹽水 ph6.0的磷酸緩

5、沖液 青霉素標(biāo)準(zhǔn)品儲備液 青霉素標(biāo)準(zhǔn)品使用液,管碟法測定操作,1. 試驗用菌液金黃色葡萄球菌懸液：取金黃色葡萄球菌的營養(yǎng)斜面培養(yǎng)物，接種于營養(yǎng)瓊脂斜面上，在35~37℃培養(yǎng)20h到22h，；臨用前用水或者滅菌生理鹽水溶液將菌苔洗下，備用,2 供試品及標(biāo)準(zhǔn)品的配制,標(biāo)準(zhǔn)品與樣品從冰箱取出后，使與室溫平衡。供試品應(yīng)放于干燥器內(nèi)至少30min方可稱取。稱量最好為一次取樣稱量，動作迅速，不得反復(fù)稱取，取樣后立即將稱量瓶瓶蓋蓋好，以免吸水。

6、 標(biāo)準(zhǔn)品的稱量最好用1/100,000克的分析天平，樣品稱量不得低于1/10,000克的分析天平。天平中的干燥加入劑應(yīng)保持經(jīng)常注意更換。 稱量結(jié)束后，超聲波處理后的磷酸緩沖液，定容至刻度，過濾并稀釋。,,雙碟的制備： 取內(nèi)徑90mm、高16—17mm的平底雙碟； 注入加熱融化的培養(yǎng)基20ml，使在碟底內(nèi)均勻攤布，放置水平臺上使凝固，作為底層。 另取培養(yǎng)基

7、適量加熱融化后，放冷至48－50℃（芽孢可至60℃），加入規(guī)定的試驗菌懸液適量（能得清晰的抑菌圈為度。）二劑量法標(biāo)準(zhǔn)品溶液的高濃度所致的抑菌圈直徑在 18－24 mm。,（二）抑菌圈的形成,在平板底部四邊，分別對角注明“SH”、“SL” 和“UH”、“UL”標(biāo)記將不銹鋼小管(俗稱為牛津杯)放置在含敏感試驗菌的瓊脂培養(yǎng)基上。,th,sl,uh,,以無菌滴管分別在每個牛津杯內(nèi)加入相應(yīng)的抗生素溶液至滿但不溢出管外且四杯內(nèi)液面高度相同，蓋

8、上平皿蓋，靜置30分鐘。,,將培養(yǎng)基置入適宜試驗菌生長的培養(yǎng)箱中，瓊脂培養(yǎng)基中的試驗菌開始生長。,,,抑菌圈直徑大小與抗生素濃度相關(guān)；比較抗生素標(biāo)準(zhǔn)品與檢品的抑菌圈大小，可計算出抗生素的效價。,計算檢品的效價,求出W和VW=（SH+TH）-（SL+TL） V=（TH+TL）-（SH+SL）TH供試品高劑量的抑菌圈TL供試品低劑量的抑菌圈SH標(biāo)準(zhǔn)品高劑量的抑菌圈SL標(biāo)準(zhǔn)品低劑量的抑菌圈,,求出θ=D· log（IV