HER2靶向抗體抗高表達(dá)HER2腫瘤細(xì)胞生長與轉(zhuǎn)移的作用與機(jī)制研究.pdf

1、背景和目的：
　　HER2/ErbB2/P185屬于人表皮生長因子受體家族，對細(xì)胞增殖、分化、遷移、凋亡等起到主要的調(diào)控作用。已知HER2在許多人類惡性腫瘤特別是胃癌和乳腺癌中過度表達(dá)，導(dǎo)致細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)控異常以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展，因此HER2已成為腫瘤靶向藥物開發(fā)的一個(gè)重要靶點(diǎn)。抗HER2抗體藥物如Trastuzumab和Pertuzumab已經(jīng)陸續(xù)上市，但這些藥物仍舊存在臨床有效率低和藥物耐受的問題，這促使著人們繼續(xù)研究和開發(fā)

2、新一代的腫瘤靶向藥物和更優(yōu)化的腫瘤治療方案。本課題組開發(fā)了一株新型抗HER2人鼠嵌合抗體chA21，前期研究表明chA21對人乳腺癌細(xì)胞BT-474和卵巢癌細(xì)胞SKOV-3裸鼠皮下移植瘤具有良好的抗腫瘤活性。本研究擬在新建立的人胃癌移植瘤模型及高表達(dá)HER2的自發(fā)轉(zhuǎn)移性乳腺癌小鼠移植瘤模型中探索抗HER2抗體等靶向藥物的抗腫瘤活性和作用機(jī)制，并比較該抗體與Trastuzumab作用的異同點(diǎn)。
　　材料與方法：
　?。?）取4

3、-5周齡雌性裸鼠，注射高表達(dá)表皮生長因子受體HER2的人胃癌細(xì)胞株NCI-N87，建立移植瘤模型。待腫瘤長至約100mm3時(shí)分組，抗體給藥組劑量均為20mg/kg，每周1-2次。每周兩次測量腫瘤長徑和短徑，計(jì)算腫瘤生長速度與抑制率（用T/C值表示，即治療組相對腫瘤體積/PBS對照組相對腫瘤體積）。并利用免疫組化及免疫印跡的方法檢測抗體處理的腫瘤細(xì)胞中HER2受體、ERK及AKT信號通路蛋白的表達(dá)和磷酸化水平變化情況。
　?。?）將

4、重組HER2全長基因轉(zhuǎn)染含有熒光素酶基因的小鼠乳腺癌細(xì)胞系4T1-Luc，用G418加壓篩選，采用流式細(xì)胞術(shù)和免疫印跡方法鑒定4T1-Luc穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株中HER2表達(dá)。將細(xì)胞注射BALB/c小鼠或裸鼠皮下乳房墊，待腫瘤生長穩(wěn)定后隨機(jī)分為4組給藥，即PBS對照、chA21、Trastuzumab和抗體聯(lián)合組。每周2次測量腫瘤體積，并計(jì)算抑瘤率。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)用活體動物成像儀監(jiān)測體內(nèi)腫瘤轉(zhuǎn)移情況。
　　結(jié)果：
　?。?）實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)時(shí)，c

5、hA21、Trastuzumab和聯(lián)用組各組腫瘤體積T/C值分別為62％、39%和7.0%；腫瘤體積抑制率分別為38.88%、60.14%和92.73%；瘤重抑制率分別為39.58%、59.46%和91.89%。chA21給藥組小鼠的N87移植瘤中HER2的蛋白水平與對照相比顯著下降，HER2受體1248位酪氨酸的磷酸化水平也顯著下降。Trastuzumab給藥組的HER2蛋白水平和磷酸化水平均沒有明顯變化。同時(shí)，chA21組移植瘤中E

6、RK和Akt通路活性與對照組也有明顯變化，Trastuzumab組均沒有顯著變化。HE染色及免疫組化(IHC)結(jié)果顯示，與PBS對照腫瘤切片相比，chA21給藥組的腫瘤組織中微血管數(shù)目減少，凋亡細(xì)胞增多；與PBS對照腫瘤切片相比，chA21給藥組的腫瘤組織中微血管數(shù)目減少，凋亡細(xì)胞增多；HER2染色水平也有顯著降低，與上述western blotting結(jié)果一致。Trastuzumab給藥組與PBS組比較無顯著變化。
　?。?）經(jīng)

7、過G418篩選獲得了多個(gè)4T1-Luc/HER2穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株克隆，流式細(xì)胞術(shù)和免疫印跡均證實(shí)HER2高表達(dá)。這些克隆均具有良好的成瘤性，細(xì)胞注射1周后可見腫瘤穩(wěn)定生長，2-3周后可觀察到腫瘤轉(zhuǎn)移到肺、面部、腹股溝等部位。在BALB/c小鼠中，抗體聯(lián)合組抑瘤率達(dá)43.3%，與PBS對照組之間的差異有顯著性(P<0.05)，并且明顯優(yōu)于抗體單用組抑瘤率(chA21組為11.1%，Trastuzumab組為23%)。而且，抗體聯(lián)合組在小鼠肺部的

8、腫瘤轉(zhuǎn)移灶的數(shù)目和熒光強(qiáng)度與對照組相比明顯降低。
　　結(jié)論：
　?。?）在NCI-N87人胃癌移植瘤模型中，chA21單用抗腫瘤效果稍弱于Trastuzumab，但與Trastuzumab聯(lián)用具有協(xié)同抗腫瘤活性。同時(shí)，chA21具有顯著下調(diào)腫瘤細(xì)胞 HER2受體表達(dá)的特點(diǎn)，而 Trastuzumab該作用不明顯，提示chA21的抗腫瘤作用機(jī)理與Trastuzumab有所不同。因此，我們的研究結(jié)果初步顯示了新型抗HER2抗體c