中國(guó)乳腺癌HER2基因檢測(cè)、臨床病理特征分析及流行病學(xué)研究.pdf

1、目前，分子診斷技術(shù)在乳腺癌個(gè)體化診療的臨床實(shí)踐中發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用。依據(jù)受體狀態(tài)選擇乳腺癌內(nèi)分泌治療和分子靶向治療成為個(gè)體化診療的典范，尤其是人表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER2）在乳腺癌治療中的地位越來(lái)越受重視，不僅可以預(yù)測(cè)細(xì)胞毒性藥物葸環(huán)類或紫杉類藥物的療效，而且已經(jīng)成為評(píng)價(jià)抗HER2靶向藥物臨床獲益的重要分子標(biāo)志物。針對(duì)HER2的單克隆抗體曲妥珠單抗，使HER2陽(yáng)性乳腺癌患者復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)明顯降低，無(wú)論單藥、與化療聯(lián)合或輔助治療均能夠持續(xù)

2、改善患者的無(wú)病生存時(shí)間，因其在乳腺癌治療取得的卓越療效，成為腫瘤分子靶向治療的代表。因此，根據(jù)HER2表達(dá)狀態(tài)制定細(xì)胞毒性藥物及靶向藥物的合理治療方案，并預(yù)測(cè)藥物療效和評(píng)價(jià)預(yù)后已經(jīng)成為乳腺癌診療的主要策略。那么，如何準(zhǔn)確檢測(cè)HER2的狀態(tài)，為乳腺癌患者的診斷、治療和評(píng)價(jià)提供依據(jù)，成為目前一項(xiàng)意義重大的緊迫任務(wù)。
　　 HER2定位于17q12，是表皮生長(zhǎng)因子受體家族(EGFR)的成員之一，HER2基因可以編碼分子量為185KDa

3、的酪氨酸激酶活性跨膜糖蛋白。HER2與配體結(jié)合形成二聚體，構(gòu)象發(fā)生改變，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)受體酪氨酸激酶的磷酸化，引起信號(hào)通路上的連鎖反應(yīng)，促進(jìn)細(xì)胞增殖分化。國(guó)內(nèi)外研究報(bào)道，HER2過(guò)度表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。然而，隨著國(guó)內(nèi)HER2檢測(cè)的逐步開(kāi)展以及曲妥珠單抗的臨床應(yīng)用，在HER2檢測(cè)準(zhǔn)確性及其臨床實(shí)踐中的指導(dǎo)意義方面暴露出一系列問(wèn)題:
　　 一、HER2的檢測(cè)方法多種多樣，但檢測(cè)技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化、檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性、不

4、同方法的一致性以及進(jìn)口檢測(cè)試劑價(jià)格昂貴等問(wèn)題亟待解決。
　　 二、中國(guó)乳腺癌患者HER2表達(dá)的流行病學(xué)情況是否與國(guó)外存在差異仍不明確。
　　 三、17號(hào)染色體多倍體在中國(guó)乳腺癌患者中的表達(dá)情況，對(duì)HER2狀態(tài)的影響，以及與臨床病理特征的關(guān)系仍不清楚。
　　 四、臨床實(shí)踐中是否可以用血清代替腫瘤組織標(biāo)本檢測(cè)HER2的狀態(tài)仍存在爭(zhēng)議。
　　 為此，我們?cè)噲D從以上幾個(gè)方面進(jìn)行研究，研究?jī)?nèi)容分為四個(gè)部分:

5、　　 第一部分:國(guó)產(chǎn)GLP和進(jìn)口PathVysionFISH探針試劑盒檢測(cè)乳腺癌HER2基因狀態(tài)的比較研究。通過(guò)收集108例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌腫瘤組織標(biāo)本，分別采用國(guó)產(chǎn)試劑盒GLP和進(jìn)口試劑盒VysisPathVysion探針檢測(cè)乳腺癌患者腫瘤組織HER2基因表達(dá)水平，比較2種試劑檢測(cè)HER2基因狀態(tài)的差異。結(jié)果表明，與Vysis探針相比，國(guó)產(chǎn)GLPHER2探針試劑盒在檢測(cè)乳腺癌HER2基因擴(kuò)增的敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值均

6、高，且具有價(jià)格優(yōu)勢(shì)，在國(guó)內(nèi)臨床評(píng)價(jià)乳腺癌HER2基因狀態(tài)中具有廣泛應(yīng)用價(jià)值。
　　 第二部分:中國(guó)乳腺癌HER2表達(dá)的流行病學(xué)研究。運(yùn)用免疫組織化學(xué)(IHC)和原位雜交技術(shù)(FISH)分別評(píng)價(jià)了不同地域和不同種族3，149例中國(guó)乳腺癌患者HER2的表達(dá)水平，分析了HER2的表達(dá)與地理分布及臨床病理特征的相關(guān)性。結(jié)果表明，中國(guó)乳腺癌患者發(fā)病年齡較西方早，臨床病理特征與美國(guó)和歐洲相比，腫瘤負(fù)荷較大(p＜0.001)、組織分級(jí)較差(p

7、＜0.001)、且ER/PR多為陰性(p＜0.001)。提示，中國(guó)乳腺癌患者的腫瘤侵襲性可能更強(qiáng)。HER2蛋白過(guò)表達(dá)率和基因擴(kuò)增率分別為23.3％和27.5%，兩者一致率達(dá)71.2%(Kappa=0.494，p＜0.001)。HER2基因擴(kuò)增與臨床分期晚(Ⅲ/Ⅳ)(p=0.002)、腫瘤負(fù)荷大(＞5cm)(p=0.002)、組織分級(jí)差(p＜0.001)、絕經(jīng)(p＜0.001)、ER/PR表達(dá)陰性(p=0.002)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移≥4個(gè)(p

8、＜0.001)密切相關(guān)。南方與北方乳腺癌患者的HER2擴(kuò)增狀態(tài)無(wú)顯著差異(p＞0.05)。本研究揭示了中國(guó)乳腺癌HER2蛋白過(guò)表達(dá)和基因擴(kuò)增流行病學(xué)特征，以及病理特征與西方人群的差異，為乳腺癌個(gè)體化治療和早期預(yù)防提供有價(jià)值的理論依據(jù)。
　　 第三部分:17號(hào)染色體多倍體與HER2表達(dá)的相關(guān)性研究。運(yùn)用FISH技術(shù)檢測(cè)了348例乳腺癌患者的HER2基因和17號(hào)染色體CEP17拷貝數(shù)的情況，結(jié)合HER2蛋白表達(dá)(IHC)情況和相關(guān)臨

9、床病理特征進(jìn)行分組對(duì)比分析。結(jié)果表明，所有患者中CEP17平均拷貝數(shù)為2.1(1.0-12.4)，17號(hào)染色體多倍體的比率(CEP17≥3)為13.8%(48/384)。HER2基因拷貝數(shù)＞6的患者占26.4%(92/348)，HER2/CEP17＞2.2的占25.3%(88/348)。HER2拷貝數(shù)＞6的患者中，17號(hào)染色體多倍體的比率占38.0%(35/92)，HER2蛋白表達(dá)與HER2基因拷貝數(shù)以及比值密切相關(guān)。17號(hào)染色體多倍體

10、與HER2蛋白表達(dá)或基因擴(kuò)增相關(guān)，但相關(guān)性較差（分別為r=0.271，p＜0.05和r=0.223，p＜0.05）。在HER2拷貝數(shù)≤6的患者中，17號(hào)染色多倍體的比率占5.4%(5/92)。單純17號(hào)染色多倍體組的臨床病理特征更傾向于HER2陰性組的病理特征。提示，17號(hào)染色體信號(hào)的增加影響了部分HER2結(jié)果的判讀，但單純的17號(hào)染色體多倍體并不能作為HER2基因擴(kuò)增的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。
　　 第四部分:檢測(cè)乳腺癌患者血清中HER

11、2ECD的水平。本研究收集了我院Ⅰ-ⅢA期乳腺癌患者術(shù)前血232例，運(yùn)用ELISA法檢測(cè)血清HER2ECD水平，IHC法和FISH法檢測(cè)配對(duì)腫瘤組織HER2的表達(dá)，分析血清HER2ECD表達(dá)與臨床病理特征關(guān)系及臨床意義。結(jié)果表明，血清HER2ECD的中位濃度為6.8ng/ml，HER2ECD水平升高的界值為7.4ng/ml，低于轉(zhuǎn)移性乳腺癌血清HER2ECD水平的臨界值(15ng/ml)。89例(38.3%)患者血清HER2ECD水平升

12、高，而腫瘤組織77例(33.2%)HER2陽(yáng)性表達(dá)，一致率達(dá)76.7%。血清HER2ECD升高與絕經(jīng)(p＜0.001)、高級(jí)別組織分級(jí)(p＜0.001)、ER-(p=0.007)、PR-(p＜0.001)、CA153水平升高(p=0.039)和TPS水平升高(p=0.018)密切相關(guān)。與單純檢測(cè)腫瘤組織HER2表達(dá)相比，同時(shí)聯(lián)合檢測(cè)術(shù)前血清中HER2ECD水平能提供更多的信息。我們支持降低術(shù)前血清中HER2ECD的界值指標(biāo)更有利于評(píng)價(jià)乳

13、腺癌患者HER2的狀態(tài)及預(yù)后。
　　 本研究通過(guò)回答上述問(wèn)題，明確了HER2國(guó)產(chǎn)試劑盒廣泛的應(yīng)用價(jià)值、獲得了中國(guó)乳腺癌HER2表達(dá)的流行病學(xué)數(shù)據(jù)、了解了17號(hào)染色體多倍體如何影響HER2的表達(dá)、闡述了血清代替組織標(biāo)本檢測(cè)HER2狀態(tài)的可行性，為今后臨床實(shí)踐中準(zhǔn)確判讀HER2狀態(tài)提供了依據(jù)，推動(dòng)了HER2檢測(cè)技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化及乳腺癌個(gè)體化靶向治療的臨床應(yīng)用。
　　 第一部分，GLP和PathVysionHER2探針試劑盒檢測(cè)乳

14、腺癌HER2基因狀態(tài)的比較研究
　　 目的：通過(guò)與進(jìn)口VysisPathVysionHER2探針試劑盒（簡(jiǎn)稱“VysisPathVysion探針試劑”）比較，評(píng)價(jià)國(guó)產(chǎn)金菩嘉GLPHER2探針試劑盒（簡(jiǎn)稱“GLP探針試劑”）檢測(cè)乳腺癌患者HER2基因狀態(tài)的臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　 方法：收集108例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌腫瘤組織標(biāo)本，分別采用GLP和VysisPathVysionHER2探針試劑運(yùn)用FISH技術(shù)檢測(cè)乳腺癌患者HER2

15、基因擴(kuò)增狀態(tài)。以IHC染色結(jié)果為參考，比較2種探針試劑檢測(cè)乳腺癌患者HER2基因狀態(tài)的差異，并評(píng)價(jià)GLPHER2探針試劑檢測(cè)乳腺癌患者組織標(biāo)本中HER2基因擴(kuò)增的敏感度、特異度、準(zhǔn)確度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和陰性預(yù)測(cè)值。比較2種試劑盒不同時(shí)間段檢測(cè)同一標(biāo)本的重復(fù)性和穩(wěn)定性。
　　 結(jié)果：GLPHER2探針和PathVysionHER2探針檢測(cè)乳腺癌患者組織標(biāo)本中HER2基因擴(kuò)增率分別為25.0%(27/108)和26.9%(29/108)

16、。與PathVysionHER2探針相比，GLPHER2探針檢測(cè)乳腺癌患者組織標(biāo)本中HER2基因擴(kuò)增的敏感度、特異度和準(zhǔn)確度分別為89.7%(26/29)、98.7%(78/79)和96.3%(104/108)，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值(PPV)和陰性預(yù)測(cè)值(NPV)均為96.3%(26/27，78/81)。GLPHER2探針檢出17號(hào)染色體多倍體的敏感度、特異度和準(zhǔn)確度分別為93.3%(14/15)、100%(93/93)和99.1%(107/10

17、8)。在1個(gè)月內(nèi)，均間隔5天時(shí)間,4次分別檢測(cè)了同一標(biāo)本的HER2基因狀態(tài)，VysisPathVysionHER2試劑盒檢測(cè)結(jié)果表明,4次檢測(cè)一致率為100%。GLP試劑盒的檢測(cè)結(jié)果同樣表明,4次檢測(cè)的一致率為100%，提示2種試劑盒的穩(wěn)定性和可重復(fù)性較高。
　　 結(jié)論：GLPHER2探針試劑盒在檢測(cè)乳腺癌患者組織標(biāo)本中HER2基因擴(kuò)增的敏感度和特異度高，在臨床評(píng)價(jià)乳腺癌HER2基因狀態(tài)中具有廣泛應(yīng)用價(jià)值。
　　 第二部

18、分，中國(guó)乳腺癌HER2表達(dá)的流行病學(xué)研究及臨床病理特征分析
　　 本研究運(yùn)用免疫組織化學(xué)（Immunohistochemistry,IHC）和原位雜交技術(shù)(Fuorescenceinsituhybridization，F(xiàn)ISH)分別評(píng)價(jià)了中國(guó)不同地域和不同種族3，149例乳腺癌患者HER2的表達(dá)水平，分析了HER2表達(dá)的流行病學(xué)特征、與地理位置以及及臨床病理特征的關(guān)系，闡述了中國(guó)乳腺癌患者的病理特征與西方國(guó)家的差異。結(jié)果表明，中

19、國(guó)乳腺癌患者發(fā)病年齡較西方早，有2個(gè)發(fā)病高峰，臨床病理特征與美國(guó)、歐洲相比，腫瘤負(fù)荷較大(p＜0.001)、組織分級(jí)較差(p＜0.001)、且ER/PR多為陰性(p＜0.001)，提示，中國(guó)乳腺癌患者的腫瘤侵襲性可能更強(qiáng)。HER2蛋白過(guò)表達(dá)率和基因擴(kuò)增率分別為23.3%和27.5%，兩者一致率達(dá)71.2%(Kappa=0.494，p＜0.001)。其中，IHC檢測(cè)結(jié)果為2+的患者中，F(xiàn)ISH檢測(cè)到72.9%為HER2基因無(wú)擴(kuò)增。隨機(jī)比對(duì)

20、5個(gè)參與檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室間的HER2結(jié)果顯示，IHC和FISH檢測(cè)結(jié)果不一致率分別為5%-28%、1%-16%。HER2基因擴(kuò)增與腫瘤進(jìn)展期(p=0.002)、腫瘤直徑＞5cm(p=0.002)、中度或差的組織分級(jí)(p＜0.001)、絕經(jīng)(p＜0.001)、ER/PR陰性(p=0.002)以及淋巴結(jié)浸潤(rùn)＞4枚(p＜0.001)密切相關(guān)。滿族和回族人群HER2擴(kuò)增率顯著高于其他少數(shù)民族(p＜0.001)。南方與北方乳腺癌患者的HER2擴(kuò)增狀態(tài)

21、無(wú)顯著差異(p＞0.05)。本研究揭示了中國(guó)乳腺癌HER2蛋白過(guò)表達(dá)和基因擴(kuò)增流行病學(xué)特征，闡述了中國(guó)乳腺癌患者臨床病理特征與西方人群的差異，為乳腺癌個(gè)體化治療和早期預(yù)防提供有價(jià)值的理論依據(jù)。
　　 第三部分，17號(hào)染色體多倍體對(duì)乳腺癌HER2基因狀態(tài)的影響
　　 目的:本研究探討了17號(hào)染色體多倍體在判讀浸潤(rùn)性乳腺癌HER2檢測(cè)結(jié)果中的影響。目前，美國(guó)ASCO/CAP指南將FISH檢測(cè)HER2陽(yáng)性定義為單個(gè)核HER2基

22、因拷貝數(shù)＞6或HER2/CEP17比值＞2.2。但這一準(zhǔn)側(cè)存在一定的矛盾，提示17號(hào)染色體多倍體可能會(huì)影響HER2基因狀態(tài)的結(jié)果判讀。
　　 方法:收集了自2010年5月至2011年8月中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院就診的乳腺癌患者腫瘤石蠟組織標(biāo)本348例。運(yùn)用FISH技術(shù)檢測(cè)腫瘤組織HER2和CEP17的拷貝數(shù)變化。IHC檢測(cè)HER2蛋白表達(dá)狀態(tài)。
　　 結(jié)果:所有患者中CEP17平均拷貝數(shù)為2.1(1.0-12.4)，17號(hào)

23、染色體多倍體的比率（CEP17≥3）為13.8%(48/384)。HER2基因拷貝數(shù)＞6的患者占26.4%(92/348)，HER2/CEP17＞2.2的占25.3%(88/348)。HER2拷貝數(shù)＞6的患者中，17號(hào)染色體多倍體的比率占38.0%(35/92)，HER2蛋白表達(dá)與HER2基因拷貝數(shù)以及比值密切相關(guān)。17號(hào)染色體多倍體與HER2蛋白表達(dá)或基因擴(kuò)增相關(guān),但相關(guān)性較差（分別為r=0.271，p＜0.05和，r=0.223，p

24、＜0.05）。在HER2拷貝數(shù)≤6的患者中，17號(hào)染色多倍體的比率占5.4%(5/92)。與HER2陽(yáng)性組的臨床病理特征相比，單純17號(hào)染色多倍體組的臨床病理特征更傾向于HER2陰性組的病理特征。
　　 結(jié)論:17號(hào)染色體CEP17拷貝數(shù)的增加影響了部分HER2結(jié)果的判讀。17號(hào)染色體多倍體與HER2蛋白/基因的表達(dá)相關(guān)，但相關(guān)性差，且17號(hào)染色多倍體組的臨床病理特征更傾向于HER2陰性組的病理特征，提示單純的17號(hào)染色體多倍體

25、并不能作為HER2基因擴(kuò)增的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。
　　 第四部分，乳腺癌血清HER2ECD的表達(dá)研究
　　 目的:目前對(duì)血清中HER2胞外區(qū)的研究多集中在復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移晚期乳腺癌患者，對(duì)早期乳腺癌患者血清中HER2胞外區(qū)表達(dá)的研究甚少。本研究分析了乳腺癌血清HER2ECD表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系及臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　 方法:收集中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院Ⅰ-ⅢA期乳腺癌患者術(shù)前血以及配對(duì)腫瘤組織標(biāo)本232例，運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附法(

26、ELISA)評(píng)價(jià)血清HER2ECD水平，IHC法和FISH法檢測(cè)腫瘤組織HER2表達(dá)，分析乳腺癌血清HER2ECD表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系。
　　 結(jié)果:血清HER2ECD的中位濃度為6.8ng/ml(范圍1.3-42.1ng/ml)，HER2ECD水平升高的界值為7.4ng/ml，低于轉(zhuǎn)移性乳腺癌HER2ECD水平的臨界值15ng/ml。89例(38.3%)患者血清HER2ECD表達(dá)水平升高，而腫瘤組織77例(33.2%)

27、HER2陽(yáng)性表達(dá)，一致率達(dá)76.7%。血清HER2ECD升高與絕經(jīng)(p＜0.001)、高級(jí)別組織分級(jí)(p＜0.001)、ER-(p=0.007)、PR-(p＜0.001)、CA153水平升高(p=0.039)和TPS水平升高(p=0.018)密切相關(guān)。
　　 結(jié)論:與單獨(dú)通過(guò)腫瘤組織檢測(cè)HER2表達(dá)狀態(tài)相比，聯(lián)合術(shù)前血清中HER2ECD水平能提供更多信息。我們支持降低術(shù)前血清中HER2ECD臨界值指標(biāo)更有利于評(píng)價(jià)早期乳腺癌患者腫