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1、畜禽血常規(guī)檢驗(yàn)(一),臨床獸醫(yī)學(xué)教研室內(nèi)診組2012年4月,內(nèi)容,目的與要求,掌握動物血樣的采取與抗凝方法。掌握血紅蛋白測定、紅細(xì)胞及白細(xì)胞計數(shù)的操作方法與注意事項(xiàng)。,一、血樣的采取與抗凝,1、血樣的采取① 采血前的準(zhǔn)備:采血用應(yīng)事先消毒滅菌、干燥處理。采血部位應(yīng)剪毛按常規(guī)消毒。② 少量用血,一般可在耳尖、冠頂及靜脈末梢等處進(jìn)行采取。③ 多量用血,大動物可在頸靜脈處進(jìn)行采??;豬可在前腔靜脈處采??;禽類在翅內(nèi)靜脈處采取,必要時
2、可進(jìn)行心臟穿刺采取。小動物一般采用心臟采血。,,各種動物的采血部位,2、血樣的抗凝 獸醫(yī)臨床常用的抗凝劑、使用方法及用圖,見下表。,肝素,,血液學(xué)檢查項(xiàng)目與采血后可保存的時間,二、紅細(xì)胞計數(shù)(RBC) :顯微鏡計數(shù)法,1、原理 血液經(jīng)200倍稀釋后,充入血細(xì)胞計數(shù)板,用顯微鏡觀察,計數(shù)一定容積內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)并換算成每升血液中的紅細(xì)胞數(shù)。 2、器材與試劑 改良紐巴氏計數(shù)板、蓋玻片、沙利氏吸管、5ml吸管
3、、試管、小玻棒、顯微鏡、計數(shù)器、0.85%氯化鈉稀釋液。,3、方法① 用5毫升吸管準(zhǔn)確吸稀釋液2毫升于試管中,用沙利氏吸管吸取血樣10微升,用脫脂棉擦去沙利氏吸管外壁多余的血液后插入試管底部,輕輕壓出血液于稀釋液中,再用上清液吸、吹數(shù)次,以洗出沙利氏管內(nèi)黏附的血細(xì)胞,充分混勻后備用。② 將稀釋后的血樣用小玻棒取一滴,置于計數(shù)板與蓋玻片交界的邊緣,讓其自然浸入,使稀釋血樣擴(kuò)散入計數(shù)室內(nèi),靜置2~3分鐘,鏡檢。③ 計數(shù)時用低倍鏡,依次
4、計數(shù)中央大方格內(nèi)的四角和正中5個中方格,共80個小方格的紅細(xì)胞數(shù)。為避免重復(fù)和遺漏,計數(shù)時應(yīng)按一定順序進(jìn)行。注意壓在雙線上的紅細(xì)胞,遵守“數(shù)左不數(shù)右,數(shù)上不數(shù)下”計數(shù)法則。,4、計算方法 每mm3血液內(nèi)紅細(xì)胞總數(shù) = 5個中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)×5×10×200×106 = 5個中方格內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)×1010 單位:個/升式中&
5、#215;5 — 5個中方格換算成1個大方格 ×10 — 1個大方格容積為0.1微升,換算成1.0微升 ×200 — 血液的稀釋倍數(shù) ×106 — 由微升換算成升注意 防凝、防溶、取樣正確。,,5、正常參考值 健康動物除山羊的紅細(xì)胞數(shù)較多外,其他動物的紅細(xì)胞數(shù)約為6.0×1012~8.0×1012/L。6、臨床意義 ① 相對增多:脫水、急性
6、胃腸炎、腸便秘、滲出性胸膜炎、滲出性腹膜炎、某些傳染??; ② 絕對增多:紅細(xì)胞增多癥,見于代償性機(jī)能不全的心臟病及慢性肺部疾??; ③ 減少:各種貧血、出血性、溶血性、骨髓造血功能不全性貧血、營養(yǎng)不良性貧血、繼發(fā)性貧血。,三、白細(xì)胞計數(shù)(WBC) :顯微鏡計數(shù)法,1、原理: 用白細(xì)胞稀釋液破壞紅細(xì)胞后,混勻充入計數(shù)池中,在顯微鏡下計數(shù)一定容積中的白細(xì)胞數(shù),經(jīng)換算求得每升血液中的白細(xì)胞總數(shù)。2、試劑與設(shè)備:
7、 改良紐巴氏計數(shù)板、蓋玻片、沙利氏吸管、1ml吸管、試管、小玻棒、顯微鏡、計數(shù)器、白細(xì)胞稀釋液(2%冰醋酸溶液或1%鹽酸溶液)。,3、方法: 用1毫升移液管吸取白細(xì)胞稀釋液0.4毫升于小試管中,再用沙利氏吸管吸取血樣至20微升處,用脫脂棉擦去吸管周圍多余血液,然后將吸管插入小試管底部,緩慢放出血液后用上清液反復(fù)吹洗數(shù)次,以洗凈管內(nèi)所粘附的血液,充分混勻振蕩,備用。取樣與計數(shù)方法與紅細(xì)胞計數(shù)方法相同,計數(shù)在計數(shù)室四角
8、的四個大方格內(nèi)的白細(xì)胞數(shù)。,,4、計算方法: 每升血液內(nèi)白細(xì)胞總數(shù)= 四個大方格白細(xì)胞數(shù)÷4×10×20×106 單位:個/升5、注意事項(xiàng): 初學(xué)者容易把塵埃異物與白細(xì)胞混淆,可用高倍鏡觀察,白細(xì)胞有細(xì)胞核的結(jié)構(gòu),而塵埃異物的形狀不規(guī)則,無細(xì)胞結(jié)構(gòu)。,,5、正常參考值(附后表)6、臨床意義 ① 增多:細(xì)菌性感染、炎癥、白血病、惡性腫瘤、中毒性疾病。 ②
9、 減少:病毒性傳染病、犬瘟熱、貓泛白血病減少癥、各種疾病晚期;再生障礙性貧血;藥物性降低:磺胺類、氯霉素、青霉素、鏈霉素、氨基比林、水楊酸鈉等;血液原蟲病、血液孢子病。,各種健康動物血紅蛋白數(shù)、紅細(xì)胞數(shù)及白細(xì)胞數(shù)參考值,資料見:安麗英編著.獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)診斷.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社.2000年:25.,,,全自動血液細(xì)胞分析儀,檢驗(yàn)動物種類多有12種動物檢測模式,如狗、貓、馬、牛、羊、猴、鼠,并有四種用戶自定義模式。適用范圍寵物醫(yī)院
10、 動物檢疫部門畜牧獸醫(yī)院動物園科研院校實(shí)驗(yàn)中心,,操作方便嵌入式標(biāo)本處理和測量單元全新高精度血液處理技術(shù),抗凝全血9.6μl試劑自動加入,能直接感應(yīng)試劑余量排堵方便20項(xiàng)檢測結(jié)果及WBC、RBC、PLT直方圖同屏顯示 9.6μl抗凝血只需按“計數(shù)“健即被吸取分析結(jié)果可靠界面鼠標(biāo)操作,參數(shù)支持人工調(diào)整提供配套的動物
11、血檢測專用試劑有報告打印功能,,主要技術(shù)參數(shù)工作原理:電阻抗法,氰化高鐵血紅蛋白法及無氰化物的SFT法檢測參數(shù):白細(xì)胞三分群,23項(xiàng)參數(shù)(含WBC、RBC、PLT彩色直方圖)標(biāo)準(zhǔn)用量:9.6μl(全血模式)20μl(預(yù)稀釋模式)檢測速度:≥40樣本/小時,可24小時開機(jī)有自動休眠及喚醒功能結(jié)果存儲:主機(jī)自動存儲12000份樣本的全部參數(shù)包括直方圖、歷史數(shù)據(jù)的管理查詢更便捷操作語言:全中文動物種類:狗、貓、馬、牛、羊、猴、
12、鼠等八種和四種用戶自定義模式質(zhì)控方式:X-B、L-J、 、SD、CV標(biāo)準(zhǔn)方式:自動校準(zhǔn)和人工校準(zhǔn)顯示屏:大屏幕彩色液晶顯示,640 480分辨率信息:支持多種快速中文輸入接口:一個并行打印機(jī)接口,兩個USB接口,兩個PS/2接口,兩個RS232接口(支持聯(lián)網(wǎng))電源:AC220V 50HZ,血常規(guī)化驗(yàn)單,“血常規(guī)”檢查主要有四項(xiàng)指標(biāo):白細(xì)胞數(shù)(WBC計數(shù))、紅細(xì)胞數(shù)(RBC計數(shù))、血紅蛋白(HB)和血小板數(shù)(PLT計數(shù))。
13、 白細(xì)胞數(shù)(WBC),它的多少反映身體抵御、殺滅致病微生物能力的強(qiáng)弱。如果減少通常是由于病毒感染、再生障礙性貧血、傷寒或瘧疾、營養(yǎng)不良、極度衰竭,以及脾功能亢進(jìn)和自身免疫性疾病等。增多主要是急性化膿感染、炎癥存在、嚴(yán)重的組織損傷及大量的血細(xì)胞破壞、急性大出血和溶血、白血病及某些腫瘤等。 RBC、HB分別是紅細(xì)胞和血紅蛋白,是反映貧血的兩個指標(biāo)。當(dāng)發(fā)生貧血、白血病、失血等時,會減少;當(dāng)發(fā)生嘔吐、腹瀉、缺氧和心肺疾病時增多。
14、 紅細(xì)胞(RBC)計數(shù),增多的病理性原因有嚴(yán)重的肺氣腫、肺原性心臟病、真性紅細(xì)胞增多癥、慢性一氧化碳(CO)中毒等。減少的病理性原因有缺鐵性貧血、溶血性貧血、營養(yǎng)不良性貧血、再生障礙性貧血、失血性貧血等。 血紅蛋白(HB),其病理性原因與“紅細(xì)胞數(shù)”相同,但在各種貧血時,由于紅細(xì)胞與血紅蛋白含量不同,二者的減少程度可以不一致。因此,同時測定紅細(xì)胞和血紅蛋白,對貧血類型的鑒別有重要意義。 血小板數(shù)(PLT),它在止血、凝血過程
15、中起著十分重要的作用。正常畜禽每天血小板數(shù)有一定的波動,午后較早晨高,高原地區(qū)較平原地區(qū)高,妊娠中晚期升高,分娩后1-2天降低;劇烈活動和飼喂后升高,休息后又恢復(fù)到原來水平。如果低于正常值,就要引起重視,因減少常見于急性白血病、難治性貧血、脾功能亢進(jìn)、彌漫性血管內(nèi)凝血等;如果大于正常值,也不能馬虎,因在慢性粒細(xì)胞白血病、溶血性貧血及急性化膿性感染時,是增多的。,,當(dāng)血常規(guī)化驗(yàn)檢查的這些指標(biāo)偏離(指標(biāo)或高、或低)正常值范圍時,說明受檢者的
16、身體存在某一方面的病變。如果HGB值低于正常值,就說明有貧血存在,應(yīng)該進(jìn)一步檢查是什么性質(zhì)的貧血。如果HGB值高于正常值,可能是因?yàn)榛加醒t蛋白增高癥或者血液被濃縮的緣故。白細(xì)胞代表的機(jī)體的防御系統(tǒng)功能,其總數(shù)增高時,多表明有炎癥、感染存在。此時患病動物多有發(fā)熱癥狀,如果WBC值過高,并伴有嚴(yán)重的貧血,需進(jìn)一步做骨髓穿刺檢查,排除白血病的可能。WBC值低于正常值,可由接受放射線、病毒感染藥物及化學(xué)物質(zhì)中毒等引起。PLT減少時,可能會有出
17、血,如血小板減少性紫癜等;增高時,說明血液呈高凝狀態(tài),易發(fā)生血栓。其他檢查項(xiàng)目發(fā)生異常時,同樣提示機(jī)體出現(xiàn)了某一病變。,,血細(xì)胞直方圖 一、WBC直方圖: 是反映WBC體積大小的頻率分布圖。正常人WBC直方圖可見兩個明顯分離的峰,左峰為小細(xì)胞群(以淋巴細(xì)胞為主),右峰為大細(xì)胞群(以中性粒細(xì)胞為主),兩峰之間為中間細(xì)胞群(包括嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞)。小細(xì)胞群峰又高又陡,大細(xì)胞群較高較寬,中間細(xì)胞群一般為有一定寬度的平
18、坦區(qū)。小細(xì)胞群峰越高,淋巴細(xì)胞比率越大;大細(xì)胞群峰越高,中性粒細(xì)胞比率越大;而嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞增多或出現(xiàn)病理性細(xì)胞時,中間細(xì)胞群峰值增高。例如白血病時外周血中出現(xiàn)大量幼稚細(xì)胞,多分布于中間細(xì)胞群及其附近,使峰尖增高,不同白血病類型出現(xiàn)特異性直方圖?! 《BC直方圖: 是反映RBC體積大小或任何相當(dāng)于RBC體積大小范圍內(nèi)粒子的分布圖。正常RBC直方圖為偏態(tài)分布曲線圖,峰值表示一定數(shù)量的RBC體積的平均值,與R
19、BC平均體積基本一致,正常人峰值一般在82-94fl之間。直方圖峰值變低,基底部增寬,說明RBC體積大小不一,與紅細(xì)胞分布增大一致。直方圖左移,提示RBC體積較小,如缺鐵性貧血病人的RBC直方圖明顯左移,基底部顯著增寬。直方圖右移,提示RBC體積較大,見于巨幼紅細(xì)胞性貧血和新生兒。RBC直方圖有時出現(xiàn)雙峰,是貧血治療有效的證據(jù),多見于缺鐵性貧血、巨幼紅細(xì)胞性貧血病人治療后。 三、PLT直方圖: 是反映PLT體積大小分布頻率的分
20、布圖,正常PLT直方圖呈左偏態(tài)分布,峰值一般在6-10fl之間,直方圖左移,提示PLT體積偏小,直方圖右移,提示PLT體積偏大。直方圖尾部抬高或在20-30fl處出現(xiàn)另一個波峰,提示血液中可能存在較多的小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片、巨大血小板、血小板凝集及纖維蛋白等。缺鐵性貧血病人的PLT直方圖尾部明顯抬高、PLT減少及其治療過程中的直方圖多呈波浪狀。,Diagram,,,Cycle Diagram,Diagram,Diagram,Diagra
21、m,Diagram,,,Add Your Text,Diagram,Diagram,Add Your Title,Cycle Diagram,Diagram,Diagram,Progress Diagram,Block Diagram,,,,,TEXT,TEXT,TEXT,TEXT,TEXT,TEXT,TEXT,TEXT,Table,3-D Pie Chart,Block Diagram,Thank You !,www.themegal
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