雞卵黃IgY抗體在惡性瘧疾診斷中的應(yīng)用研究.pdf

1、瘧疾是全球最嚴(yán)重的三大傳染病之一，威脅33億居住在熱帶及亞熱帶地區(qū)人口的健康。由于早期發(fā)現(xiàn)和治療不及時(shí)等因素已嚴(yán)重阻礙了對(duì)瘧疾的防控，因此建立精確快速的診斷是有效控制瘧疾的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。目前應(yīng)用的惡性瘧疾快速診斷方法由于敏感性低于鏡檢法、特異性不高、易與類(lèi)風(fēng)濕因子發(fā)生交叉反應(yīng)且對(duì)儲(chǔ)存條件要求苛刻等原因，不能滿(mǎn)足實(shí)際應(yīng)用的需要。本論文針對(duì)上述問(wèn)題，首次將人工隨機(jī)重組多表位技術(shù)與禽類(lèi)IgY抗體技術(shù)相結(jié)合，設(shè)計(jì)了一種全新的惡性瘧疾診斷方法。通過(guò)構(gòu)

2、建隨機(jī)串聯(lián)人工多表位原核表達(dá)文庫(kù)，經(jīng)高通量篩選獲得重組多表位抗原M．RC Ag—1和M．RC Ag—2，經(jīng)免疫萊航雞，誘導(dǎo)產(chǎn)生了極強(qiáng)的體液免疫反應(yīng)，獲得的卵黃IgY抗體能夠有效識(shí)別天然瘧原蟲(chóng)。以anti—M．RC Ag—1和anti—M．RC Ag—2的IgY抗體建立的雙抗體夾心ELISA檢測(cè)方法，對(duì)M．RC Ag標(biāo)準(zhǔn)品的檢測(cè)極限達(dá)到1.95ng/ml，對(duì)培養(yǎng)的混合期和早期同步化處理的惡性瘧原蟲(chóng)檢測(cè)時(shí)，最低檢出感染率分別為0.0001％

3、和0.001％；32例經(jīng)顯微鏡檢診斷為惡性瘧疾感染的患者全血中，用雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)呈抗原陽(yáng)性者為56.7％。此外，快速檢測(cè)試紙條的試制品，對(duì)M．RC Ag標(biāo)準(zhǔn)品的檢測(cè)極限達(dá)到10ng/ml，對(duì)培養(yǎng)的混合期惡性瘧原蟲(chóng)蟲(chóng)體的最低檢出率達(dá)到0.5％。本研究還優(yōu)化了卵黃IgY抗體的層析純化條件，比較不同佐劑的免疫效果及對(duì)IgY得率的影響，為最終建立瘧疾早期快速診斷技術(shù)的新型研制平臺(tái)，也為研制其它疾病尤其是突發(fā)傳染性疾病的快速早期診斷試