中國(guó)胃癌her2檢測(cè)指南解讀鄭杰

1、概述,本指南推薦IHC與FISH和（或）DSISH相結(jié)合的檢測(cè)策略胃癌有必要進(jìn)行準(zhǔn)確的HER2檢測(cè)HER2狀態(tài)檢測(cè)首先選用免疫組織化學(xué)法（IHC）IHC 3+的病例視為HER2陽(yáng)性IHC 2+的病例建議進(jìn)一步行原位雜交（ISH：FISH和或DSISH）檢測(cè)，IHC 2+/ISH+的病例視為HER2陽(yáng)性IHC 1+和IHC 0 病例，IHC 2+/ISH - 病例視為HER2陰性胃癌HER2檢測(cè)應(yīng)在有能力的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)

2、行檢測(cè)質(zhì)量取決于標(biāo)本的采集、處理過(guò)程、IHC/ISH 檢測(cè)方法和評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)的執(zhí)行,問(wèn)題一,1. 請(qǐng)問(wèn)您所在的醫(yī)院胃癌HER2檢測(cè)是否屬于常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目？是否不清楚,問(wèn)題二,請(qǐng)問(wèn)您所在的醫(yī)院，由誰(shuí)決定是否做胃癌HER2免疫組化檢測(cè)？病理科外科腫瘤內(nèi)科消化內(nèi)鏡室,問(wèn)題三,請(qǐng)您對(duì)多學(xué)科合作對(duì)胃癌HER2檢測(cè)的重要性打分（0-5重要性逐漸遞增），請(qǐng)按投票器選擇0 12345,胃癌HER2檢測(cè),,,,,,,,,,,,,切

3、片,,,,,,,,,,,脫水包埋,,,,,,固定,,,,,,,HER2檢測(cè)的相關(guān)流程,切片,檢測(cè),判讀,標(biāo)本收取,問(wèn)題四,貴單位胃癌手術(shù)標(biāo)本送到病理科處理的時(shí)間？A 30分鐘內(nèi)B 1小時(shí)內(nèi)C 2小時(shí)內(nèi)D >2小時(shí)E 不清楚,問(wèn)題五,貴單位手術(shù)標(biāo)本固定時(shí)間？不固定直接取材固定時(shí)間在8小時(shí)內(nèi)固定時(shí)間在12小時(shí)左右（過(guò)夜）固定時(shí)間12-24小時(shí)不清楚,標(biāo)本類型,原發(fā)病灶的手術(shù)切除標(biāo)本原發(fā)病灶的胃鏡

4、活檢標(biāo)本建議取6-8塊，以獲得足夠的樣本組織，多點(diǎn)活檢對(duì)準(zhǔn)確的檢測(cè)有必要切除標(biāo)本離體后20–30分鐘內(nèi)進(jìn)行標(biāo)記、切開(kāi)、固定等初步處理后，及時(shí)送病理科活檢標(biāo)本的大小≥2x2x2mm3原發(fā)灶活檢組織、手術(shù)切除組織皆有的病例，建議使用手術(shù)切除組織進(jìn)行檢測(cè),標(biāo)本采集,問(wèn)題六,貴單位送檢標(biāo)本采用何種固定液？不用固定液，直接送病理科10%福爾馬林固定液（蒸餾水配）10%福爾馬林固定液（中性緩沖液配）10%甲醛固定液不清楚,標(biāo)

5、本固定,采用新鮮配制10%中性緩沖福爾馬林作為固定液固定液的量應(yīng)為組織的10倍手術(shù)切除標(biāo)本的固定時(shí)間為8–48h (至少1h/mm組織)活檢標(biāo)本的固定時(shí)間不超過(guò)24h (至少1h/mm組織)不宜使用其它固定液，非10%中性緩沖福爾馬林制劑可能會(huì)妨礙IHC和ISH檢測(cè)的可靠性不宜用微波快速固定組織,規(guī)范的標(biāo)本固定是HER2檢測(cè)質(zhì)量的保障；保存良好的組織形態(tài)，防止細(xì)胞內(nèi)蛋白和核酸的丟失,標(biāo)本準(zhǔn)備,固定1小時(shí),固定52小時(shí),固定4小

6、時(shí),固定2周,固定時(shí)間影響HER2染色結(jié)果,固定22小時(shí),圖片由 of A Morey, St Vincent’s Hospital, NSW, Australia提供,固定較差示例：乳腺癌HER2 IHC檢測(cè),固定較差會(huì)導(dǎo)致染色結(jié)果的異質(zhì)性胞質(zhì)染色可能是由固定較差導(dǎo)致,圖片由 W Hanna提供,固定較差示例：胃癌HER2 IHC檢測(cè),固定不完全會(huì)導(dǎo)致假陽(yáng)性檢查結(jié)果胞質(zhì)染色可能由于使用了不恰當(dāng)?shù)墓潭ǚ绞?圖片

7、由Targos Molecular Pathology.提供,固定較差示例：HER2 ISH檢測(cè),圖片由 Abbott/Vysis.提供,固定不完全 - SISH，“空核”,固定不完全導(dǎo)致探針信號(hào)較弱或缺失,過(guò)度染色會(huì)導(dǎo)致持續(xù)性自發(fā)熒光 探針信號(hào)可能較弱或缺失,HER2檢測(cè),HER2過(guò)表達(dá)的檢測(cè),HER2擴(kuò)增的檢測(cè),,,免疫組織化學(xué)染色方法（IHC） 自動(dòng)化,原位雜交方法 （ISH） FISH Dual SISH,實(shí)驗(yàn)室總體要求

8、,應(yīng)當(dāng)在有條件的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，擁有試驗(yàn)所需的儀器和設(shè)備及空間條件實(shí)驗(yàn)室掌握包括標(biāo)本的制備、抗體的選擇、抗原修復(fù)方法及其它相關(guān)技術(shù)；探針的選擇、檢測(cè)預(yù)處理方法及其它相關(guān)技術(shù)實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的內(nèi)部和外部質(zhì)量控制程序驗(yàn)證，建立完善的實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作流程（SOP） 實(shí)驗(yàn)室技術(shù)員具備相關(guān)資質(zhì)及經(jīng)過(guò)合格培訓(xùn),HER2檢測(cè)-IHC,IHC方法 試驗(yàn)方法根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件可以選擇手工染 色、半自動(dòng)染色和全自動(dòng)免疫組化染色 建議使用全自動(dòng)染

9、色方法,建議使用我國(guó)相關(guān)部門（SFDA）批準(zhǔn)的試劑盒 自行組配和分裝的抗體必須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的內(nèi)部和外部質(zhì) 量控制程序驗(yàn)證，并與權(quán)威機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)的檢測(cè)試劑盒進(jìn) 行比對(duì)，以保證檢測(cè)結(jié)果的可靠性,IHC抗體,結(jié)果判讀和分析,普通光學(xué)顯微鏡,熒光顯微鏡,病理醫(yī)生需要經(jīng)過(guò)培訓(xùn) IHC評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)和乳腺癌有所不同 樣本：活檢組織和切除組織有所不同 觀察：高異質(zhì)性需要全面觀察所有腫瘤組織 溝通：結(jié)果不確定時(shí)需要與腫瘤科醫(yī)生溝通,

10、IHC判讀標(biāo)準(zhǔn)（參照ToGA經(jīng)驗(yàn)，所有圖片來(lái)自SCC）,0 無(wú)反應(yīng)或腫瘤細(xì)胞膜染色<10%,1+ ≥10%腫瘤細(xì)胞微弱或隱約膜染色，細(xì)胞膜僅部分區(qū)域著色,2+ ≥10%腫瘤細(xì)胞弱到中度的完全或細(xì)胞基底部和兩側(cè)邊膜染色,3+ ≥10%腫瘤細(xì)胞完全性或基底部和兩側(cè)邊膜強(qiáng)染色（對(duì)3+的病例同時(shí)表明百分率，注明是否有異質(zhì)性）,IHC結(jié)果判讀時(shí)應(yīng)注意：細(xì)胞質(zhì)著色應(yīng)忽略不計(jì)，正常胃黏膜上皮細(xì)胞不應(yīng)著色,,HER2檢測(cè)-IHC,原位

11、雜交檢測(cè)方法（ISH） 熒光原位雜交（FISH ） 雙色銀染原位雜交（Dual SISH， DSISH）探針建議使用我國(guó)相關(guān)部門（SFDA）批準(zhǔn)的試劑盒,FISH，HER2紅色信號(hào)增多，局部呈簇狀，CEP17信號(hào)1-2個(gè)，比值7.2，有擴(kuò)增（100×）,FISH，HER2和CEP17信號(hào)各1-2個(gè)，比值1.65，無(wú)擴(kuò)增（100×）,FISH：嚴(yán)格按照試劑盒標(biāo)準(zhǔn)程序執(zhí)行,HER2檢測(cè)-FISH,圖片

12、來(lái)自SCC,DSISH HER2黑色信號(hào)擴(kuò)增，呈簇狀；CEP17紅色信號(hào)1-2個(gè)；比值15，有擴(kuò)增(100×),DSISH HER2和CEP17信號(hào)各1-2個(gè)，比值<0.8，無(wú)擴(kuò)增(100×),DSISH：實(shí)驗(yàn)室應(yīng)先進(jìn)行嚴(yán)格的對(duì)比試驗(yàn)和程序優(yōu)化 嚴(yán)格按照所用全自動(dòng)染色儀器的優(yōu)化程序和SOP執(zhí)行,HER2檢測(cè)-DSISH,圖片來(lái)自SCC,請(qǐng)問(wèn)貴院是否有統(tǒng)一的HER2檢測(cè)病理報(bào)告格式？

13、是否,問(wèn)題七,檢測(cè)報(bào)告內(nèi)容,胃癌HER2 IHC/ISH檢測(cè)報(bào)告臨床信息： 姓名 性別 年齡 門診／住院號(hào) 送檢醫(yī)師聯(lián)系方式 檢測(cè)日期 年 月 日標(biāo)本信息： 病理號(hào)/蠟塊號(hào) 標(biāo)本類型： 手術(shù)切除□ 活檢□腫瘤部位： 胃食道交界處□ 胃底□ 胃

14、體□ 胃竇□ 幽門管□ 轉(zhuǎn)移灶□標(biāo)本固定液種類（10％中性緩沖福爾馬林）是□否□標(biāo)本離體至固定時(shí)間(如有記錄) 分鐘標(biāo)本固定的時(shí)間(如有記錄) 分鐘組織學(xué)類型/分級(jí) Laurén分型 臨床分期 T N M,HER2 IHC 檢測(cè)報(bào)告,檢測(cè)信息：抗體信息(克隆號(hào)／生產(chǎn)商) 檢測(cè)方法 手工/半自動(dòng) □全自動(dòng) □

15、對(duì)照設(shè)置情況 3+ □ 0 □樣本量是否足夠用于評(píng)估是□否□具有膜著色的腫瘤細(xì)胞的百分比 %著色的異質(zhì)性有□無(wú)□腫瘤細(xì)胞膜染色模式 完整□ 基底和側(cè)膜（U-shaped)□ 兩者皆有□判讀結(jié)果：0 □ l+ □ 2+ □ 3+ □ 無(wú)法判讀□結(jié)論：陽(yáng)性□；不確定□；陰性□；無(wú)法判讀□檢測(cè)人員：技術(shù)員

16、 病理醫(yī)師,HER2 ISH 檢測(cè)報(bào)告,檢測(cè)信息：探針信息(生產(chǎn)商/商品號(hào)) 檢測(cè)方法 對(duì)照設(shè)置情況 陽(yáng)性對(duì)照□ 陰性對(duì)照□ 樣本量是否足夠用于評(píng)估是□否□IHC檢測(cè)結(jié)果0 □ l+ □ 2+ □3+ □無(wú)法判讀□判

17、讀結(jié)果： 用于評(píng)估的腫瘤細(xì)胞數(shù)量 HER2信號(hào)總數(shù)／CEPl7信號(hào)總數(shù) HER2信號(hào)數(shù)平均值／細(xì)胞核 CEPl7信號(hào)數(shù)平均值／細(xì)胞核 17號(hào)染色體是否為多體是□否□結(jié)論： 陽(yáng)性(擴(kuò)增) □ 陰性(無(wú)擴(kuò)增) □ 無(wú)法判讀 □檢測(cè)人員：技術(shù)員

18、 病理醫(yī)生,實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制 （1）,HER2蛋白和基因擴(kuò)增的檢測(cè)均應(yīng)在內(nèi)、外部質(zhì)量控制良好的病理實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)必須嚴(yán)格按照指南要求執(zhí)行，以保證結(jié)果可靠不具備HER2檢測(cè)條件的單位應(yīng)按照指南要求，妥善處理和準(zhǔn)備好標(biāo)本，提供給有質(zhì)量保證的病理實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè),實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制 （2）,實(shí)驗(yàn)室內(nèi)、外部質(zhì)量控制和SOP的主要要求如下準(zhǔn)備開(kāi)展GC HER2檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選擇1～2家已較好開(kāi)展該項(xiàng)檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)進(jìn)行25～100例標(biāo)本的對(duì)比驗(yàn)證或通過(guò)

19、參加有關(guān)外部質(zhì)量控制活動(dòng)來(lái)實(shí)現(xiàn)，外部質(zhì)控陽(yáng)性和陰性結(jié)果的一致性應(yīng)達(dá)到90％以上，每年應(yīng)進(jìn)行1～2次從事GC HER2檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員和病理醫(yī)師應(yīng)進(jìn)行必要的培訓(xùn)和資格考核,實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制 （3）,實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立完善的SOP，并做好每次檢測(cè)情況的記錄和存檔工作任何改變操作程序和試劑的行為均應(yīng)重新進(jìn)行嚴(yán)格的驗(yàn)證內(nèi)部質(zhì)控應(yīng)包括同一組織不同批次染色結(jié)果的重復(fù)性分析，每次染色陽(yáng)性、陰性對(duì)照的設(shè)置，如有可能還應(yīng)沒(méi)置包括低表達(dá)／低擴(kuò)增對(duì)照檢測(cè)

20、相關(guān)的儀器和設(shè)備需定期維護(hù)、校驗(yàn),,類似乳腺癌亮視野檢測(cè)方法有優(yōu)勢(shì),Her2檢測(cè)流程,樣本收集,鏡下觀察,異質(zhì)性高需要觀察整張切片,,檢測(cè)所需時(shí)間,胃癌進(jìn)展快，宜及時(shí)獲得結(jié)果多學(xué)科參與,結(jié)果判讀,與乳腺癌有所不同,,,胃癌HER2檢測(cè)： 基本過(guò)程和特殊性,數(shù)量、質(zhì)量合適的含有腫瘤組織的活檢標(biāo)本 具有代表性的手術(shù)切除標(biāo)本,多學(xué)科協(xié)作共同努力 醫(yī)生和技術(shù)員知識(shí)更新和觀念改變 患者和醫(yī)生,多學(xué)科協(xié)作檢測(cè)HER2：臨床醫(yī)生之角

21、色,采樣 手術(shù)和胃鏡活檢（6-8塊組織） 固定 10%中性緩沖福爾馬林樣本送檢（離體時(shí)間）30分鐘結(jié)果解讀 HER2 + IHC 0 1+ 2+ 3+ HER2 陽(yáng)性,多學(xué)科協(xié)作檢測(cè)HER2：病理醫(yī)生之角色,Wolff AC, et al. J Clin Oncol 2007;25:118–145.,檢測(cè)

22、結(jié)果分析檢查備檢標(biāo)本是否可用正確設(shè)立內(nèi)部對(duì)照組依照國(guó)際評(píng)分系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)分檢測(cè)結(jié)果報(bào)告使用標(biāo)準(zhǔn)化HER2檢測(cè)結(jié)果報(bào)告表報(bào)告內(nèi)容應(yīng)包括標(biāo)本取樣，固定，檢測(cè)方法及評(píng)分系統(tǒng)多學(xué)科檢測(cè)治療小組(MDT)會(huì)議,學(xué)科協(xié)作檢測(cè)HER2：技術(shù)員之角色,處理: 避免影響檢測(cè)結(jié)果之因素-- 最佳固定時(shí)間及固定方法-- 石蠟包埋-- 組織切片的合理時(shí)間 (最好于HER2檢測(cè)前切片)-- 標(biāo)本脫蠟方法: 使用標(biāo)準(zhǔn)化/經(jīng)驗(yàn)證之檢測(cè)步驟