烏索酸固體分散體膠囊的制備及體外溶出度研究

1、<p>　　烏索酸固體分散體膠囊的制備及體外溶出度研究</p><p>　　【摘要】 目的評價烏索酸固體分散體膠囊等3種制劑的體外溶出度及其質(zhì)量。方法以PVP-K30為水溶性載體，采用溶劑法制備烏索酸固體分散體膠囊；選擇0.5 %十二烷基硫酸鈉溶液為溶出介質(zhì)，建立高效液相色譜法測定烏索酸固體分散體膠囊等3種制劑的體外溶出度，并檢測分析了烏索酸在制劑中的存在狀態(tài)。結(jié)果高效液相色譜法測定烏索酸的溶出度，結(jié)

2、果準(zhǔn)確、可靠、穩(wěn)定、無載體的干擾。45 min之內(nèi)，烏索酸固體分散體膠囊的體外溶出度比片劑提高2.3倍，比物理混合物膠囊提高1.1倍。結(jié)論 選擇PVP-K30為載體制備烏索酸固體分散體膠囊可顯著提高烏索酸的體外溶出速度。 </p><p>　　【關(guān)鍵詞】 烏索酸 聚乙烯吡咯烷酮 固體分散體 膠囊 溶出度 高效液相色譜</p><p>　　Abstract：ObjectiveTo eval

3、uate the dissolution in vitro and quality of three kinds of preparations. MethodsUsing PVPK30 as water soluble carrier, ursolic acid solid dispersion capsule was prepared by a solvent method. The HPLC method for determi

4、nation of the dissolution in vitro of ursolic acid preparations was established. The existed form of ursolic acid in preparations was detected. ResultsHPLC method was accurate and reliable, and no interference occurred f

5、rom carriers. The dissolution rate </p><p>　　Key words：Ursolic acid; PVP-K30; Solid dispersion system; Capsules; Dissolution; HPLC </p><p>　　烏索酸(ursolic acid，UA)為五環(huán)三萜類化合物，無色針狀結(jié)晶，不溶于水和石油

6、醚，可溶于乙醇、甲醇、氯仿、乙醚、醋酸乙酯和丙酮，熔點(diǎn)285～287℃。烏索酸具有抗肝炎、抗腫瘤、抗炎抑菌及增強(qiáng)免疫等藥理效應(yīng)，且毒性低，副作用少，具有較廣泛的開發(fā)前景［1］。但烏索酸在水中的溶解度極小，溶出速度很慢，生物利用度低，影響其藥效的發(fā)揮。為提高烏索酸的溶出度和生物利用度，我們采用固體分散技術(shù)制備成烏索酸固體分散體膠囊［2，3］，建立了HPLC測定其制劑含量的方法，考察了烏索酸固體分散體膠囊、烏索酸物理混合物膠囊和烏索酸片劑的

7、體外溶出度［4］，并通過色譜峰純度、紫外光譜及紅外光譜分析，鑒別烏索酸在載體中的存在狀態(tài)，為評價和控制制劑質(zhì)量提供實驗依據(jù)。</p><p><b>　　1 儀器與試藥</b></p><p>　　1.1 儀器 ZRS8G智能溶出試驗儀(天津大學(xué)天發(fā)科技有限公司)；Waters高效液相色譜儀(2996光電二極管矩陣檢測器，Empower色譜工作站)。CP225

8、D分析天平（德國Sartorius公司）。</p><p>　　1.2 試藥 烏索酸片(本所藥化室提供)；烏索酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：110742200314，供含量測定用)； PVPK30（上?；瘜W(xué)試劑公司)；十二烷基硫酸鈉(武漢市化學(xué)試劑廠)；甲醇（色譜純，上海陸忠試劑廠）。</p><p><b>　　2 方法與結(jié)果</b></p

9、><p>　　2.1 樣品的制備</p><p>　　2.1.1 烏索酸固體分散體膠囊的制備將烏索酸與PVPK30以1∶5的比例混合，加入無水乙醇完全溶解，經(jīng)減壓蒸餾除去乙醇，固形物干燥，研細(xì)過孔徑0.15 mm藥篩，裝膠囊即得，含烏索酸20 mg/粒。</p><p>　　2.1.2 物理混合物膠囊的制備 將烏索酸與PVPK30以1∶5的比例混合，研細(xì)過

10、孔徑0.15 mm藥篩，裝膠囊備用，含烏索酸20mg/粒。</p><p>　　2.2 檢測波長的選擇 取烏索酸對照品和樣品溶液進(jìn)樣，在190～500 nm波長范圍用二極管陣列檢測器進(jìn)行光譜掃描，組分峰最大吸收波長均為202.2 nm（圖1，但由于流動相在短波長處有末端吸收，為了減少干擾，提高信噪比，提取不同波長的色譜圖進(jìn)行比較。選擇210 nm為檢測波長檢測器響應(yīng)值大，基線平穩(wěn)，峰形好）。</p>

11、;<p>　　圖1 烏索酸對照品和烏索酸固體分散體紫外光譜（略）</p><p>　　2.3 色譜條件 色譜柱為Nova-Pak C18柱(3.9 mm×150 mm，5 μm)；流動相為甲醇-水(88∶12，體積比)；柱溫25℃；流速1.0 ml/min；檢測波長210 nm；外標(biāo)法定量計算。溶出介質(zhì)、烏索酸對照品和樣品的HPLC色譜見圖2。</p><p>

12、;　　2.4 色譜峰純度分析 采用Empower色譜軟件適應(yīng)性模塊對色譜峰純度分析，對照品和樣品中烏索酸色譜峰的純度角值小于閾值，純度角線均位于自動閾值線下方（圖3），證實色譜峰為單一組分吸收峰。</p><p>　　a溶出介質(zhì) b對照品 c樣品</p><p>　　圖2 溶出介質(zhì)、烏索酸對照品和樣品的HPLC色譜圖（略）</p><p>　　a對照

13、品 b物理混合物膠囊 c固體分散體膠囊</p><p>　　圖3 烏索酸對照品和樣品峰純度分析（略）</p><p>　　2.5 溶液的配制</p><p>　　2.5.1 烏索酸對照品溶液的配制 精密稱取烏索酸對照品2.02 mg，置于25 ml量瓶中，加甲醇溶解后定容，搖勻，得含烏索酸0.080 8 mg/ml的對照品溶液。</p>

14、<p>　　2.5.2 樣品溶液的配制 分別取烏索酸片劑或膠囊各20粒，精密稱定其內(nèi)容物重量，并計算出每粒片劑和膠囊內(nèi)容物的平均重量。精密稱取樣品適量，置50 ml量瓶中，加入40 ml甲醇，超聲提取30 min，放冷后甲醇定容，0.45 μm濾膜過濾，得樣品溶液。</p><p>　　2.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制　分別準(zhǔn)確吸取烏索酸對照品溶液2，6，10，14，18 μl進(jìn)樣分析，平行3次，以峰面積

15、(μV.s)平均值對進(jìn)樣量(μg)進(jìn)行線性擬合，得一元線性回歸方程為Y=2.53×105 m+1.73×103，r=0.999 95，表明當(dāng)烏索酸進(jìn)樣量在0.161 6～1.454 4 μg之間時，線性關(guān)系良好。</p><p>　　2.7 精密度實驗　精密吸取烏索酸對照品溶液，平行進(jìn)樣5次，每次進(jìn)樣量20 μl，烏索酸峰面積RSD為0.5 %，儀器和進(jìn)樣精密度良好。</p>

16、<p>　　2.8 重現(xiàn)性實驗精密稱取同一批烏索酸固體分散體膠囊樣品6份，制備樣品溶液，各吸取20 μl進(jìn)樣分析，外標(biāo)法計算烏索酸含量。烏索酸含量的RSD為1.5 %。結(jié)果表明，本方法重現(xiàn)性良好。</p><p>　　2.9 加樣回收率實驗精密稱取同一批已知烏索酸含量的烏索酸固體分散體膠囊樣品5份，加入對照品適量，按“2.5”項制備樣品溶液，進(jìn)樣測定含量，烏索酸的平均加樣回收率為98.9%，RSD為

17、2.1%。</p><p>　　2.10 樣品含量測定 精密吸取“2.5”項樣品溶液各20 μl，進(jìn)樣，記錄峰面積，按外標(biāo)法計算樣品中的烏索酸含量，結(jié)果片劑烏索酸21.16 mg/片，物理混合物和固體分散體膠囊含烏索酸分別為20.61 mg /粒和21.31 mg /粒，并以此含量作為100 %溶出時的參照值。</p><p>　　2.11 烏索酸體外溶出實驗取烏索酸固體分散體膠囊、

18、物理混合體膠囊或片劑各6粒（片），分別按《中國藥典》2005年版附錄溶出度測定法（轉(zhuǎn)籃法）測定，以0.5%十二烷基硫酸鈉水溶液900 ml 為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速100 r·min-1，溫度37 ℃。依法操作，分別于15，30，45，60，75，90，105，120 min取樣5 ml，經(jīng)孔徑0.8 μm濾膜過濾，取續(xù)濾液0.2 ml，加入甲醇0.2 ml混勻后取20 μl進(jìn)樣分析。每次取樣后補(bǔ)充相同介質(zhì)5 ml。精密吸取不同溶出時

19、間的溶出介質(zhì)濾液20 μl，注入高效液相色譜儀分析測定，外標(biāo)法計算溶出介質(zhì)中的烏索酸含量，計算溶出量百分比。3種制劑的溶出曲線見圖4。</p><p>　　圖4 烏索酸溶出度曲線（略）</p><p><b>　　3 討論</b></p><p>　　3.1 制備方法選擇 固體分散制劑技術(shù)是將藥物與載體混合制成高度分散的固體分散體的一項

20、新型制劑技術(shù)［5］。本研究以PVP-K30為水溶性載體，采用溶劑法制備烏索酸固體分散體膠囊，將烏索酸在水溶性載體中形成分子分散體系，改善其溶解性能，加快溶出速度［6］。實驗結(jié)果表明，45 min內(nèi)烏索酸固體分散體膠囊的體外溶出度比片劑提高2.3倍，比物理混合物膠囊提高1.1倍，溶出度得到了顯著提高。這是由于烏索酸在分散體系中以分子態(tài)存在，當(dāng)載體迅速濕潤或溶解時，加速了烏索酸的溶出。</p><p>　　3.2

21、溶出介質(zhì)的確定 口服固體制劑的溶出度測定是預(yù)測藥物生物有效性的一種重要措施。通常用水、稀鹽酸或緩沖液作溶出介質(zhì)。因烏索酸在水及酸性溶液中幾乎不溶，在乙醇中溶解，若用無水乙醇為溶出介質(zhì)，雖增加了溶解性，但使用乙醇僅適用于少數(shù)藥物或制劑，故不能可靠地用來預(yù)測藥物的生物有效性。因此，選擇0.5%十二烷基硫酸鈉溶液為溶出介質(zhì)，在37℃時對烏索酸有較好的溶解性。但溶出液樣品在室溫放置一段時間后，出現(xiàn)細(xì)微的針狀結(jié)晶。因此取出的溶出液要立即加入等量

22、甲醇混勻，避免烏索酸析出。</p><p>　　3.3 烏索酸在制劑中的存在狀態(tài) 采用Empower色譜軟件適應(yīng)性模塊對色譜峰純度分析，對照品和樣品中烏索酸色譜峰的純度角值小于閾值，純度角線均位于自動閾值線下方，證實色譜峰為單一組分吸收峰；采用光電二極管陣列檢測器對烏索酸對照品和固體分散體溶液在190～450 nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，紫外光譜經(jīng)歸一化后完全重合，固體分散體中烏索酸的最大吸收波長為202.2

23、 nm，與烏索酸對照品相同；比較烏索酸對照品和固體分散體樣品紅外光譜，烏索酸的羰基峰位于大約1 711 cm-1處，而在烏索酸固體分散體的紅外光譜中羰基的吸收峰有明顯變化，在大約1 660 cm-1處有一組峰，說明烏索酸與PVP-K30之間發(fā)生了分子間的氫鍵作用，使羰基峰紅移，表明固體分散體中烏索酸和載體分子間除物理作用以外，無化學(xué)鍵生成，仍與單體形式存在，烏索酸分子中的羧基與PVP-K30分子中的氧形成氫鍵，增加了兩者相互間的作用力，

24、從而改善烏索酸的溶解度，提高其溶出速度。證實在制備烏索酸固體分散體膠囊的過程中，烏索酸分子與載體間無化學(xué)鍵生成，分子結(jié)構(gòu)亦無改變。</p><p>　　3.4 HPLC方法的建立 采用HPLC法測定制劑和溶出介質(zhì)中烏索酸的含量，操作簡便、快速、精密度高、數(shù)據(jù)準(zhǔn)確。烏索酸在水中的溶解極小，選用0.5 %十二烷基硫酸鈉水溶液做溶出介質(zhì)，能有效增加烏索酸的溶解度，測量中載體PVP-K30和介質(zhì)十二烷基硫酸鈉對烏索酸

25、的測定均無干擾。</p><p><b>　　【參考文獻(xiàn)】</b></p><p>　?。?］ 肖坤福,鄭云法,劉成左,等. 熊果酸的研究進(jìn)展［J］.時珍國醫(yī)國藥,2004,16(12)：1298.</p><p>　?。?］ 李寶紅,張立堅,莊海旗,等.蛇床子素固體分散體的制備與分析［J］.華東理工大學(xué)學(xué)報，2004,39(5)：598.&l

26、t;/p><p>　　［3］ 向大雄,陶昱斐,王 峰,等.齊墩果酸固體分散體形成和增溶機(jī)制研究［J］.中草藥,2002,33(4)：311.</p><p>　?。?］ 顧宜,高蘇莉,楊春娥,等.齊墩果酸固體分散體膠囊的溶出度測定及Weibull分析［J］.解放軍藥學(xué)學(xué)報，2006,22(1)：58.</p><p>　?。?］ 陳 浩, 田景振, 劉繼勇,等.固體分散