源自動物糞便的Bt分離鑒定及對雞球蟲的作用效應研究.pdf

1、雞球蟲病是一種重要的寄生蟲病，分布廣，感染率高，常發(fā)生在15-50日齡的雛雞，若不能有效控制，其現(xiàn)場發(fā)病率可達50％-70％，死亡率可達20％-30％，嚴重爆發(fā)時其死亡率可高達80％。據(jù)統(tǒng)計，全球養(yǎng)雞業(yè)每年僅球蟲病造成經(jīng)濟損失就達80億美元。目前對該病的防治仍以化學合成藥及抗生素為主，但由于長期應用，易產(chǎn)生抗藥性，且在畜產(chǎn)品中因藥物殘留而影響人類的健康。因此，人們將目光轉(zhuǎn)向非抗生素防治研究。 蘇云金桿菌(Bacillus thu

2、ringiensis，簡稱Bt)晶體蛋白是廣泛使用的微生物殺蟲劑，與化學藥物相比較，由于其對脊椎動物無毒性而選擇性地作用于害蟲、對環(huán)境無污染且能通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)應用于農(nóng)作物而持久地發(fā)揮植物保護作用，這些毒素已被應用于有機農(nóng)業(yè)。近些年來的研究證實，其對動物寄生蟲也有強效作用。 有關(guān)Bt對雞球蟲的作用，國內(nèi)外尚未見報道。為了尋求新的蘇云金桿菌菌株，本研究對動物園動物糞便中Bt進行調(diào)查。從福建省福州市動物園和三明市動物園41種動物(其中

3、哺乳動物33種、禽類8種)50個糞便樣品中共分離到253株芽胞桿菌，其中有15株含有晶體蛋白，確定為Bt，Bt分離率為30％。在所分離的糞便樣品中，采自草食動物糞便的Bt分離率最高，達35.5％；其次是雜食動物糞便的Bt分離率為25％，肉食性動物糞便的Bt分離率最低，僅18.2％。結(jié)果表明，植物源日糧動物糞便中的Bt含量較高。 采用單卵囊分離技術(shù)，從福建省莆田市、福清市和連江縣等地雞場采集的病雞盲腸內(nèi)容物樣品中，分離獲得3株(P

4、T0705、FQ0709、LJ0711)柔嫩艾美耳球蟲(Eimeria tenella)純種；為比較這三種蟲株對雛雞的毒性，分別用1×104、5×104和10×104個孢子化卵囊的劑量感染14日齡和21日齡健康無球蟲感染雛雞，通過臨床表現(xiàn)、死亡率、增重情況、病變計分等指標比較，發(fā)現(xiàn)PT0705蟲株呈現(xiàn)最強毒性。 用雞胚感染柔嫩艾美耳球蟲子孢子作為蘇云金桿菌晶體蛋白抗球蟲活性測定的模型。每一雞胚接種1×104個子孢子，于感染前24

5、h注入蘇云金桿菌晶體蛋白，以不同蘇云金桿菌晶體蛋白對雞胚卵囊所產(chǎn)生的抑制率的差異，判定蘇云金桿菌的活性。結(jié)果表明，各種蘇云金桿菌晶體蛋白對球蟲卵囊都有一定抑制作用，其中蘇云金桿菌BT6菌株作用尤其明顯。根據(jù)實驗結(jié)果，我們認為本方法具有操作簡單，結(jié)果可信及成本低廉的特點，可作為抗球蟲蘇云金桿菌的篩選方法。 為比較蘇云金桿菌晶體蛋白和化學抗球蟲藥對雞球蟲病的療效。將50只雛雞隨機均分為5組，Ⅰ組為無感染不用藥空白對照組，Ⅱ-Ⅳ組各雞

6、均感染，每只雞人工感染柔嫩艾美耳球蟲PT0705卵囊10×104個，Ⅱ組為不用藥對照組，Ⅲ組為蘇云金桿菌晶體蛋白組，Ⅳ組為地克珠利組，Ⅴ組為氨丙啉組，觀察效果。蘇云金桿菌晶體蛋白組與地克珠利組和氨丙啉組的抗球蟲指數(shù)(ACI)分別為202.3、184.1和128.2，說明蘇云金桿菌晶體蛋白的抗球蟲效果明顯優(yōu)于這兩種化學藥物，其中地克珠利仍屬高效抗球蟲藥，但氨丙啉的ACI僅為128.2，為低效抗球蟲藥；Ⅲ組雛雞平均增重量為458.9 g，經(jīng)

7、t檢驗，與Ⅰ組、Ⅳ組比較差異顯著(p<0.05)，與Ⅱ組、Ⅴ組比較差異極顯著(p<0.01)。試驗表明，蘇云金桿菌晶體蛋白對雛雞球蟲病有防治作用，并有促進雛雞生長的作用。 為了解BT6菌株的生物學特性，對其進行了形態(tài)學、生理生化指標研究；通過PCR-RFLP鑒定體系對其cry基因型進行分析。結(jié)果表明：該菌株含有cry1 Aa，cry1 Ba，cry1 Ea和cry1 Ia類基因。 所有結(jié)果證明，蘇云金桿菌BT6是雞球蟲的