兒童惡性腫瘤基礎(chǔ)與臨床研究.pdf

1、第一部分兒童神經(jīng)母細(xì)胞瘤的NK細(xì)胞獲得性免疫治療研究
　　目的:自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)及抗腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜受體(mAbs)可應(yīng)用于一系列腫瘤的免疫治療。本研究旨在探討高危神經(jīng)母細(xì)胞瘤(NBL)患兒外周血體外擴(kuò)增并激活大量具有較強(qiáng)腫瘤細(xì)胞殺傷能力的NK細(xì)胞的方法,和這些NK細(xì)胞在殺傷腫瘤細(xì)胞的過程中釋放的細(xì)胞因子和趨化因子,以及小鼠體內(nèi)NK細(xì)胞殺傷NBL腫瘤細(xì)胞的功能。方法:K562 Clone9.mbIL2和外周血單個(gè)核細(xì)胞(P

2、BMC)進(jìn)行共培養(yǎng)。此過程中NK細(xì)胞因受到特異性刺激而大量增殖。擴(kuò)增前后的NK細(xì)胞通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行免疫表型檢測,使用DIMSCAN的方法對它們的腫瘤細(xì)胞殺傷能力進(jìn)行評估,和Luminex方法進(jìn)行細(xì)胞因子水平量化。并在NOD/SCID小鼠NBL微小殘留病(MRD)全身轉(zhuǎn)移模型中對這些NK細(xì)胞的功能進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究。
　　結(jié)果:經(jīng)與K562 Clone9.mbIL2細(xì)胞共培養(yǎng),高危NBL患兒的PBMC在14天后可特異性地將CD56+

3、CD3 CD14 NK細(xì)胞擴(kuò)增和激活2,363±443倍,其純度達(dá)到83±4％(n=10)。正常成人PBMC捐獻(xiàn)者(n=5)與K562 Clone9.mbIL2細(xì)胞共培養(yǎng),擴(kuò)增所得的NK細(xì)胞所獲結(jié)果與之類似。NK細(xì)胞擴(kuò)增前后的細(xì)胞表面標(biāo)記DNAM-1,NKG2D,Fc Y RⅢ/CD16和CD56的表達(dá)分別增加了6±3,10±2,21±20,和18±3倍。體外實(shí)驗(yàn)表明,該方法擴(kuò)增和激活的Nl(細(xì)胞對無論常規(guī)治療敏感或者抵抗的腫瘤細(xì)胞株均

4、具有高度的殺傷能力。在抗神經(jīng)節(jié)苷酯GD2細(xì)胞膜抗體ch14.18存在的前提下,這種能力得到顯著加強(qiáng),同時(shí)NK細(xì)胞大量釋放TNF,GM-CSF,IFNγ,sCD40L,CCL2/MCP-1,CXCL9/MIG,和CXCL11/Ⅰ-TAC等細(xì)胞因子和趨化因子。在與腫瘤細(xì)胞株反應(yīng)前后,分別增加4,5,6,15,265,917和363倍(濃度范圍:151-9121pg/mL)。NK細(xì)胞經(jīng)過冷凍保存,解凍后立即經(jīng)尾靜脈注射入NOD/SCID小鼠N

5、BL模型后,無治療對照組,僅NK治療組,和NK聯(lián)合ch14.18組的平均生存時(shí)間分別為41±6,54±8,and98±9天(P＜0.04)。
　　結(jié)論:大量較強(qiáng)腫瘤細(xì)胞殺傷能力的NK細(xì)胞可以通過體外擴(kuò)增而獲得。經(jīng)過超低溫冷凍保存后,解凍的NK細(xì)胞在小鼠體內(nèi)仍具有高度的抗NBL活性。本研究為高危NBL患兒使用自體PBMC擴(kuò)增所得NK細(xì)胞進(jìn)行獲得性治療提供了一定的臨床試驗(yàn)依據(jù)。
　　第二部分兒童急性淋巴細(xì)胞白血病全程醫(yī)療費(fèi)用及費(fèi)

6、用有效性分析
　　目的:分析兒童非高危急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)患兒完成全部門診及住院治療所需的醫(yī)療費(fèi)用及其構(gòu)成,探討目前所使用方案的費(fèi)用有效性,為醫(yī)療費(fèi)用控制提供有效信息。促進(jìn)管理部門對白血病患兒醫(yī)療費(fèi)用的有效管理,力求做到合理檢查、合理用藥、合理治療、合理收費(fèi)的各項(xiàng)規(guī)定。在保證質(zhì)量和安全的前提下,努力減輕家庭和政府負(fù)擔(dān),并為單病癥管理提供一定的科學(xué)依據(jù)。
　　方法:采集2005年5月-2006年6月我院新診斷并完成AL

7、L-2005方案全部治療計(jì)劃的45例急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)患兒的全程醫(yī)療費(fèi)用資料。其中男孩24例,女孩21例,男女比例1.14:1。年齡15月-14歲(167月),中位年齡5歲(61月),平均體重19.89公斤。根據(jù)方案的危險(xiǎn)度分組標(biāo)準(zhǔn),低危組(20例)、中危組(25例)。其中B系40例,T系4例,淋巴系雙標(biāo)記1例。同期高危組或由中低危組轉(zhuǎn)入高危組共6例患兒不在本統(tǒng)計(jì)范圍內(nèi)。分析不同組別患兒門診、住院及總體治療成本構(gòu)成。相關(guān)費(fèi)用數(shù)

8、據(jù)信息來自醫(yī)院財(cái)務(wù)部門維護(hù)完整的電腦數(shù)據(jù)庫,根據(jù)患兒姓名/門診號(hào)/住院號(hào)進(jìn)行門診和病房治療費(fèi)用資料采集分析。
　　結(jié)果:ALL治療費(fèi)用的主要構(gòu)成是藥費(fèi)和化驗(yàn)費(fèi),分別占總費(fèi)用的40.5％和21.5％。人均總醫(yī)療費(fèi)用為76958.40±48625.98 RMB9住院與門診費(fèi)用分別占66.4％和33.6％。住院時(shí)間約占總治療時(shí)間的10％。低危組與中危組、B-ALL和T-ALL、有無嚴(yán)重合并癥的人均總治療費(fèi)用之間的差別有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P