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文檔簡介
1、卵黃免疫球蛋白,又稱卵黃抗體,是禽類血清中的IgG進入到卵黃中而形成的一類免疫球蛋白。由于雞屬于非哺乳動物,與人類親緣關(guān)系較遠,因此對人類的病原體及哺乳動物高度保守蛋白質(zhì)能產(chǎn)生強免疫應(yīng)答。另外,IgY的熱、酸穩(wěn)定性好,4℃保存5年或室溫放置6個月,抗體活性仍無明顯下降。這種雞源的特異性多克隆抗體(IgY)選材方便、提取較易、又可規(guī)?;a(chǎn),在食品及口服被動免疫治療領(lǐng)域有著巨大的應(yīng)用前景。 隱孢子病是由隱孢子蟲弓l起的一種以腹瀉為
2、主要臨床表現(xiàn)的人獸共患原蟲病。呈世界性分布,已經(jīng)被列為最常見的6種腹瀉病之一。多年來雖然國內(nèi)外學者對隱孢子蟲病的防治研究作了很多工作,但尚未篩選出一種特效藥物治療隱孢子蟲感染。因此仍有必要對隱孢子蟲病的防治做進一步的研究。 本研究的目的是制備抗隱孢子蟲特異性卵黃抗體,并初步探討其對隱孢子蟲病的防治作用。 利用實驗室保存的雞源隱孢子蟲卵囊,以改進的Sheather蔗糖梯度離心法提純卵囊,低速離心結(jié)合濾膜微濾除菌后,通過反復
3、凍融和超聲波處理的全卵囊抗原,以福氏完全和非完全佐劑制備免疫抗原,采用抗原增加的梯度免疫法對健康雞進行免疫,共免六次;酸化水稀釋-鹽析法分離純化卵黃抗體,并比較各鹽析法提純卵黃抗體的效果。建立了檢測抗隱孢子蟲特異性卵黃抗體的間接ELISA方法,并通過ELISA系統(tǒng)檢測了抗體效價,SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)鑒定純度,紫外分光光度法測定其蛋白濃度。結(jié)果顯示:水稀釋二步硫酸銨鹽析法取得了良好的提純效果,蛋白濃度為9.44m
4、g/ml,每枚雞蛋最低可提供大約94.4mg抗體。采用間接ELISA對獲得的卵黃抗體進行鑒定。其具有隱孢子蟲屬特異性。SDS-PAGE結(jié)果顯示,IgY與血清IgY具有同源性,是從血清中轉(zhuǎn)移到卵黃中的免疫球蛋白。間接ELISA方法測定IgY的穩(wěn)定性,將IgY放置在不同的環(huán)境條件下:①將IgY放入25℃-80℃水浴中加熱15min后取出,測定效價;②調(diào)不同pH值,置37℃恒溫箱孵育2h,取出以NaOH和HCL再分別將樣品的pH值調(diào)至7.2~
5、7.4,測定抗體樣品的效價。IgY在pH4~10活性無明顯變化;在65℃時活性無影響。表明IgY具有良好的穩(wěn)定性,為臨床應(yīng)用提供了可靠的依據(jù)。應(yīng)用本實驗研制出的抗隱孢子蟲特異性IgY,防治雛雞隱孢子蟲感染,試驗分七組:空白對照、感染組、陰性IgY治療組、抗貝氏隱孢子蟲抗體(IgY)治療組、抗牛安氏隱孢子卵黃抗體(IgY)高、中、低治療組,灌喂抗體第2天感染C.baileyi卵囊3.2×106個·只-1。觀察各組卵囊的變化情況、臨床癥狀、
6、法氏囊指數(shù)、對增重的影響。結(jié)果表明:陰性治療組與感染組在潛隱期、高峰期、持續(xù)期(20d)、基本一致,但排卵囊強度陰性IgY治療組較感染對照組稍有降低。陰性IgY治療組與牛安氏隱孢子蟲特異性IgY抗體治療的三個不同劑量組進行比較,3個治療組均在第12d達到排卵囊高峰,卵囊排出量較陰性IgY治療組低,其中高劑量治療的降低幅度最大,在卵囊持續(xù)期的長短等方面:牛安氏IgY抗體低劑量治療組從感染后第3d開始排卵囊,卵囊排出數(shù)量較陰性IgY治療組平
7、均低12%,排卵囊持續(xù)期19d,比陰性IgY治療組少了1d;中劑量治療組卵囊排出數(shù)量較陰性IgY治療組平均低28%,排卵囊持續(xù)期18d,比陰性IgY治療組少了2d;高劑量治療組卵囊排出數(shù)量較陰性IgY治療組平均低43%,排卵囊持續(xù)期18d,比陰性IgY治療組少了2d;表明應(yīng)用牛安氏隱孢子蟲特異性IgY抗體預防和治療可使卵囊的排出的數(shù)量減少,持續(xù)期減短。從另一側(cè)面反映出對卵囊的抑制作用。且呈劑量相關(guān)性。 抗貝氏隱孢子蟲的特異性高免
8、卵黃抗體(IgY)治療組與牛安氏隱孢子蟲特異性IgV抗體治療的三個不同劑量組進行比較:卵囊排出數(shù)量較三個治療組平均低45%,排卵囊持續(xù)期18d。表明抗貝氏隱孢子蟲的特異性高免卵黃抗體(IgY)在實驗動物人工感染治療試驗中顯示良好的療效,能顯著減少雞群0PG值。 本實驗成功制備出的高活性的抗隱孢子蟲特異性IgY,對提高雛雞免疫功能、特異性防治隱孢子蟲感染具有明顯的作用。且牛安氏隱孢子蟲特異性IgY抗體對雞源貝氏隱孢子蟲病具有交叉保
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