民族藥朝天罐提取物抗炎作用及機(jī)理研究

1、<p>　　民族藥朝天罐提取物抗炎作用及機(jī)理研究</p><p>　　作者：蔣霞，黎格，楊柯，楊玉芳，黃東萍</p><p>　　【摘要】 目的研究朝天罐提取物對(duì)不同炎癥模型的抗炎作用及作用機(jī)理。方法采用醋酸腹腔注射致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性升高試驗(yàn)、二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹模型、皮下埋植棉球誘導(dǎo)小鼠棉球肉芽腫模型觀察朝天罐提取物的抗炎作用;采用角叉菜膠致小鼠背部氣囊急性滑膜炎模型

2、，通過(guò)紫外分光光度法，測(cè)定朝天罐提取物不同劑量組中小鼠背部氣囊炎性的 滲出液PGE2的含量。結(jié)果朝天罐高(20g/kg)、低(10g/kg)劑量組對(duì)醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高、二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳廓腫脹和小鼠棉球肉芽腫有明顯的抑制作用;可顯著降低小鼠背部氣囊炎性滲出液中PGE2的含量(P&lt;0.05)。結(jié)論朝天罐提取物具有抗炎作用;其抑制炎癥組織中PGE的產(chǎn)生可能為抗炎作用機(jī)理之一。 </p><p

3、>　　【關(guān)鍵詞】 朝天罐;抗炎;PGE2</p><p>　　朝天罐Osbeckia opipara C. Y. Wu et C. Chen為野牡丹科金錦香屬植物，又名張?zhí)靹偂⒀鎏旃?、罐子草、七孔蓮等。主產(chǎn)于貴州、廣西、廣東、臺(tái)灣及長(zhǎng)江流域以南各省區(qū)，生于海拔250～800 m的山坡、山谷、水邊、路旁、疏林中或灌木叢中[1，2]，為廣西少數(shù)民族地區(qū)常用本草藥材。主要以根入藥，又名罐子草根，其味甘、微苦，性

4、平，歸腎、大腸經(jīng)，功能益腎、止血、解毒，主治腰膝酸軟,咯血,痢疾,咽喉痛等[3，4];亦可全株入藥，用于小兒風(fēng)熱、久咳、咯血、胃痛、白帶、月經(jīng)不調(diào)、胎漏下血、痔瘡出血及癌癥等[5]。目前尚未見(jiàn)朝天罐的相關(guān)藥理作用報(bào)道。本文主要對(duì)朝天罐根的抗炎作用進(jìn)行研究，探討其抗炎機(jī)理，旨在為今后藥材的進(jìn)一步研究與開(kāi)發(fā)利用提供資料與依據(jù)。</p><p><b>　　1儀器與材料</b></p>

5、<p>　　1.1 儀器與試劑722型分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司產(chǎn));BP211D萬(wàn)分之一克電子天平(德國(guó)賽多利斯);陽(yáng)性對(duì)照藥地塞米松(廣東三才醫(yī)藥集團(tuán)有限公司，批號(hào)：20080859)。朝天罐(藥材采于廣西金秀瑤族自治縣，經(jīng)廣西壯族自治區(qū)藥檢所鑒定);粗提取物棕褐色，每毫升浸膏相當(dāng)于生藥量1 g。</p><p>　　1.2 動(dòng)物KM小鼠(普通級(jí))，體質(zhì)量18～24g，雌雄各半，由廣西

6、中醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：桂醫(yī)動(dòng)字第11004號(hào)。</p><p><b>　　2方法</b></p><p>　　2.1溶液制備稱(chēng)取藥材1 000 g，加10倍量水浸泡30 min，煮沸，維持1 h，紗布過(guò)濾，藥渣再加入5倍量水，煮沸，維持30 min，紗布過(guò)濾，合并濾液，濃縮至1 000 ml，冷卻后，4℃冰箱放置備用。</p>

7、;<p>　　2.2對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響[6]取小鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為陽(yáng)性對(duì)照組(地塞米松，6 mg/kg)，空白對(duì)照組(生理鹽水)，朝天罐高(20 g生藥/kg)、低(10 g生藥/kg)兩個(gè)劑量組。每天灌胃給藥1次，給藥容量20 ml/kg，連續(xù)5 d。末次給藥后60min每鼠尾靜脈注射0.5%伊文斯藍(lán)，0.1 ml/10 g，同時(shí)腹腔注射0.6%醋酸溶液，0.1 ml/

8、10 g。15 min后，脫頸椎處死小鼠，立即注入6 ml生理鹽水沖洗腹腔，剪開(kāi)腹腔，用漏斗濾出腹腔洗出液，2 000 r/min離心10 min，取上清液于590 nm處測(cè)定OD值。</p><p>　　2.3對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹度的影響[6]取小鼠40只，雌雄各半，隨機(jī)分為4組，每組10只，分別為陽(yáng)性對(duì)照組(地塞米松，6 mg/kg)，空白對(duì)照組(生理鹽水)，朝天罐高(20 g生藥/kg)，低(10 g生藥

9、/kg)兩個(gè)劑量組。每天灌胃給藥1次，給藥容量20 ml/kg，連續(xù)5 d。末次給藥后60 min每只小鼠以0.02 ml二甲苯滴于右耳致炎，15 min后頸椎脫臼處死，沿耳廓基線剪下二耳。用6 mm直徑打孔器分別在左、右耳同一部位打下圓耳片，稱(chēng)重，以左右耳重量差作為腫脹度。</p><p>　　2.4對(duì)小鼠棉球肉芽腫的影響[6]取小鼠40只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組(生理鹽水)，陽(yáng)性對(duì)照組(地塞米松，4.5 mg/k

10、g)，朝天罐高(20 g生藥/kg)、低(10 g生藥/kg)兩個(gè)劑量組。在各鼠的左右腋下部消毒，各切一小口，各埋入消毒棉球(10 mg)。次日各組均灌胃給藥，1次/d，給藥容量為20 ml/kg，共14 d。末次藥后1 d，取出帶肉芽組織的棉球于80℃烘箱內(nèi)烘7h至干，稱(chēng)重，減去棉球重，比較各組肉芽組織干重量。</p><p>　　2.5對(duì)小鼠背部氣囊炎性滲出液中PGE2含量的影響[7]取雄性小鼠50只，隨機(jī)分

11、成5組，每組10只，分別為正常組(生理鹽水組)、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組(地塞米松，6 mg/kg)、朝天罐高(20 g生藥/kg)、低(10 g生藥/kg)兩個(gè)劑量組。各組小鼠背部皮下注射空氣5 ml，第3天及第6天再次注入空氣各3 ml，維持氣囊的膨脹，于首次注入空氣的第3天開(kāi)始灌胃給藥或生理鹽水20 ml/kg，1次/天，連續(xù)5天，末次給藥后1 h囊內(nèi)注射2%甲醛0.2 ml/只，6 h后處死動(dòng)物，于氣囊內(nèi)注入冰生理鹽水(含肝素50 U

12、/ml)3 ml，輕輕按壓，吸出1 ml，3 000 r/min離心10 min。取上清液0.4 ml，加0.5 mol·L-1氫氧化鉀-甲醇液2 ml，在50℃水浴異構(gòu)化20 min后，用甲醇稀釋至5 ml，于紫外分光光度計(jì)波長(zhǎng)278 nm處測(cè)定其吸光度(OD)值，代表PGE2的生成量。</p><p>　　2.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS11.0對(duì)所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)。</p>

13、<p><b>　　3結(jié)果</b></p><p>　　3.1對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響</p><p>　　與空白對(duì)照組比較，地塞米松陽(yáng)性對(duì)照組及朝天罐提取物高、低劑量組對(duì)醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性有顯著抑制作用(P&lt;0.01)。結(jié)果見(jiàn)表1。表1對(duì)腹腔毛細(xì)血管通透性的影響</p><p>　　3.2對(duì)二

14、甲苯致小鼠耳廓腫脹度的影響 與空白對(duì)照組比較，地塞米松陽(yáng)性對(duì)照組及朝天罐提取物高、低劑量組對(duì)二甲苯所誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹有明顯抑制作用(P&lt;0.05)。結(jié)果見(jiàn)表2。表2對(duì)耳廓腫脹度的影響</p><p>　　3.3對(duì)小鼠棉球肉芽腫的影響 與空白對(duì)照組比較，地塞米松陽(yáng)性對(duì)照組及朝天罐提取物高、低劑量組對(duì)小鼠棉球肉芽腫有明顯抑制作用(P&lt;0.01或P&lt;0.05)。結(jié)果見(jiàn)表3。表3

15、對(duì)小鼠棉球肉芽腫的影響</p><p>　　3.4 對(duì)小鼠背部氣囊炎性滲出液中PGE2含量的影響與正常組比較，模型組小鼠背部氣囊炎性滲出液中PGE2的含量顯著升高(P&lt;0.01)。地塞米松陽(yáng)性對(duì)照組及朝天罐提取物高、低劑量組與模型組相比，小鼠背部氣囊炎性滲出液中PGE2的含量明顯降低(P&lt;0.05或P&lt;0.01)。結(jié)果見(jiàn)表4。表4對(duì)小鼠背部氣囊炎性滲出液中PGE2含量的影

16、響</p><p><b>　　4討論</b></p><p>　　非特異性炎癥反應(yīng)通常分為3個(gè)時(shí)相，即以局部血管擴(kuò)張、毛細(xì)血管通透性增加為特征的急性時(shí)相;以白細(xì)胞、巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)為特征的亞急性時(shí)相;以組織變性和纖維化為特征的慢性增殖相。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，朝天罐高(20 g/kg)、低(10 g/kg)劑量組可顯著降低醋酸所致小鼠毛細(xì)血管通透性增高，減輕二甲苯誘導(dǎo)的小鼠耳

17、腫脹，表明其對(duì)炎癥的急性時(shí)相明顯的抑制作用;同時(shí)朝天罐提取物能顯著抑制小鼠棉球肉芽腫，說(shuō)明其對(duì)炎癥的慢性增殖相也有較好的抑制效果。</p><p>　　花生四烯酸(AA)代謝在炎癥病理過(guò)程中起著主要作用，而PGE2是AA代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一個(gè)重要炎癥介質(zhì)，在炎癥過(guò)程中可通過(guò)其強(qiáng)大的擴(kuò)血管、協(xié)同趨化因子激活及吸引中性粒細(xì)胞、增強(qiáng)血管壁通透性、引起發(fā)熱及痛覺(jué)過(guò)敏等作用促進(jìn)炎癥反應(yīng)發(fā)生發(fā)展[8]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，朝天罐提取

18、物高、低劑量組均能明顯抑制小鼠背部氣囊炎癥模型內(nèi)PGE2的含量。該結(jié)果提示朝天罐提取物抑制炎癥組織中PGE2產(chǎn)生可能為其抗炎作用機(jī)理之一。</p><p><b>　　【參考文獻(xiàn)】</b></p><p>　　[1]陳介.中國(guó)野牡丹科金錦香屬植物的研究[J].廣西植物，1982，2(4)：181.</p><p>　　[2]劉杰，陳海生，張衛(wèi)東

19、. 金錦香屬植物的研究概況[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)，2001，17(3)：151.</p><p>　　[3]廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究所. 廣西藥用植物名錄[M].南寧:廣西人民出版社, 1986: 164.</p><p>　　[4]吳其浚. 植物名實(shí)圖考(修訂本) [M]. 上海: 商務(wù)印書(shū)館,1957: 226, 208, 414.</p><p>　　[5]廣

20、西中藥資源普查辦公室.廣西中藥資源名錄[M].南寧:廣西民族出版社, 1993: 90.</p><p>　　[6]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，1993：271.</p><p>　　[7]王利津，徐強(qiáng).黃連解毒湯的抗炎作用機(jī)理研究[J].中國(guó)中藥雜志，2000，25(8)：493.</p><p>　　[8]王玉香，劉青云，彭代銀.痹復(fù)康