ube基礎(chǔ)與血液腫瘤研究

1、基礎(chǔ)與血液腫瘤研究應(yīng)用進(jìn)展,主要內(nèi)容,腫瘤微環(huán)境與CD13白血病與CD13CD13抑制劑—烏苯美司烏苯美司雙重作用機(jī)制的基礎(chǔ)研究烏苯美司在血液腫瘤治療中應(yīng)用,腫瘤微環(huán)境,腫瘤微環(huán)境就是指在腫瘤在生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中，由腫瘤細(xì)胞及細(xì)胞外間質(zhì)相互作用后形成的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的特殊環(huán)境。腫瘤微環(huán)境中的各種成份相互作用，通過(guò)多種途徑刺激腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。,3,腫瘤血管生成是腫瘤微環(huán)境中的重要環(huán)節(jié),,內(nèi)皮細(xì)胞,周細(xì)胞,成纖維細(xì)胞,基底膜

2、細(xì)胞外間質(zhì),免疫細(xì)胞,腫瘤微環(huán)境中的各個(gè)成份通過(guò)多種途徑調(diào)節(jié)腫瘤血管的生長(zhǎng)和形態(tài)腫瘤微脈管系統(tǒng)是決定其內(nèi)部微環(huán)境的主要因素,血管內(nèi)血管生成調(diào)節(jié)因子,4,腫瘤微環(huán)境與腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移,,,,,5,降解基板和細(xì)胞外基質(zhì)是腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟,降解基板和細(xì)胞外基質(zhì)所涉及的蛋白酶,6,,,T細(xì)胞:TIL/CTLNK單核巨噬細(xì)胞,腫瘤轉(zhuǎn)移微環(huán)境,腫瘤微環(huán)境—腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵,內(nèi)皮細(xì)胞降解周?chē)|(zhì)血管生成因子,,血小板、血管內(nèi)皮細(xì)胞血管壁和

3、細(xì)胞外基質(zhì),,金屬蛋白酶 —— 氨肽酶N，CD13,氨肽酶N(APN，CD13)屬于結(jié)合Zn的金屬蛋白酶超家族，廣泛分布于造血細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、腦細(xì)胞和腸、腎、肝細(xì)胞等，參與蛋白水解，參與細(xì)胞和器官的正常蛋白代謝。,在多種腫瘤細(xì)胞表面高水平表達(dá)，如白血病、前列腺癌、結(jié)腸癌、非小細(xì)胞肺癌等，被稱作腫瘤細(xì)胞標(biāo)記物。,子宮內(nèi)膜腺癌、卵巢癌組織中APN/CD13的表達(dá),子宮內(nèi)膜腺癌,粘液性囊腺癌,漿液性囊腺癌,陰性對(duì)照,APN/CD13在腫瘤細(xì)

4、胞表達(dá)較強(qiáng)，間葉組織較弱,Int. J. Cancer.2007,120, 2243–2250,氨肽酶N — CD13作用,一、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移CD13通對(duì)基底膜成分(基膜和Ⅳ型膠原蛋白) 的水解作用, 進(jìn)行組織消化穿透;一種輔助的粘附分子，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞附著，參與細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、炎癥驅(qū)化；促進(jìn)腫瘤新生血管的形成： 在血管形成刺激因素如缺氧、VEGF 作用下, 新生血管內(nèi)皮CD13mRNA 及表達(dá)上調(diào), 而成熟血管內(nèi)皮無(wú)CD1

5、3 表達(dá)。,氨肽酶N — CD13 作用,CD13 連續(xù)降解：多的肽調(diào)節(jié)因子，其中包括免疫活性物質(zhì)，從而降低了機(jī)體免疫；抑制免疫細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞表面抗原的識(shí)別和直接殺傷細(xì)胞的能力。,二、 免疫負(fù)調(diào)節(jié),胰腺癌患者體內(nèi)CD13的表達(dá)量與腫瘤血管密度的關(guān)系,IMD：intratumor microvessel density(腫瘤內(nèi)微血管密度),結(jié)論：CD13的表達(dá)與腫瘤血管生成成正相關(guān),Ikeda N, et al. Clin Cance

6、r Res , 2003 , 9∶1503,CD13表達(dá)陰性(-)胰腺患者生存期明顯延長(zhǎng),Ikeda N, et al. Clin Cancer Res , 2003 , 9∶1503,CD13表達(dá)低的NSCLC患者總生存率顯著延長(zhǎng),,,A：90例NSCLC患者生存期CD13表達(dá)量關(guān)系B：40例Ⅳ期NSCLC患者生存期與CD13表達(dá)量關(guān)系,Haruyasu Murakami，Clin Cancer Res , 2005，1

7、1： 8674,主要內(nèi)容,腫瘤微環(huán)境與CD13白血病與CD13CD13抑制劑——烏苯美司烏苯美司雙重作用機(jī)制的基礎(chǔ)研究烏苯美司在血液腫瘤治療中應(yīng)用,CD13在白血病中表達(dá),CD13最初作為髓細(xì)胞表面標(biāo)志被發(fā)現(xiàn)，表達(dá)于GM-CFU和髓細(xì)胞分化發(fā)育的各階段、成熟的單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)以及急性髓細(xì)胞白血病細(xì)胞（AML）、慢性髓細(xì)胞白血?。–ML）急變危象期細(xì)胞以及少數(shù)淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞，多年來(lái)作為白細(xì)胞抗原

8、被用于白血病免疫分型，提示對(duì)髓細(xì)胞的分化發(fā)育有重要作用。,Putti M C,et al.Blood,1998,92(3):795-801,16,CD13在AML患者中的表達(dá),Nada Kraguljac, Am J Clin Pathol 2000;114:29-34,80%以上的患者 高表達(dá)CD13,17,18,CD13在B-ALL白血病的表達(dá),方法：90例B-cell ALL，免疫表型分析符合早期B淋巴細(xì)胞白血病。分離出具有高度增

9、殖性B細(xì)胞亞群，免疫標(biāo)志與正常人B細(xì)胞相似（表達(dá) CD10、CD19、CD22、CD24、Tdt，共表達(dá)CD13)。用CD13抗體作用細(xì)胞后，觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)。,Cancer Immunol Immunother 2010 Jan.59(1) 125-35,19,結(jié)果與結(jié)論,結(jié)果：阻斷白血病細(xì)胞表面CD13，能抑制其增殖結(jié)論：①CD13促進(jìn)該階段的惡性轉(zhuǎn)化 ②CD13也許是該階段急性B淋巴細(xì)胞白血病新

10、 的分子治療的一個(gè)重要靶點(diǎn),Cancer Immunol Immunother 2010 Jan.59(1) 125-35,CD13通過(guò)降解IL-8，抑制白血病細(xì)胞凋亡,血管內(nèi)皮細(xì)胞,,,互相接觸,釋放,（凋亡因子）,,高表達(dá) CD13 抵抗,誘導(dǎo)白血病細(xì)胞凋亡作用被,IL-8是CD13/APN 的底物，很可能CD13／APN通過(guò)降解IL-8， 抑制血細(xì)胞凋亡，起到促進(jìn)血細(xì)胞增殖發(fā)育的作用。,M ishim a Y .et

11、 al.J Natl Cancer Inst,2002,94:1020—1028,20,主要內(nèi)容,腫瘤微環(huán)境與CD13白血病與CD13CD13抑制劑——烏苯美司烏苯美司雙重作用機(jī)制的基礎(chǔ)研究烏苯美司在血液腫瘤治療中應(yīng)用,CD13抑制劑 — 烏苯美司,1976 年, 日本的梅澤濱夫等人從網(wǎng)狀橄欖鏈霉菌培養(yǎng)液中發(fā)現(xiàn)了一種具有抗菌作用和免疫增強(qiáng)作用的小分子二肽化合物, 為氨基肽酶N 的特異性抑制劑，具有直接和以宿主為中介的抗腫瘤活性作

12、用。 萬(wàn)樂(lè)烏苯美司片（專利創(chuàng)新劑型）于2009年上市。,烏苯美司—CD13抑制劑,提高機(jī)體免疫力,,抑 制CD13,1,2,3,1,2,3,,,不同蛋白酶抑制劑對(duì)ATRA誘導(dǎo)NB4細(xì)胞分化的作用,,(*P<0.05),只有Ube在1ng/ml濃度下可增強(qiáng)ATRA對(duì)NB4細(xì)胞的分化作用,,,,不加10-7M ATRA,加10-7M ATRA,Amastatin A:抑氨肽酶AAntipain:抗蛋白酶素Chymost

13、atin:糜蛋白酶抑制素Leupeptin:亮肽酶素Pepstatin:胃酶抑素,Ubenimex,Ubenimex,主要內(nèi)容,腫瘤微環(huán)境與CD13白血病與CD13CD13抑制劑——烏苯美司烏苯美司雙重作用機(jī)制的基礎(chǔ)研究烏苯美司在血液腫瘤治療中應(yīng)用,烏苯美司體外作用,金屬蛋白酶CD13抑制劑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制腫瘤新血管的形成 提高機(jī)體免疫力,,金屬蛋白酶CD13抑制劑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)

14、胞的生長(zhǎng)抑制腫瘤新血管的形成 提高機(jī)體免疫力,不同細(xì)胞株CD13金屬蛋白酶的活性,Richard A. et al.Blood, 1990,75(2 ): pp 462-469,烏苯美司對(duì)細(xì)胞表面CD13活性的抑制,Ubenimex,Richard A. et al.Blood, 1990,75(2 ): pp 462-469,phosp、D,L、N-carb: CD10抑制,,金屬蛋白酶CD13抑制劑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)

15、胞的生長(zhǎng)抑制腫瘤新血管的形成 提高機(jī)體免疫力,抑制K562細(xì)胞，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,Sawafuji K, et al. Leukemia & Lymphoma 2003;44(11):1987-1996,氨肽酶(APN)/CD13抑制劑烏苯美司增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性,Int. J. Cancer.2007,120, 2243–2250,Mamoru Yamashita et al,不同卵巢癌細(xì)胞株APN/CD13的表達(dá)

16、和紫杉醇IC50值的相關(guān)性,Int. J. Cancer.2007,120, 2243–2250,1 Mean fluorescence intensity in FACS analysis,不同卵巢癌細(xì)胞株APN/CD13的表達(dá)和紫杉醇IC50值的相關(guān)性,APN/CD13在腫瘤細(xì)胞表達(dá)越強(qiáng)，紫杉醇的IC50值越高，腫瘤細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性越低。,Int. J. Cancer.2007,120, 2243–2250,c、 含有PAC (

17、100 ng/ml) 或/和烏苯美司(100 ug/ml) 處理24 hr ，ES-2形態(tài)學(xué)改變d、PAC 或/和烏苯美司對(duì)ES-2細(xì)胞凋亡的影響,PAC,PAC+UBE,control,,凋亡,,凋亡,,烏苯美司能增強(qiáng)紫杉醇誘導(dǎo)凋亡作用,Int. J. Cancer.2007,120, 2243–2250,,,烏苯美司作用引起的凋亡相關(guān)分子改變,Int. J. Cancer.2007,120, 2243–2250,烏苯美司對(duì)裸鼠體

18、內(nèi)腹膜轉(zhuǎn)移OVCA腫瘤生長(zhǎng)的影響,PAC,PAC+UBE,,四組裸鼠的生長(zhǎng)曲線,A:PBSB:PACC:UBED:PAC+UBE,B 和D組生存時(shí)間： 27.1±6.6, 37.7 ± 7.0 d, D組生存時(shí)間明顯長(zhǎng)于B組(p < 0.05),烏苯美司聯(lián)合紫杉醇作用裸鼠體內(nèi)結(jié)果,Int. J. Cancer.2007,120, 2243–2250,,金屬蛋白酶CD13抑制劑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤

19、細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制腫瘤新生血管的形成 提高機(jī)體免疫力,烏苯美司對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)的影響（相差顯微鏡圖）,血管生成是腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵步驟，CD13/APN是重要調(diào)節(jié)因子，Ube作為CD13的功能性抑制劑，與CD13單抗相似，可抑制HUVEC的生長(zhǎng)，與對(duì)照組有顯著差異。,UBE,The angiogenic regulator CD13/APN is a transcriptional target of Ras signaling

20、pathways in endothelial morphogenesisBhagwat SV, et al. Blood.2003 ;101(5) :1818-1826,,金屬蛋白酶CD13抑制劑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制腫瘤新血管的形成 提高機(jī)體免疫力,UBE 100ug、500ug能顯著上調(diào)IL-2 、IFN-γ。,烏苯美司改變抗原刺激免疫淋巴細(xì)胞因子分泌量,Clin Exp Immuno

21、l 1998; 111:30–35,不同濃度的烏苯美司對(duì)NK細(xì)胞活性的影響,BS濃度在0.01-1ug/ml范圍內(nèi)，對(duì)NK細(xì)胞活性的影響不明顯（P﹥0.05）,當(dāng)BS濃度大于10ug/ml時(shí)，能顯著增強(qiáng)小鼠脾NK細(xì)胞活性，并隨濃度提高而增強(qiáng)。,烏苯美司對(duì)小鼠脾臟天然殺傷細(xì)胞活性的增強(qiáng)作用. 中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，1995，26（6）：255-257,※※ P<0.01 ,與相應(yīng)的對(duì)照組比較,主要內(nèi)容,腫瘤微環(huán)境與CD13白血病與CD

22、13CD13抑制劑——烏苯美司烏苯美司雙重作用機(jī)制的基礎(chǔ)研究烏苯美司在血液腫瘤治療中應(yīng)用,Kazuo OTA, et al.,Jpn J Cancer Chemother.1986,13(4):1017-25,烏苯美司治療成人AML臨床研究,45,方 法,患者101例，年齡15-65歲 先后進(jìn)行誘導(dǎo)/鞏固/強(qiáng)化和維持治療，隨后隨機(jī)分組：對(duì)照組：維持治療僅用化療 53例試驗(yàn)組：化療+Ube（30mg/d，早餐前）48例兩組

23、患者基本信息具有可比性。最后評(píng)價(jià)兩組患者的緩解時(shí)間和遠(yuǎn)期生存率。,46,47,結(jié)果：4年生存率比較,4年OS:Ube46%----對(duì)照25.5%,48,15-49歲組4年生存率比較,4年OS:46.3%,4年OS:31.5%,MST:23.4,MST:39.5,Ube46.3%-----31.5%(對(duì)照),49,50-65歲組4年生存率比較,4年OS:44.5%,4年OS:15.8%,MST:14.5,MST:32.6,Ube44.5

24、%----15.8%(對(duì)照),50,兩組復(fù)發(fā)后再次緩解率比較,結(jié)果顯示：烏苯美司組復(fù)發(fā)后再次緩解率53.6%，優(yōu)于對(duì)照組30.8% 。,51,比較兩組復(fù)發(fā)后再次緩解的患者生存率,結(jié)果顯示：烏苯組中位生存時(shí)間為8.4個(gè)月，優(yōu)于對(duì)照組7.1個(gè)月。 烏苯組3年生存率為18.0%，有優(yōu)于對(duì)照組3.3% 的趨勢(shì)。,52,結(jié) 論,烏苯美司聯(lián)合化療治療成人非淋巴細(xì)胞白血病療效確切，尤其是對(duì)于50歲以上患者，4

25、年生存率顯著提高。,王曉桃,等.,白血病·淋巴瘤, 2013,22(10):623-626.,烏苯美司聯(lián)合CAG方案治療 老年及難治性AML的臨床分析,53,方 法,患者56例，年齡32~75歲，中位年齡63歲 隨機(jī)分組：聯(lián)合組（29例）：CAG + Ube（30mg/d，早餐前或分3次口服）單用組（27例） ：CAG兩組患者基本信息無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。評(píng)價(jià)兩組療效、WBC變化、IL-2及免疫細(xì)胞百分比的改變。,54,55

26、,結(jié)果：緩解率,56,結(jié)果： WBC變化,57,結(jié)果：免疫學(xué)指標(biāo)變化,58,結(jié) 論,烏苯美司聯(lián)合CAG方案治療老年及難治性AML患者有較好的療效，烏苯美司能減輕化療后骨髓抑制和促進(jìn)免疫恢復(fù)作用。,A Randomized Trial Comparing Individualized Vs. Non-Individualized Treatment for Elderly Acute Myeloid Leukemia:

27、 JALSG GML200 Study,Atsushi Wakita, MD et. Al.Blood (ASH Annual Meeting Abstracts) 2008 112: Abstract 2961 American Society of Hematology,研究設(shè)計(jì),enocitabine (BH-AC) 200 mg/㎡ on d1–8, 3 h infusion daunor

28、ubicin (DNR) 40 mg/㎡ on d1–3, 30 min infusion,新診斷為AML患者244例，年齡均大于65歲,,接受誘導(dǎo)化療,達(dá)到CR后隨機(jī)分組,UBE,安慰劑,UY組,UN組,鞏固治療：包括含BH-AC 、MIT、DNR、ACR 等方案,,Atsushi Wakita, MD et. Al.Blood (ASH Annual Meeting Abstracts) 2008 112: Abstract 296

29、1 American Society of Hematology,結(jié)果與結(jié)論,結(jié)果：CR率65%，女性>男性（P<0.05) 3年OS組UY和組UN: 43.1%、26.9% (p=0.073). 結(jié)論：對(duì)于老年AML達(dá)到CR者，服用UBE有更多的 生存獲益。,Atsushi Wakita, MD et. Al.Blood (ASH Annual Meeting Abstracts) 200

30、8 112: Abstract 2961 American Society of Hematology,烏苯美司聯(lián)合化療治療慢性髓性白血病,CML的主要目標(biāo)是達(dá)到細(xì)胞遺傳學(xué)的完全緩解。方法： 烏苯美司與馬利蘭聯(lián)合治療23例慢性髓性白血病(CML) 結(jié)果：全部達(dá)到血液學(xué)完全緩解。其中細(xì)胞遺傳學(xué)CR 6例(26%)，PR 1例(4%)，PD 6例(26%)。細(xì)胞遺傳學(xué)轉(zhuǎn)為正常中位持續(xù)220個(gè)月(60～410)。,Y Uzuka

31、 et al.Gan To Kagaku Ryoho, 1993; 20(2): 207-14.,生存結(jié)果,3年生存率為(86.6土9.0) (95%可信限)，對(duì)照64土9.6%P (<0.01)加速期患者生存期也得到延長(zhǎng)。,Y Uzuka et al.Gan To Kagaku Ryoho, 1993; 20(2): 207-14.,Ube,烏苯美司聯(lián)合化療治療CML,研究方法：Ph 染色體及bcr-abl 融合基因均(+)

32、40例CML （初治31 例, 復(fù)治10 例）化療方案：Ara-C 50mg×7 -10 d, HU 1.0 tid，口服至wbc降至10×109/L～ 20×109/L 之間, 停用Ara–C隨機(jī)分成兩組： IFN-α和烏苯美司30 mg,每日1次清晨空腹口服，至6個(gè)月所有病例均取治療6月后的檢測(cè)值,歐陽(yáng)敏.江西省人民醫(yī)院; 白血病·淋巴瘤 2001,10（4）:422-42

33、5,結(jié) 果,烏苯美司組全部達(dá)完全血液學(xué)緩解,6 例獲得細(xì)胞遺傳學(xué)反應(yīng),經(jīng)t 檢驗(yàn),IFN 治療組及烏苯美司治療組均可使 Ph 量下降(p0.05 )。,歐陽(yáng)敏.白血病·淋巴瘤 2001,10（4）:422-425,國(guó)產(chǎn)烏苯美司聯(lián)合化療治療難治性復(fù)發(fā)性惡性淋巴瘤的臨床觀察,夏順中等，浙江實(shí)用醫(yī)學(xué)，2000，5（6）：8-9,方案：CHOP方案聯(lián)合化療 VCP 2mg

34、 iv d1 ADM 40-60mg iv d1、d3 CTX 400-600mg iv d1、d4 Pred 40-60mg d1-d6 6天為1療程，每月化療一次，連續(xù)2-3療程 Ube用法：化療前一天開(kāi)始30mg/d，連續(xù)服藥1-6m,結(jié) 果,68,副作用：烏苯美司膠囊不良反應(yīng)發(fā)生率很低。 14 例患者

35、中有2 例服藥后1～2h 發(fā)生一過(guò)性皮疹 1 例服藥后30～60 分鐘感上腹部不適, 隨著治療的繼續(xù)自行消失,烏苯美司治療血液腫瘤小結(jié),,,,（-）烏苯美司 （+）,氨肽酶N CD13,免疫調(diào)節(jié),通過(guò)抑制CD13，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，啟動(dòng)Caspase-3，凋亡的信號(hào)并級(jí)聯(lián)放大,增強(qiáng)全反式維甲酸誘導(dǎo)分化腫瘤細(xì)胞能力,激活單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)（MPS）增強(qiáng)自然殺傷（NK）傷細(xì)胞活性,增加輔助性T淋巴細(xì)胞（

36、Th1）活性上調(diào)IL-2，IFN-α，等細(xì)胞因子,,抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移、新血管的形成并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,Th1，IL-2,IFN-γ,治療腫瘤小結(jié),,烏苯美司,氨肽酶（CD13）,激活巨噬細(xì)胞和 NK 細(xì)胞 (通過(guò)細(xì)胞因子),,,,+,-,具有靶向抗癌作用的免疫增強(qiáng)劑,,,烏苯美司適應(yīng)癥,放療、化療的輔助治療 老年人免疫功能缺陷 配合放療、化療, 白血病、多發(fā)性骨髓 骨髓增生異常綜合癥 造