雞球蟲多價(jià)卵黃抗體IgY的制備及其抗球蟲效果評(píng)價(jià).pdf

1、雞球蟲病(Coccidiosis)主要由艾美耳屬(Eimeria)的腸道原生寄生蟲引起,是目前嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)的寄生蟲疾病之一。我國(guó)作為一個(gè)養(yǎng)雞大國(guó),雞球蟲病嚴(yán)重制約了我國(guó)養(yǎng)雞業(yè)的發(fā)展。雞球蟲病防治一直以藥物為主,但藥物的長(zhǎng)期廣泛使用,出現(xiàn)了耐藥蟲株和食品中抗球蟲藥物殘留等問(wèn)題,危害到人們的身體健康,而昂貴的新藥開發(fā)費(fèi)用和嚴(yán)格的藥物殘留標(biāo)準(zhǔn)等原因,使抗球蟲藥的研制和使用受到了極大的限制。很多學(xué)者試圖從免疫的角度來(lái)預(yù)防該病,如使用活疫苗、強(qiáng)

2、毒活疫苗等,但疫苗的使用會(huì)出現(xiàn)毒力返強(qiáng)和容易致病等問(wèn)題,因此急需開發(fā)無(wú)藥物殘留且安全可靠的綠色抗球蟲產(chǎn)品。近年來(lái),隨著特異性卵黃抗體在動(dòng)物疾病方面的成功應(yīng)用,通過(guò)抗球蟲的卵黃抗體防治球蟲病成為球蟲病防控的新途徑,本文利用球蟲活卵囊免疫產(chǎn)蛋母雞,將制備的抗球蟲卵黃抗體作為飼料添加劑飼喂雛雞,使雛雞產(chǎn)生一定程度的被動(dòng)免疫保護(hù),為進(jìn)一步在臨床上利用卵黃抗體防治雞球蟲病奠定了基礎(chǔ)。
　　 1、抗雞球蟲多價(jià)卵黃抗體IgY的制備與鑒定

3、>　　 將擴(kuò)增純化的柔嫩、巨型、早熟艾美耳球蟲活卵囊按照一定的比例混合為免疫原,對(duì)60日齡蛋雞進(jìn)行口服免疫,共免疫六次。每次免疫前采集雞外周血液分離血清,產(chǎn)蛋后每隔一段時(shí)間取蛋分離卵黃抗體,用建立的間接ELISA方法進(jìn)行血清和雞蛋抗體水平的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)。對(duì)飽和硫酸銨法提取IgY的最適水稀釋倍數(shù)和最適pH值進(jìn)行了優(yōu)化,建立了雞蛋中IgY的提取及純化方法。通過(guò)SDS-PAGE電泳法對(duì)提純的抗球蟲IgY進(jìn)行純度測(cè)定,通過(guò)ELISA方法對(duì)IgY的

4、理化穩(wěn)定性進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明,卵囊首免后雞血清中球蟲抗體逐漸上升,二免后15d血清抗體達(dá)到較高水平,五免后出現(xiàn)短暫時(shí)間內(nèi)的小幅度下降,六免后15d達(dá)到峰值。蛋中抗體五免時(shí)已經(jīng)處于較高水平,六免加強(qiáng)免疫后,抗體水平穩(wěn)步上升。采用飽和硫酸銨法提取IgY時(shí)卵黃液的最佳稀釋倍數(shù)9倍,最適pa為5.1。SDS-PAGE分析表明,提純的卵黃抗體由70KDa左右的重鏈和40KDa左右的輕鏈組成,純度達(dá)98％,效價(jià)達(dá)1:140000/mg,理化穩(wěn)定性檢

5、測(cè)表明提取的卵黃抗體具有良好的熱穩(wěn)定性和酸堿穩(wěn)定性。通過(guò)提取后冷凍干燥,共計(jì)獲得145g的卵黃抗體,為開展實(shí)驗(yàn)室和田間抗球蟲評(píng)價(jià)奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
　　 2、雞球蟲多價(jià)卵黃抗體IgY抗球蟲效果評(píng)價(jià)
　　 將已制備的純度及生物學(xué)活性均較好的抗球蟲卵黃抗體凍干粉按照0.01％、0.02％、0.05％、0.1％、0.5％、1％的濃度添加到預(yù)混飼料中飼喂1日齡黃羽肉雞,連續(xù)飼喂10d,同時(shí)設(shè)立未添加陰性、未添加陽(yáng)性和鹽霉素防治對(duì)

6、照組,每組20只雞。于10日齡時(shí),除未添加陰性對(duì)照組外每組每雞經(jīng)嗉囊接種1×104個(gè)E.tenella孢子化卵囊,8 d后稱重?fù)錃?對(duì)各組的存活率、相對(duì)增重率、病變減少率、相對(duì)卵囊產(chǎn)量和抗球蟲指數(shù)(ACI)等指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,比較免疫保護(hù)效果。結(jié)果表明,綜合各項(xiàng)指標(biāo),1％IgY添加組、0.5％。IgY添加組免疫保護(hù)力稍低于藥物對(duì)照組,但均顯著好于其他各添加組;飼喂IgY能使雞體產(chǎn)生顯著的被動(dòng)免疫保護(hù)力,雖然用IgY進(jìn)行抗球蟲免疫預(yù)防要比