pcr生物安全和防污染措施

1、上海市臨床檢驗中心黃維綱,檢驗標(biāo)本的管理生物安全和防污染,第一部分檢驗標(biāo)本的管理和防污染,實驗室管理要求建立標(biāo)本的唯一編號識別系統(tǒng)。標(biāo)本采集、運送、驗收、標(biāo)本前處理、標(biāo)本保存（或安全處置）的具體要求和操作規(guī)程，標(biāo)本全程可跟蹤。實驗室在標(biāo)本接收時應(yīng)有其狀態(tài)的詳細記錄。實驗室應(yīng)對標(biāo)本保存條件進行監(jiān)控和記錄。,一、建立標(biāo)本的唯一編號識別系統(tǒng)多采用條形碼系統(tǒng)，保證唯一性標(biāo)識。認真檢查核對患者信息。對實驗過程的時間控制要求，要

2、求記錄的時間點：應(yīng)反映標(biāo)本采集時間、標(biāo)本接收時間、測定時間、報告時間、（條形碼預(yù)制時間、關(guān)聯(lián)時間、報告打印時間）。,二、標(biāo)本采集要求：建立標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程；應(yīng)對各類標(biāo)本和不同檢測項目的采集方法程序作出明確、具體的規(guī)定。做好標(biāo)本采集的技術(shù)培訓(xùn)工作。做好標(biāo)本流程規(guī)劃和唯一性標(biāo)識的工作?？刂坪貌蓸雍退蜋z的時間。要點：采集標(biāo)本一定要正確，采集時間要合適，使用正確的標(biāo)本容器。,標(biāo)本采集時生物安全,嚴格按照生物安全和院感要求措施。嚴格執(zhí)行消

3、毒隔離制度和采集技術(shù)要求。注意利器和廢棄物的處理。,標(biāo)本采集中的防污染,使用一次性無菌及無核酸酶的材料。采集中特別注意：防止混入操作者的頭發(fā)、表皮細胞、痰液。如使用玻璃器皿，必須0.1%DEPC水處理后高壓，使RNase酶失活，并降解DECP。PCR標(biāo)本應(yīng)獨立收集，注意密閉運輸，不能使用從其他檢測如生化、免疫、血液等分出的標(biāo)本。,三、標(biāo)本運送實驗室布局應(yīng)盡量滿足及時送檢和方便患者。PCR標(biāo)本接收不宜放在標(biāo)本制備區(qū)。盡可能及

4、時送檢：靶核酸是DNA，應(yīng)在采血后8小時內(nèi)送到實驗室，靶核酸是RNA，應(yīng)在采血后4小時內(nèi)送檢并處理。時間較長，應(yīng)加冰運送和保存。加入適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑，如GITC(異硫氰酸胍鹽）。,標(biāo)本運送的生物安全注意生物安全，防止標(biāo)本損失和生物污染。使用合適容器轉(zhuǎn)運標(biāo)本，帶蓋的透明轉(zhuǎn)運盒，有生物危害標(biāo)識。標(biāo)本運送的防污染在無菌條件下及時運送。RNA檢測，應(yīng)加冰運送。,專人驗收標(biāo)本實驗室在標(biāo)本接收時應(yīng)有其狀態(tài)的詳細記錄.標(biāo)本質(zhì)量的驗收血

5、清（漿）標(biāo)本：肉眼可見的溶血、脂血分泌物標(biāo)本：泌尿生殖道分泌物，鏡檢觀察是否有上皮細胞；痰標(biāo)本中應(yīng)有白細胞。,四、標(biāo)本驗收的要求,及時分離血清和血漿。嚴格執(zhí)行離心的操作規(guī)程。嚴格控制離心后標(biāo)本轉(zhuǎn)送的時間如不能及時檢測，應(yīng)對標(biāo)本保存條件進行監(jiān)控和記錄,五、標(biāo)本前處理和保存的要求,六、PCR檢測的主要污染源和去污染方法,主要污染源臨床標(biāo)本中存在的大量待測微生物實驗室環(huán)境中的大量微生物以前擴增產(chǎn)物的殘留污染以前分析研究的特定微

6、生物科研中得到的質(zhì)?？寺?防污染措施嚴格分區(qū)實驗室，各個區(qū)域必須嚴格獨立使用各自設(shè)備、工作服、手套、通風(fēng)系統(tǒng)，每個區(qū)的試劑和廢料，必須在各自區(qū)域內(nèi)分裝和包裝，防止交叉污染。嚴格遵守工作程序：防止通過頭發(fā)、眼鏡、首飾和衣物從污染區(qū)攜帶至清潔區(qū)。,去污染措施化學(xué)清污；10%次氯酸鈉，用70%乙醇或清水洗去次氯酸鈉。擴增產(chǎn)物的修飾擴增前；紫外線（UV)照射、尿嘧啶-N-糖基化酶（UNG）方法。擴增后；呋喃并香豆素化合物（如補骨脂

7、素和異補骨脂素）加合法、引物水解法、羥胺加合法。,第二部分實驗室生物安全,實驗室生物安全,依據(jù)：《上海市一、二級病原微生物實驗室生物安全管理規(guī)范》原則： 預(yù)防為主、分級管理、單位負責(zé)、突出重點、保障安全,實驗室生物安全,要求：應(yīng)建立健全生物安全管理制度，編寫生物安全手冊實驗室范圍：BSL-1和BSL-2防護等級的病原微生物相關(guān)實驗活動的場所。項目范圍：實驗室從事與衛(wèi)生部《人間傳染的病原微生物名錄》中所規(guī)定的病原微生物菌毒種

8、、樣品有關(guān)的研究、教學(xué)、檢測、診斷等活動。,實驗室生物安全,管理要求：組織管理、備案 、人員管理、菌（毒）種管理、實驗室環(huán)境、設(shè)備與器材的消毒和廢棄物的處置、應(yīng)急處置。技術(shù)要求：生物危害評估、設(shè)施設(shè)備、個人防護、安全操作。,實驗室生物安全措施,概括成三個部分：實驗室生物安全管理實驗室設(shè)施、設(shè)備、個人防護裝備、良好的微生物操作技術(shù)實驗室防護分為一級屏障（primary burier）-實驗室設(shè)備和個人防護裝備二級屏障（sec

9、ond burier）-實驗室設(shè)施,實驗室生物安全管理要求,一、實驗室生物安全組織體系,法定代表人職責(zé),,（一）負責(zé)建立本單位生物安全管理體系，落實生物安全管理責(zé)任部門或責(zé)任人；（二）定期召開生物安全管理會議，對實驗室生物安全相關(guān)的重大事項作出決定；（三）批準(zhǔn)和發(fā)布實驗室生物安全手冊、生物危害評估等重要文件。,實驗室生物安全管理責(zé)任部門或責(zé)任人職責(zé),,（一）負責(zé)組織制（修）訂和實施實驗室生物安全手冊、生物安全規(guī)章制度、操作規(guī)范和

10、標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程；（二）負責(zé)組織對涉及的生物因子、使用動物、重組DNA以及基因修飾物質(zhì)的研究方案進行審查和風(fēng)險評估；（三）負責(zé)對本單位實驗室生物安全防護，微生物菌（毒）種和生物樣本保存和使用，實驗室安全操作，實驗室廢氣、廢水、廢棄物處置和消毒滅菌等規(guī)章制度實施情況進行監(jiān)督、檢查，并定期評估實施效果；,實驗室生物安全管理責(zé)任部門或責(zé)任人職責(zé),,（四）負責(zé)組織跟蹤國際國內(nèi)實驗室生物安全管理最新動態(tài)；（五）負責(zé)定期調(diào)查、了解實驗室工作人員

11、的健康狀況和健康監(jiān)護情況；（六）組織生物安全知識培訓(xùn)并評估培訓(xùn)效果。；,實驗室負責(zé)人職責(zé),,（一）全面負責(zé)實驗室生物安全工作；（二）決定并授權(quán)進入實驗室的工作人員；（三）監(jiān)督有關(guān)法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程的執(zhí)行，糾正違規(guī)行為并有權(quán)作出停止實驗的決定；（四）任命實驗室生物安全管理員具體落實實驗室生物安全管理工作；（五）負責(zé)制定和實施實驗室應(yīng)急處置預(yù)案；（六）負責(zé)實驗室安全事故的現(xiàn)場處置和調(diào)查，并將調(diào)查結(jié)果以及處理意見向設(shè)立單位生物安全

12、管理責(zé)任部門或責(zé)任人報告；（七）負責(zé)對涉及感染性物質(zhì)的研究計劃、方案以及操作程序等，實施前的生物安全審查。,生物安全管理員職責(zé),,（一）負責(zé)實驗室生物安全保障以及技術(shù)規(guī)章方面的咨詢工作；（二）就技術(shù)方法、程序和方案、生物因子、材料和設(shè)備進行定期的內(nèi)部安全檢查；（三）糾正違反生物安全操作規(guī)程的行為；（四）在出現(xiàn)潛在感染性物質(zhì)溢出或其他事故時，協(xié)助事故調(diào)查；（五）檢查和監(jiān)督實驗室廢棄物的有效管理與安全處置；（六）檢查和監(jiān)督實驗室

13、各項消毒滅菌措施的落實情況。,生物安全手冊,,（一）實驗室生物安全管理體系（二）生物因子生物危害評估（三）實驗室人員和項目準(zhǔn)入制度（四）人員培訓(xùn)考核制度（五）人員健康監(jiān)護制度（六）生物安全檢查制度（七）實驗室人員生物安全行為規(guī)范（八）實驗室內(nèi)務(wù)管理制度（九）實驗室菌（毒）種和生物樣本安全保管和檔案管理制度（十）實驗室廢棄物管理制度（十一）實驗室消毒隔離制度（十二）實驗室生物危險標(biāo)識使用規(guī)定（十三）事件、傷害、事故

14、和職業(yè)性疾病報告制度（十四）實驗室應(yīng)急處置預(yù)案（十五）實驗活動生物安全標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（十六）其他必要的管理性和技術(shù)性文件,二、生物安全實驗室備案,一、二級病原微生物實驗室向所在區(qū)（縣）衛(wèi)生局衛(wèi)生監(jiān)督所備案。二級實驗室還應(yīng)向所在區(qū)（縣）公安機關(guān)備案。,三、人員管理,實驗室應(yīng)建立工作人員上崗考核制度，所有與實驗活動相關(guān)的人員都應(yīng)經(jīng)過培訓(xùn)并取得上崗資質(zhì)。培訓(xùn)對象應(yīng)包括實驗室管理人員、實驗室技術(shù)人員、樣本運輸人員、廢棄物處置人員、儀器設(shè)

15、備維修人員等。培訓(xùn)內(nèi)容應(yīng)包括實驗室生物安全的基本知識、基本技能、消防和應(yīng)急處置預(yù)案、化學(xué)和放射安全、生物危險和傳染預(yù)防、應(yīng)急救護等課程。,三、人員管理,實驗室相關(guān)人員應(yīng)每年接受生物安全培訓(xùn)。培訓(xùn)組織機構(gòu)應(yīng)采取有效方法對培訓(xùn)的效果進行評估。實驗室設(shè)立單位應(yīng)建立人員培訓(xùn)檔案。實驗室應(yīng)定期對實驗人員開展與其從事實驗活動相關(guān)的健康體檢，建立人員健康檔案。實驗室工作人員應(yīng)在身體狀況良好的情況下進入實驗區(qū)工作，若出現(xiàn)疾病、過勞狀態(tài)或其他意外狀

16、況，則不應(yīng)進入實驗區(qū)或立即退出實驗區(qū)。,四、菌（毒）種和生物樣品管理,樣本采集：樣本采集人員應(yīng)掌握相關(guān)專業(yè)知識和操作技能，并具有與采集病原微生物樣本危害等級相適應(yīng)的生物安全防護裝備和防止擴散污染的措施。樣本采集人員應(yīng)對樣本的來源、采集時間、采集人員等做好記錄。,四、菌（毒）種和生物樣品管理,樣本運送：高致病性（或疑似）的病原微生物菌（毒）種和生物樣本的運送應(yīng)按《可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或生物樣本運輸管理規(guī)定》執(zhí)行。

17、非高致病性的病原微生物菌（毒）種和生物樣本的運送應(yīng)由專人負責(zé)，專車運送，運送人員應(yīng)經(jīng)過培訓(xùn)取得相關(guān)資質(zhì)，不得通過公共交通工具運送，運送過程應(yīng)采取相應(yīng)的防護措施。運輸過程中發(fā)生意外狀況，運送單位、運送人、接受機構(gòu)應(yīng)按國家有關(guān)規(guī)定，采取必要的應(yīng)急措施。,四、菌（毒）種和生物樣品管理,樣本運送：單位內(nèi)部運送病原微生物菌（毒）種和生物樣本的容器或包裝材料應(yīng)滿足生物安全防護的要求，應(yīng)密封，防水、防破損、防外泄。外送病原微生物菌（毒）種和生物

18、樣本的容器或包裝材料應(yīng)滿足國際民航組織《危險品航空安全運輸技術(shù)細則》(Doc9284包裝說明PI650)規(guī)定的B類包裝要求。最外層的容器或包裝材料上應(yīng)按規(guī)定做好生物安全警示標(biāo)識。,四、菌（毒）種和生物樣品管理,樣本保存：病原微生物實驗室菌（毒）種或樣本保藏部位為內(nèi)部治安保衛(wèi)的重點，遵照國務(wù)院第421號令《企業(yè)事業(yè)單位內(nèi)部治安保衛(wèi)條例》。實驗室應(yīng)指定專人負責(zé)菌（毒）種和生物樣本的保藏，雙人雙鎖，并建立所保藏的菌（毒）種和生物樣本名錄

19、清單。保藏的菌（毒）種和生物樣本應(yīng)設(shè)立專冊（卡），詳細記錄名稱、編號、來源、鑒定的日期和結(jié)果、鑒定者、所用的培養(yǎng)基、保藏的方法、傳代次數(shù)等。實驗室應(yīng)建立菌（毒）種和生物樣本的銷毀制度，銷毀保存的菌（毒）種和生物樣本應(yīng)經(jīng)實驗室負責(zé)人批準(zhǔn)，并在專冊（卡）上注銷并注明原因、時間、方法、數(shù)量、經(jīng)辦人等。,五、實驗室環(huán)境、設(shè)備與器材的消毒和廢棄物的處置,實驗室應(yīng)根據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求結(jié)合實驗工作的類型、操作生物因子的特性選擇適宜的消毒方法。應(yīng)編寫

20、包括針對各種設(shè)施、設(shè)備、工作環(huán)境、污染狀態(tài)的消毒程序的操作規(guī)程。應(yīng)根據(jù)《醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》（GB15982-1995）的規(guī)定采用有效手段監(jiān)測消毒效果，并要作好書面記錄。實驗室空調(diào)系統(tǒng)應(yīng)定期維護、清洗消毒，并有書面記錄，空調(diào)系統(tǒng)清洗消毒應(yīng)委托有資質(zhì)的機構(gòu)承擔(dān)。實驗室應(yīng)根據(jù)國家規(guī)定的要求建立實驗器材和廢棄物無害化處置工作程序。實驗器材和廢棄物處置應(yīng)由專人負責(zé)。實驗室污水須經(jīng)無害化處理后排放。,五、實驗室環(huán)境、設(shè)備與器材的消毒和廢棄物的處

21、置,實驗用一次性個人防護用品和實驗器材、棄置的菌（毒）種、生物樣本、培養(yǎng)物和被污染的廢棄物應(yīng)在實驗室同一建筑內(nèi)消毒滅菌，達到生物學(xué)安全后再按感染性廢棄物收集處理。實驗用非一次性個人防護用品和實驗器材，應(yīng)放置在有生物安全標(biāo)記的防漏袋中送至指定地點消毒滅菌后方可清洗。運送過程中應(yīng)防止有害生物因子的擴散。經(jīng)生物無害化處理后的廢棄物包裝必須符合要求，并有中文標(biāo)簽，標(biāo)簽內(nèi)容包括產(chǎn)生部門、日期、類別等。實驗廢棄物最終處置必須交由經(jīng)市環(huán)保部門資質(zhì)

22、認定的醫(yī)療廢物處置單位集中處置。,實驗室物品危險性分類,高度危險性物品：這類物品是穿過皮膚或黏膜而進入無菌的組織或器官內(nèi)部的器材，或與破損的組織、皮膚、黏膜密切接觸的器材和用品，例如，手術(shù)器械和用品、穿刺針中度危險性物品：這類物品可能和破損皮膚或者黏膜相接觸，而不進入無菌的組織內(nèi)，例如，各類生物樣品低度危險性物品：雖有微生物污染，但在一般情況下無害，只有當(dāng)受到一定量的病原微生物污染時才造成危害的物品。這類物品和器材僅直接或間接地和健

23、康無損的皮膚相接觸，包括生活衛(wèi)生用品和病人、醫(yī)護人員生活和工作環(huán)境中的物品。例如，毛巾、面盆、痰盂（杯）、地面、便器、餐具,生物實驗室消毒措施,在出入口與區(qū)域交叉處設(shè)置浸有2000mg /L有效氯消毒液的腳墊，不定時補充噴灑消毒液，保持腳墊濕潤實驗室內(nèi)所有物品應(yīng)專用，并須經(jīng)嚴格消毒后方可帶出。進入實驗室應(yīng)穿戴嚴密的個人防護用品，在實驗中注意自身防護，并防止操作過程中的交叉污染。應(yīng)使用密封的離心杯進行樣品離心，以防濺出。,生物實驗室

24、消毒措施,實驗過程中應(yīng)按規(guī)定將使用后的器材立即丟入消毒液內(nèi)處理。實驗完畢，先消毒物體表面，再按規(guī)定程序脫下個人防護用品丟入相應(yīng)的包裝袋內(nèi)立即進行壓力蒸汽消毒，并開啟紫外線殺菌燈作空氣消毒。離開實驗室前，注意必須消毒雙手。實驗室物體表面與空氣消毒完畢，開窗通風(fēng)。,生物實驗室消毒措施,空氣消毒：每次實驗前后用紫外線燈照射消毒，每次不少于1小時，消毒完畢開窗通風(fēng)。儀器等表面消毒：工作完畢，用含有效氯1000mg/L的消毒液或75%的乙

25、醇擦拭消毒，作用30分鐘以上,生物實驗室消毒措施,個人防護用品消毒：實驗衣、口罩、手套、鞋套等用壓力蒸汽121℃消毒20-30分鐘，或浸泡在含有效氯1000mg/L的消毒液內(nèi)30-60分鐘。護目鏡用75%的乙醇擦拭消毒，或浸泡在含有效氯1000mg/L的消毒液內(nèi)30-60分鐘。手的消毒：含有效碘3000-5000 mg/L的消毒溶液或75%的乙醇溶液涂擦，作用1-3分鐘。,生物實驗室消毒措施,地面和物體表面消毒：工作完畢，用含有效氯2

26、000mg/L的消毒液噴灑（拖地）；工作臺等物體表面用上述消毒液擦拭消毒紙張的處理：采用傳真、電腦打印等方式傳出清潔的紙張，原始單據(jù)在必要時用80ml/m3福爾馬林，在30-40℃條件下密閉熏蒸消毒6小時,生物實驗室消毒措施,使用后的器材應(yīng)分類消毒：將使用后的銳器直接放入防刺破、防滲漏的封閉專用銳器處置盒內(nèi)，壓力蒸汽121℃作用30分鐘；其他部件在含有效氯2000mg/L的消毒液內(nèi)浸泡1小時以上。處理時要避免皮膚損傷。廢棄物的處理：

27、可燃物質(zhì)盡量焚燒，也可噴灑含有效氯2000-10000 mg/L的消毒液，作用60分鐘以上。剩余標(biāo)本最好焚毀或用壓力蒸汽121℃作用30分鐘。,生物實驗室消毒措施,菌毒種的保藏與銷毀：按國家規(guī)定執(zhí)行微生物的銷毀：培養(yǎng)物、鑒定反應(yīng)試條及剩余樣品最好焚毀或用壓力蒸汽121℃作用30分鐘，亦可在含有效氯2000mg/L的消毒液內(nèi)浸泡1小時以上,化學(xué)廢棄物感染性廢棄物（包括利器）放射性廢棄物,廢棄物分類,化學(xué)消毒高壓消毒,生物廢棄物處理

28、,六、應(yīng)急處置,實驗室應(yīng)建立意外事件應(yīng)急處置系統(tǒng)，制訂針對意外暴露和事故等狀況的應(yīng)急預(yù)案。實驗室的應(yīng)急預(yù)案應(yīng)每年培訓(xùn)或演練，所有工作人員應(yīng)熟練掌握應(yīng)急處置操作程序等有關(guān)事項。,六、應(yīng)急預(yù)案,對暴露病原微生物的檢測和生物危害評估。明確高危險區(qū)域和地點。明確可以暴露于危險或受感染的人員及其這些人員的轉(zhuǎn)移通道。列出能夠接受暴露或感染人員進行治療、隔離的單位和運送方案。列出事故處理需要的免疫血清、疫苗、藥品、特殊儀器和其他物資的來源。

29、列出應(yīng)急狀態(tài)下所需的裝備和制劑的名錄及存放地點。明確事故處理的責(zé)任人員及其所承擔(dān)的職責(zé)。其他必須明確規(guī)定的事項。,實驗室生物安全技術(shù)要求,一、生物危害評估,在建設(shè)實驗室或開展實驗活動之前，實驗室設(shè)立單位的生物安全責(zé)任部門或責(zé)任人應(yīng)參照衛(wèi)生部《名錄》組織各相關(guān)方面的專家對擬操作的生物因子的危害程度、實驗活動的危險性、氣溶膠傳播的可能性、預(yù)防治療的獲得性、防護屏障的安全性、應(yīng)急預(yù)案的有效性等因素進行評估，確定相應(yīng)的生物安全防護水平等

30、級。實驗室生物危害評估結(jié)果應(yīng)由設(shè)立單位的法定代表人簽字認可，并歸檔保存。,生物安全實驗室等級,實驗室的生物安全防護水平（Biosafety level）分為4種(BSL 1-4),一級生物安全防護水平 BSL-1,一級生物安全防護水平除需要洗手池外不需要特殊的一級和二級屏障，依靠標(biāo)準(zhǔn)的微生物操作即可獲得基本的防護水平。一級生物安全防護水平實驗室適用于大學(xué)生、再教育培訓(xùn)的和教學(xué)用的實驗室枯草桿菌、格氏阿米巴原蟲和感染性犬肝炎病毒是符

31、合這些標(biāo)準(zhǔn)的微生物的代表,BSL-1,生物安全I級（BSL-1）設(shè)施設(shè)計要求,實驗室有門有水池用于洗手工作面易于清掃工作臺面不會滲水設(shè)備堅固窗戶配備紗窗,易于：清掃、消毒,,二級生物安全防護水平BSL-2,如果產(chǎn)生濺出物和氣溶膠的可能性很小的話，良好的微生物學(xué)技術(shù)能夠保證在開放式的操作臺面上安全地使用這些致病微生物否則應(yīng)該在生物安全柜（BSC）內(nèi)操作。乙型肝炎病毒、沙門氏菌和弓形蟲是屬于這類防護水平的微生物的代表未知感染性

32、樣本，包括人體血液、體液和組織等的檢測一般都可在這種級別實驗室內(nèi)進行對工作人員的主要危害是與感染性材料的偶然的皮膚或粘膜暴露、針刺、吞食、動物叮咬等,BSL-2,必須強調(diào)對污染的針頭或利器的使用要非常謹慎。對易于通過氣溶膠途徑傳播的微生物、具有增加工作人員暴露氣溶膠或高度飛濺物的程序二級生物安全防護水平微生物操作必需在一級生物安全防護水平的基礎(chǔ)之上，增加生物安全柜、高壓滅菌器、安全離心機罩帽、防濺罩或面罩等。,BSL-2,標(biāo)準(zhǔn)的B

33、SL-2實驗室除了滿足BSL-1的要求以外，在門上增加了生物危險標(biāo)志、II級生物安全柜。按國標(biāo)（GB19489-2004）,還要配備高壓蒸汽滅菌器、洗眼器,推廣BSL-2的理由,應(yīng)用最多最普遍容易建容易通過風(fēng)險小，使用方便節(jié)約訓(xùn)練隊伍，可應(yīng)急,生物安全II級（BSL-2）設(shè)施設(shè)計要求:,除BSL-1的要求外還須實驗室要用可以鎖的門需要時安裝生物安全柜和高壓消毒鍋足夠的照明洗眼水易于獲得所有進入實驗室的空氣不可再循環(huán)到

34、非實驗室區(qū)域,三級生物安全防護水平（BSL-3）,適用于涉及可以因通過吸入途徑接觸而導(dǎo)致嚴重的或者潛在的致命疾病的物質(zhì)的工作與氣溶膠傳播病原體的接觸可能、嚴重傳染性的可能的致命因子微生物舉例：炭疽桿菌土拉熱弗朗西斯菌布魯氏菌SARS,生物安全III級（BSL-3）（次級屏障）,四級生物安全防護水平（BSL-4）,適用于涉及可以引起氣溶膠傳播的實驗室感染物的高個體危險和威脅生命的疾病的危險的和外來物質(zhì)的工作與氣溶膠傳播或者通

35、過未知傳播危險接觸病原體的可能、有傳染可能的致命因子微生物舉例：扎伊爾埃博拉病毒裂谷熱,生物安全IV級（BSL-4）（次級屏障）,二、設(shè)施設(shè)備,實驗室所用設(shè)施、設(shè)備和材料均應(yīng)符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)定要求。,實驗室設(shè)計和設(shè)施,根據(jù)工作性質(zhì)的需要設(shè)計實驗室時，應(yīng)特別注意到那些已知能引起健康問題的情況,這些情況包括：氣溶膠的形成操作大容積和/或高濃度的微生物過分擁擠以及儀器過多老鼠和其它蚊蟲的出沒不經(jīng)授權(quán)的進入使用特殊標(biāo)本和試

36、劑時的工作流程,無需特殊選址，可以設(shè)置在共用建筑物內(nèi)。但應(yīng)有防止節(jié)肢動物和嚙齒動物進入的設(shè)計和設(shè)施，有開啟式窗戶的應(yīng)設(shè)置紗窗。布局應(yīng)分實驗區(qū)和非實驗區(qū)，二者之間應(yīng)有效分隔，在實驗區(qū)外應(yīng)有實驗所需用品的儲存、個人物品存放和工作人員休息的空間。實驗室的人流、物流也應(yīng)符合從清潔到污染的要求。墻壁、天花板和地面應(yīng)平整、不滲水、易清潔并耐化學(xué)品和消毒劑的腐蝕。地面應(yīng)防滑。實驗臺和櫥柜應(yīng)牢固穩(wěn)定，實驗臺面能防水、耐腐蝕、耐熱、易消毒。,一級病

37、原微生物實驗室,每個實驗室應(yīng)在靠近出口處設(shè)洗手池，洗手龍頭應(yīng)為自動感應(yīng)式、長手柄式或腳踏式，備有洗手皂液，必要時配備快速消毒洗手液。室內(nèi)儀器和物品的擺放合理，便于操作，并應(yīng)遵循易消毒的原則。室內(nèi)應(yīng)有空氣和物體表面消毒的設(shè)備和設(shè)施。有防塵條件。室內(nèi)使用的利器應(yīng)盛放在固定的容器內(nèi)。室內(nèi)照明應(yīng)保證工作需要，并避免反光和強光。在出口處應(yīng)設(shè)掛衣裝置，專門放置實驗室工作服。門口應(yīng)有一級生物安全防護水平實驗室標(biāo)識。,一級病原微生物實驗室,

38、可設(shè)在共用建筑內(nèi)，但應(yīng)相對獨立，設(shè)可自動關(guān)閉的帶鎖的門。限制無關(guān)人員進入實驗室內(nèi)，以避免實驗室污染或交叉感染。實驗時門應(yīng)呈關(guān)閉狀態(tài)，在實驗結(jié)束后實驗室應(yīng)呈鎖閉狀態(tài)。實驗室的門或墻上應(yīng)有可視窗。在室內(nèi)應(yīng)配備生物安全柜，生物安全柜的型號應(yīng)根據(jù)實驗的項目和對象確定。生物安全柜應(yīng)放在氣流流動少，人員走動少，離出口處較遠的位置，周圍留有一定的空間。當(dāng)對可能產(chǎn)生氣溶膠的感染性材料樣本的操作無法在生物安全柜內(nèi)進行而必須采取外部操作時，應(yīng)加裝負壓

39、罩。,二級病原微生物實驗室,在所在的區(qū)域內(nèi)應(yīng)配備高壓蒸汽滅菌器，并按期檢查和驗證，作好記錄，確保消毒效果和使用安全。高壓蒸汽滅菌器的安全、計量鑒（檢）定和管理應(yīng)符合國家壓力容器管理的有關(guān)規(guī)定，使用人員應(yīng)作好使用記錄。在室內(nèi)應(yīng)設(shè)有洗眼裝置，必要時應(yīng)設(shè)緊急噴淋。實驗室內(nèi)要安裝紫外燈。應(yīng)保障實驗室的通風(fēng)和換氣，可采用自然通風(fēng)，如采用機械通風(fēng)，應(yīng)保證有不少于每小時3-4次的通風(fēng)換氣次數(shù)。應(yīng)有可靠的電力供應(yīng)和應(yīng)急照明。保證緊急情況下基本設(shè)備

40、的用電需要。在門口應(yīng)有二級生物安全防護水平實驗室標(biāo)識。有特殊要求的專用實驗室按其要求執(zhí)行。,二級病原微生物實驗室,三、個人防護,實驗室使用的個人防護用品應(yīng)符合國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和規(guī)定的要求。應(yīng)在生物危害評估的基礎(chǔ)上，按防護級別的要求選擇適當(dāng)?shù)膫€人防護用品。防護用品的選擇、使用和維護應(yīng)有明確的規(guī)定。,實驗室個人防護,一級生物安全實驗室工作場所應(yīng)配備有足夠的清潔專用工作服和乳膠手套，并有專柜存放。污染的工作服和手套應(yīng)放置在有適當(dāng)標(biāo)記的防漏袋

41、中消毒。實驗時應(yīng)穿戴專用工作服和手套，手套應(yīng)戴在工作服外面。穿戴工作服和手套時不得離開實驗室。工作完全結(jié)束離開實驗室之前方可除去手套和工作服。使用過的工作服和手套不得帶離實驗室，一次性手套和工作服不得清洗和再次使用。當(dāng)防護用品破損或污染物潑濺時應(yīng)立即更換。 嚴禁在實驗室內(nèi)飲水、進食和吸煙，實驗室冰箱內(nèi)不得存放食物或其它與實驗無關(guān)的物品。應(yīng)著不露趾防滑防水的工作鞋。,實驗室個人防護,二級生物安全實驗室進入工作場所操作時應(yīng)穿專用防護

42、服，戴防護帽和防護口罩，必要時使用面部保護裝置。在從事有可能出現(xiàn)滲漏的實驗工作時，應(yīng)穿戴防水鞋或防水鞋套。其他可能接觸感染性或潛在感染性材料相關(guān)場所的個人防護應(yīng)根據(jù)實際工作需要參照同等級的病原微生物實驗室要求執(zhí)行。,四、安全操作,實驗室應(yīng)在危害評估的基礎(chǔ)上，對實驗活動過程和所有對安全性有較大影響的特定實驗活動制定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。實驗室應(yīng)建立人員進出登記制度，禁止非工作人員進入實驗室。特殊情況下，非工作人員進入實驗室的須經(jīng)實驗室負責(zé)人

43、批準(zhǔn)，由專人陪同，并做好登記。實驗室應(yīng)建立內(nèi)務(wù)管理制度，個人物品不允許帶入實驗區(qū)。對會產(chǎn)生氣溶膠或高濃度或大容量感染性材料的樣本進行高風(fēng)險實驗操作時（包括離心、混勻、超生霧化和劇烈攪拌等），實驗室應(yīng)使用密封的離心機轉(zhuǎn)子、安全的離心杯或樣本儲存容器，并只允許在生物安全柜或負壓罩中開閉、裝載和操作。實驗室應(yīng)確保檢測報告的生物無害性，宜采用電子通訊方式在清潔區(qū)打印、發(fā)放報告。在污染區(qū)出具的檢測報告，需經(jīng)消毒處理，達到生物安全后方可發(fā)出。

44、,相關(guān)操作規(guī)程內(nèi)容,相關(guān)實驗和檢測項目生物安全操作規(guī)程；移液管和移液輔助器使用規(guī)程；生物安全柜使用規(guī)程；離心機使用規(guī)程；勻漿器、搖床、攪拌器和超聲處理器使用規(guī)程；尖銳利器使用規(guī)程；樣本分離操作規(guī)程；洗手操作規(guī)程；其他有必要制定的操作規(guī)程。,良好的實驗室操作技術(shù)（SOP）,實驗室應(yīng)保持整潔、干凈，與工作無關(guān)的物品禁止放入實驗室。當(dāng)潛在的危險物濺出或一天的工作結(jié)束后，工作臺表面應(yīng)消毒。所有污染的器皿、標(biāo)本和培養(yǎng)基在丟棄或清

45、洗以備重新使用之前應(yīng)先消毒處理。應(yīng)配備足夠的消毒劑及消毒器材。所有檢驗標(biāo)本、培養(yǎng)物和使用過的污染器材必須經(jīng)消毒劑消毒或高壓滅菌后清洗。包裝及運輸時必須遵守適當(dāng)?shù)膰一驀H規(guī)則。能打開的窗子必須安裝防蚊蟲的紗窗。,生物安全實驗室工作區(qū),微生物實驗室感染的途徑,氣溶膠吸入：高速混勻，離心開蓋，離心管破碎，針頭吹吸、排泡，接種環(huán)高熱滅菌吞入：口吸、污染的手進食、吸煙直接接種：污染的針頭、銳器刺入等直接接觸：完整黏膜阻止不了，如流感、

46、SARS昆蟲媒介：蚊、蠅、蟑螂、其他昆蟲,實驗室操作與技術(shù),工作時進出受約束或受限制禁止吃、喝、吸煙禁止用口移液將濺灑和氣溶膠減到最少每天對工作面消毒將廢物消毒保持對昆蟲和嚙齒類動物的控制,特殊措施--- 針與鋒利器具的防范,使用裝鋒利器具的容器不要折、彎 、再加套或者重新使用針筒針頭不要將針頭和鋒利器具放進辦公室廢物容器內(nèi)不要用手接觸碎玻璃要采用塑料器具,附錄,附錄一 術(shù)語附錄二 病原微生物危害等級分類附