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文檔簡介
1、背景和目的:
HER2/ErbB2/P185屬于人表皮生長因子受體家族,對細胞增殖、分化、遷移、凋亡等起到主要的調(diào)控作用。已知HER2在許多人類惡性腫瘤特別是胃癌和乳腺癌中過度表達,導致細胞信號轉導的調(diào)控異常以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展,因此HER2已成為腫瘤靶向藥物開發(fā)的一個重要靶點??笻ER2抗體藥物如Trastuzumab和Pertuzumab已經(jīng)陸續(xù)上市,但這些藥物仍舊存在臨床有效率低和藥物耐受的問題,這促使著人們繼續(xù)研究和開發(fā)
2、新一代的腫瘤靶向藥物和更優(yōu)化的腫瘤治療方案。本課題組開發(fā)了一株新型抗HER2人鼠嵌合抗體chA21,前期研究表明chA21對人乳腺癌細胞BT-474和卵巢癌細胞SKOV-3裸鼠皮下移植瘤具有良好的抗腫瘤活性。本研究擬在新建立的人胃癌移植瘤模型及高表達HER2的自發(fā)轉移性乳腺癌小鼠移植瘤模型中探索抗HER2抗體等靶向藥物的抗腫瘤活性和作用機制,并比較該抗體與Trastuzumab作用的異同點。
材料與方法:
?。?)取4
3、-5周齡雌性裸鼠,注射高表達表皮生長因子受體HER2的人胃癌細胞株NCI-N87,建立移植瘤模型。待腫瘤長至約100mm3時分組,抗體給藥組劑量均為20mg/kg,每周1-2次。每周兩次測量腫瘤長徑和短徑,計算腫瘤生長速度與抑制率(用T/C值表示,即治療組相對腫瘤體積/PBS對照組相對腫瘤體積)。并利用免疫組化及免疫印跡的方法檢測抗體處理的腫瘤細胞中HER2受體、ERK及AKT信號通路蛋白的表達和磷酸化水平變化情況。
?。?)將
4、重組HER2全長基因轉染含有熒光素酶基因的小鼠乳腺癌細胞系4T1-Luc,用G418加壓篩選,采用流式細胞術和免疫印跡方法鑒定4T1-Luc穩(wěn)轉細胞株中HER2表達。將細胞注射BALB/c小鼠或裸鼠皮下乳房墊,待腫瘤生長穩(wěn)定后隨機分為4組給藥,即PBS對照、chA21、Trastuzumab和抗體聯(lián)合組。每周2次測量腫瘤體積,并計算抑瘤率。實驗結束時用活體動物成像儀監(jiān)測體內(nèi)腫瘤轉移情況。
結果:
?。?)實驗終點時,c
5、hA21、Trastuzumab和聯(lián)用組各組腫瘤體積T/C值分別為62%、39%和7.0%;腫瘤體積抑制率分別為38.88%、60.14%和92.73%;瘤重抑制率分別為39.58%、59.46%和91.89%。chA21給藥組小鼠的N87移植瘤中HER2的蛋白水平與對照相比顯著下降,HER2受體1248位酪氨酸的磷酸化水平也顯著下降。Trastuzumab給藥組的HER2蛋白水平和磷酸化水平均沒有明顯變化。同時,chA21組移植瘤中E
6、RK和Akt通路活性與對照組也有明顯變化,Trastuzumab組均沒有顯著變化。HE染色及免疫組化(IHC)結果顯示,與PBS對照腫瘤切片相比,chA21給藥組的腫瘤組織中微血管數(shù)目減少,凋亡細胞增多;與PBS對照腫瘤切片相比,chA21給藥組的腫瘤組織中微血管數(shù)目減少,凋亡細胞增多;HER2染色水平也有顯著降低,與上述western blotting結果一致。Trastuzumab給藥組與PBS組比較無顯著變化。
?。?)經(jīng)
7、過G418篩選獲得了多個4T1-Luc/HER2穩(wěn)轉細胞株克隆,流式細胞術和免疫印跡均證實HER2高表達。這些克隆均具有良好的成瘤性,細胞注射1周后可見腫瘤穩(wěn)定生長,2-3周后可觀察到腫瘤轉移到肺、面部、腹股溝等部位。在BALB/c小鼠中,抗體聯(lián)合組抑瘤率達43.3%,與PBS對照組之間的差異有顯著性(P<0.05),并且明顯優(yōu)于抗體單用組抑瘤率(chA21組為11.1%,Trastuzumab組為23%)。而且,抗體聯(lián)合組在小鼠肺部的
8、腫瘤轉移灶的數(shù)目和熒光強度與對照組相比明顯降低。
結論:
(1)在NCI-N87人胃癌移植瘤模型中,chA21單用抗腫瘤效果稍弱于Trastuzumab,但與Trastuzumab聯(lián)用具有協(xié)同抗腫瘤活性。同時,chA21具有顯著下調(diào)腫瘤細胞 HER2受體表達的特點,而 Trastuzumab該作用不明顯,提示chA21的抗腫瘤作用機理與Trastuzumab有所不同。因此,我們的研究結果初步顯示了新型抗HER2抗體c
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