沙眼衣原體檢測課件

1、1,生殖道沙眼衣原體感染的實驗室診斷,朱參勝陜西省地方病防治研究所陜西省皮膚性病防治所,陜西西安,CT感染的發(fā)病機理、基因型別以及臨床表現CT細胞內寄生，細胞內的網狀體復制形態(tài)，細胞外的原體有感染性原體內化后定位于包涵體內，防止被溶酶體融合免疫反應相關的炎性反應通常不十分明顯，多數表現為隱性感染CT誘導多種防御機制的修改和破壞，引起CT持續(xù)感染基因型A-C是眼部感染基因型D-K引起泌尿生殖道、直腸、咽喉和眼結膜感染，圍

2、產期孕婦感染CT可引起新生兒結膜炎、咽喉炎和肺炎多數直腸、咽喉感染，以及下生殖道感染均不表現出臨床癥狀,女性CT感染下生殖道后，通過上行至上生殖道，可誘導慢性感染，導致盆腔炎，引起宮外孕和輸卵管因素不孕不育癥許多國家采取篩查措施，通過定期檢測發(fā)現無癥狀的感染者，并治療感染者和性伴基因型A-K感染通常局限于黏膜上皮而基因型L1、L2和L3則穿過上皮，通過淋巴擴散，引起侵襲性感染，稱為性病淋巴肉芽腫（LGV)LGV存在于非洲、亞洲

3、、南美和加勒比海部分地區(qū)的地方性疾病男男人群中，已經發(fā)生了數起基因型L2的爆發(fā),生殖道沙眼衣原體感染特點,5,,高流行無癥狀感染嚴重并發(fā)癥依賴實驗室診斷,病原體檢測: 鏡檢, 培養(yǎng)抗原檢測: 快速, EIA核酸檢測: PCR,,,生殖道沙眼衣原體感染特點,6,感染后：約70％女性和50％男性為無癥狀86％的女性和55％的男性感染者持續(xù)感染時間為1年以上。 不尋求治療…….,7,生殖道沙眼衣原體感染特點近年

4、來研究： 引起活動性關節(jié)炎，與動脈硬化、冠心病有關 與HIV感染的促進作用 沙眼衣原體感染已成為全世界范圍的公共衛(wèi)生問題!,生殖道沙眼衣原體實驗室檢測方法,8,1.免疫學方法（抗原檢測） ELISA 免疫熒光法（IFA） 膠體金法2.細胞培養(yǎng)法,3.核酸檢測： PCR (Roche), LCR ( Abbott), SDA (ProbeTec BD), TMA (Aptima Gene P

5、robe) 熒光-PCR,標本的采集（同淋球菌培養(yǎng)標本的采集）,9,男性患者尿道 用男用取材拭子插入尿道 2～3cm，稍用力轉動，保留數秒鐘再取出， 以采集到粘膜上皮細胞。女性患者尿道 用同男性相似的上述方法取材。,標本的采集（同淋球菌培養(yǎng)標本的采集）,10,宮頸 仔細檢查陰道壁和宮頸，如果宮頸口外面的分泌物較多，先用無菌棉拭清除過多的宮頸粘液。將一取樣拭子插入宮頸管內1～2cm，稍用力轉動，保留10～30秒后取

6、出。直腸 將取樣拭子插入肛門2～3cm，從緊靠肛環(huán)邊的隱窩中取材。避免接觸糞便。,11,酶聯免疫吸附試驗（ELISA） 原理：Ab－Ag－Ab-酶 －底物－顯色方法：加入標本（孵育后洗板） 酶標抗體（孵育后洗板） 底 物（孵育） 終止液－判讀結果。,12,酶聯免疫吸附試驗（ELISA）結果判讀cutoff＝陰性對照＋？陽性：OD > t

7、he cutoff value 灰區(qū)（Gray Zone）: 略低于 the cutoff陰性：低于灰區(qū),13,酶聯免疫吸附試驗（ELISA）結果判讀陽性結果的確證2002年美國 CDC推薦：所有非培養(yǎng)陽性結果應用另一種方法確證為真正陽性。EIA 陽性：可進一步將樣本進行DFA、“blocking” assay 或基因診斷確證。,酶聯免疫吸附試驗（ELISA）,評 價敏感性和特異性與直接免疫熒光法相似 敏感

8、性：79－97％ 高 特異性: 97－99％ 高 試驗結果陰性時，不能完全排除沙眼衣原體感染，有可能是沙眼衣原體數量不足或標本采集不當的緣故,14,酶聯免疫吸附試驗（ELISA）,優(yōu) 點快速、方便自動化程度高，可同時檢測大批量標本結果判斷客觀性強缺 點在低感染率的人群中敏感性差與其它微生物可有交叉反應，出現假陽性結果,15,酶聯免疫吸附試驗（ELISA）,16,臨床應用 適宜用于檢測沙眼衣原體高流行率

9、的人群 臨床和健康體檢 沙眼衣原體感染的篩查,抗原快速檢測,1.原理： 2.方法：拭子＋I液－80℃10分－冷5分－滴加5滴－15分讀結果,17,抗原快速檢測,結果判斷陽性標本在結果窗見一條細線。另外，無論標本為陽性或陰性，都應在質控窗顯示一條細線，表明試劑質量合格，試驗步驟正確,18,抗原快速檢測,19,優(yōu) 點簡易，方便，快速，尤其適用于基層單位缺 點標本中需

10、要足夠數量的沙眼衣原體抗原，否則有假陰性結果,20,結論：女性尿道拭子：敏感性32.8%, 特異性99.2% 女性宮頸拭子：敏感性49.7%,特異性97.9% 結果顯示特異性較好，而較低的敏感性，提示有較高的漏檢率。,21,沙眼衣原體快速檢測試劑的現場評估,敏感性50%49.7%32.8%,特異性93.5%97.8%99.2%,試劑1,試劑2,標本男性尿道拭子宮頸拭子陰道拭子,沙眼衣原體

11、快速檢測方法的評價,核酸擴增技術,22,核酸擴增法:測定CT最敏感,首選，金標準國外抗原檢測法 (EIA、DFA和 RDT):不再推薦實時熒光PCR+自動化的核酸提取儀瑞典的變異CT株E/SW2，目標序列在發(fā)生缺失突變感染2種以上的CT株時，可能發(fā)生基因重組雙目標檢測是NAAT改進的重要標志美國CDC已經不再推薦對陽性結果進行確認但當用于性虐待的評估時，陽性結果必須用檢測另一個目標區(qū)域的第二種NAAT試驗確認,CT實驗室檢