榴蓮殼提取物的制備及其抗炎鎮(zhèn)痛作用的研究.pdf

1、背景
　　 榴蓮(Durio zibethinus Murr)又稱韶子,系木棉科榴蓮屬長(zhǎng)綠喬木榴蓮的果實(shí),風(fēng)味奇異的熱帶大型鮮果。原產(chǎn)于印度、馬來(lái)半島一帶,然后傳到臨近的菲律賓、泰國(guó)、斯罩蘭卡及印度尼西亞等東南亞和南亞的熱帶國(guó)家。
　　 素有“熱帶水果之王”的榴蓮是藥食兼用的水果,含有豐富的礦物質(zhì)和微量元素,對(duì)人體具有多種保健功能。目前,對(duì)榴蓮的研究主要是集中在遺傳育種、營(yíng)養(yǎng)及化學(xué)成分、食品加工、市場(chǎng)營(yíng)銷等幾個(gè)方面。另外

2、,現(xiàn)代研究表明榴蓮殼具有多種對(duì)人體有益的營(yíng)養(yǎng)成分,富含Ca、K、Fe等微量元素和多種氨基酸,具有一定的藥用價(jià)值。東南亞及我國(guó)華南地區(qū)居民常用榴蓮殼煲湯、煎水等,達(dá)到降火解滯、補(bǔ)血益氣、滋潤(rùn)養(yǎng)陰等的效果,但對(duì)于榴蓮殼的藥理活性研究還少見報(bào)道。為此,近年來(lái)榴蓮尤其是榴蓮殼的化學(xué)成分研究和生物活性研究越來(lái)越成為人們關(guān)注的熱點(diǎn)。
　　 目的
　　 比較榴蓮殼的提取方法并優(yōu)化其制備工藝；研究榴蓮殼提取物(Duriozibethin

3、us Murr Shell Extract,DSE)的抗炎、止咳、鎮(zhèn)痛和抗菌等生物活性,為榴蓮殼的開發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法
　　 (1)DSE制備實(shí)驗(yàn):采用回流法、超聲波法法、微波法及半仿生法對(duì)榴蓮殼有效成分進(jìn)行提取。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方法采用正交設(shè)計(jì)來(lái)獲取各因素的影響并優(yōu)化最佳工藝提取條件。
　　 (2)抗炎實(shí)驗(yàn):7周齡昆明種小鼠50只,雄性,隨機(jī)分為5組,每組10只,即正常對(duì)照組(蒸餾水10 mg·kg-1)

4、、陽(yáng)性藥對(duì)照組(dexamethasone,1 mg·kg-1)、DSE低劑量組(100 mg·kg-1),DSE中劑量組(300 mg·kg-1),DSE高劑量組(900mg·kg-1)。采用醋酸致小鼠腹膜炎性滲出,巴豆油致小鼠耳腫脹,角叉菜膠致小鼠足跖腫脹,2,4-二硝基氟苯(2,4-DNFB)致小鼠變應(yīng)性接觸性皮炎,小鼠皮下棉球致肉芽腫增生等實(shí)驗(yàn)和方法來(lái)評(píng)價(jià)DSE抗炎的作用。
　　 (3)止咳實(shí)驗(yàn):7周齡昆明種小鼠50只,

5、雄性,隨機(jī)分為5組,每組100只,即正常對(duì)照組(蒸餾水10 mg·kg-1)、陽(yáng)性藥對(duì)照組(codeine,20 mg·kg-1)、DSE低劑量組(100 mg·kg-1),DSE中劑量組(300 mg·kg-1),DSE高劑量組(900 mg·kg-1)。采用氨水及802致小鼠咳嗽模型來(lái)評(píng)價(jià)DSE止咳的效果。
　　 (4)鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn):7周齡昆明種小鼠50只,雄性,隨機(jī)分為5組,每組10只,即正常對(duì)照組(蒸餾水10 mg·kg-1

6、)、陽(yáng)性藥對(duì)照組(aspirin,200 mg·kg-1)、DSE低劑量組(100 mg·kg-1),DSE中劑量組(300 mg·kg-1),DSE高劑量組(900mg·kg-1)。采用采用醋酸致小鼠扭體反應(yīng)及熱板法評(píng)價(jià)DSE鎮(zhèn)痛的效果。
　　 (5)抑菌實(shí)驗(yàn):采用倍半稀釋法測(cè)定DSE對(duì)余黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus,ATCC 29253),表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermi

7、dis,ATCC12228),綠膿桿菌(Bacillus aeruginosus,ATCC 27853),大腸桿菌(E.coli,ATCC25922)的MIC。同時(shí)采用抑菌圈直接法來(lái)評(píng)價(jià)DSE對(duì)上述細(xì)菌的抑制作用。
　　 結(jié)果
　　 (1)DSE制備實(shí)驗(yàn)結(jié)果:對(duì)于回流法制備DSE,其影響因素的順序?yàn)橐毫媳?回流溫度>乙醇濃度>回流時(shí)間,其中液料比具有非常顯著的影響(n<0.01),回流溫度的影響也顯著性(p<0.05)；

8、其最佳工藝條件為:回流時(shí)間為30 min,回流溫度為90℃,乙醇濃度80％,液料比50:1。對(duì)于微波法制備DSE,其影響因素的順序?yàn)槲⒉〞r(shí)間>乙醇濃度>微波功率>液料比,其中微波時(shí)間、微波功率及乙醇濃度都具有顯著的影響(p<0.05)；其最佳工藝條件為:微波時(shí)間為20 min,微波功率為800 W,乙醇濃度80％,液料比20:1。對(duì)于超聲波法制備DSE,其影響因素的順序?yàn)槌暪β?超聲時(shí)間>液料比>乙醇濃度,其中超聲功率具有十分顯著的影

9、響(p<0.01),超聲時(shí)間也有顯著的影響(p<0.05)；其最佳工藝條件為:超聲時(shí)間為20 min,超聲波波功率為500 W,乙醇濃度20％,液料比20:1。對(duì)于半仿生法制備DSE,其影響因素的順序?yàn)榈谝患錺H>第二煎pH>第三煎pH>提取時(shí)間,其中第一煎pH具有顯著的影響(p<0.05)；其最佳工藝條件為:第一煎pH為4,第二煎pH為7,第三煎pH為9.5,每次提取時(shí)間為30 min。
　　 (2)抗炎實(shí)驗(yàn)結(jié)果:與空白對(duì)照組

10、相比,各劑量DSE對(duì)醋酸導(dǎo)致小鼠的腹膜炎性滲出都有非常顯著的抑制作用(p<0.001),300 mg·kg-1和900 mg·kg-1 DSE對(duì)巴豆油致小鼠耳廓腫脹有顯著的抑制作用(p<0.05),100 mg·kg-1和300 mg·kg-1的DSE對(duì)于角叉菜膠致小鼠足部腫脹各期抑制都有顯著性作用(p<0.05)；900mg·kg-1 DSEX對(duì)2,4-DNFB所致小鼠變應(yīng)性接觸性皮炎有一定的抑制效果,且量效關(guān)系良好；各劑量組DSE對(duì)

11、棉球引起的小鼠皮下肉芽腫增生慢性炎癥也有顯著的抑制作用(p<0.001),且有較好的劑量依賴性。
　　 (3)止咳實(shí)驗(yàn)結(jié)果:與空白對(duì)照組相比,900 mg·kg-1的DSE對(duì)氨水和SO2導(dǎo)致的小鼠咳嗽潛伏期及咳嗽次數(shù)都有較好的抑制作用,且有較好的量效關(guān)系。
　　 (4)鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)結(jié)果:與空白對(duì)照組相比,900 mg·kg-1的DSE能有效地延長(zhǎng)醋酸導(dǎo)致小鼠的扭體反應(yīng)的潛伏期(p<0.05),且對(duì)于90minH寸熱板導(dǎo)致的疼

12、痛閥值影響有顯著性的延長(zhǎng)(p<0.05)。
　　 (5)抗菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果:DSE對(duì)Staphylococcus aureus,Staphylococcus epidermidis及E.coli等細(xì)菌的抑制十分微弱,對(duì)Bacillus aeruginosus有較弱的抑制作用。
　　 結(jié)論
　　 (1)與傳統(tǒng)的回流法相比,微波法、超聲波法,尤其是半仿生法都高效、經(jīng)濟(jì)、及環(huán)保地制備DSE；正交設(shè)計(jì)不僅可以有效地分析DSE制

13、備過(guò)程中各因素的影響情況,而且可以較好地獲得DSE制備的最佳工藝條件。
　　 (2)300 mg·kg-1和900 mg·kg-1 DSE對(duì)各種元素引起的急慢性炎癥都有較強(qiáng)的抑制作用,其效果可能是源于DSE抑制花生四烯酸的相關(guān)代謝產(chǎn)物和增強(qiáng)動(dòng)物免疫細(xì)胞的活性有關(guān)。
　　 (3)900 mg·kg-1 DSE對(duì)化學(xué)性刺激物質(zhì)引起的支氣管黏膜感受器有較好的抑制作用。
　　 (4)900 mg·kg-1 DSE對(duì)急性化