臨床細(xì)菌培養(yǎng)相關(guān)知識培訓(xùn)

1、臨床細(xì)菌培養(yǎng)相關(guān)知識培訓(xùn),科 室:主講人：,培 訓(xùn) 內(nèi) 容,一、微生物室開展檢驗項目二、臨床樣本采集三、樣本送檢時間四、鑒定藥敏報告解讀五、血培養(yǎng)再認(rèn)識六、 VITEK 2鑒定藥敏分析儀七、微生物室在醫(yī)院中的作用,一、微生物檢測項目,一般細(xì)菌培養(yǎng)及鑒定真菌培養(yǎng)及鑒定尿培養(yǎng)加菌落計數(shù)血培養(yǎng)(需氧培養(yǎng)及厭氧培養(yǎng))常規(guī)藥敏定量實驗結(jié)核菌涂片真菌涂片一般細(xì)菌涂片新型隱球菌涂片(腦脊液樣本),培養(yǎng)涂片類,一、微生物

2、檢測項目,肥達氏反應(yīng)(沙門氏菌感染引起的傷寒副傷寒)外斐氏反應(yīng)(立克次體感染引起的斑疹傷寒)布魯氏菌凝集試驗(布魯氏菌感染引起的布病)肺炎支原體抗體檢測結(jié)核桿菌抗體檢測梅毒螺旋體抗體檢測,血清學(xué)檢驗類,一、微生物檢測項目,細(xì)菌性陰道病四聯(lián)檢驗泌尿生殖道支原體培養(yǎng)及藥敏淋病奈瑟菌培養(yǎng)衣原體抗原檢測（沙眼衣原體）,性病檢驗類,二、臨床樣本采集,,,臨床樣本種類,呼吸道樣本:痰、鼻口咽拭子、支氣管肺泡灌洗液消化道樣本:便、肛

3、門拭子泌尿道樣本:中段尿、尿道分泌物、陰道分泌物傷口滲出液：膿液、創(chuàng)傷感染滲出液、各類穿刺液無菌類體液:胸腹水、腦脊液、關(guān)節(jié)液、心包積液血 樣 本:靜脈血,二、臨床樣本采集,痰樣本:患者晨起涼白開水漱口，用力咳出第一口深部痰直接留于無菌痰杯內(nèi)，加蓋送檢。咽拭子:無菌拭子用無菌鹽水蘸濕，直取感染部，反復(fù)刮取數(shù)下，插回?zé)o菌管中。送檢時限:樣本采集后立即送檢，時間不超過2小時。送檢指征:咳嗽咳痰，影像學(xué)改變，咽痛咽部紅腫

4、及有膿性分泌物.,呼吸道樣本采集送檢要求,二、臨床樣本采集,中段尿:患者留樣本前一天晚上少飲水，晨起先清洗外陰，無菌棉簽或紗布擦干，排出前段尿，留取中段尿于無菌管中加蓋送檢。原則上采集晨起第一次尿.尿道分泌物:晨起排尿前留取.陰道分泌物:請婦科大夫取。導(dǎo)尿患者尿樣本:上段導(dǎo)尿管消毒后，注射器穿刺抽取10ml尿液置于無菌管中送檢。送檢時限:采集后應(yīng)立即送檢,時間不超過兩小時.送檢指征:尿頻,尿急,尿痛,肉眼膿尿血尿,尿道口膿性分

5、泌物,尿常規(guī)檢查有白細(xì)胞或亞硝酸鹽陽性.留置導(dǎo)尿患者發(fā)熱.,泌尿生殖道樣本采集送檢要求,二、臨床樣本采集,消化道樣本采集送檢要求,糞便樣本:患者自然排便后，挑取有膿血或黏液部分糞便，液狀糞便取絮狀物于無菌容器內(nèi)(痰杯),樣本勿留取過多。 直腸拭子:排便困難的患者和嬰幼兒，清洗肛周，拭子經(jīng)無菌鹽水潤濕后插入肛門，成人4-5cm，兒童2-3cm，輕輕旋轉(zhuǎn)后拔出置無菌管中送檢。送檢時限:采集后立即送檢，時間不超過2小時 。送檢指征:腹瀉

6、、稀便、黏液便、膿血便伴有腹痛或發(fā)熱等癥狀。,二、臨床樣本采集,開放性膿腫:無菌鹽水清洗病灶，用無菌拭子采集靠近組織部分的膿液及病灶深部的分泌物(膿腫底部或膿腫壁取樣)。閉鎖性膿腫:各類與外界不相通的膿腫，皮膚消毒兩次后，注射器抽取膿液后(針頭插入膠塞)，切開引流采集部分膿腫壁置無菌管與注射器一并送檢。(也可將抽取的膿液打入血培養(yǎng)的需氧及厭瓶中)送檢時限:采集后立即送檢，時間不超過2小時。送檢指征:局部紅腫熱痛和功能障礙等化膿性感

7、染典型特征。,膿液樣本采集送檢要求,二、臨床樣本采集,腦脊液:腰椎穿刺無菌采集1-3ml立即保溫送檢.膽 汁:十二指腸引流或膽囊穿刺等方法采集3-5ml立即送檢.胸腹水,心包液,關(guān)節(jié)液:無菌穿刺采集,置無菌注射器或無菌管送檢.也可打入血培養(yǎng)需氧厭氧瓶內(nèi)送檢.送檢時限:樣本采集后立即送檢,腦脊液要求保溫送檢.送檢指征:頭痛惡心嘔吐頸強直等腦膜炎癥狀.重要原則：早期、服用抗菌藥物前采樣，多次送檢。,穿刺液樣本采集送檢要求,三、

8、樣本送檢時間,痰、尿、便等臨床樣本：盡可能于9:00時前送檢。膿液、腦脊液、胸腹水：8:00-16:00時送檢，節(jié)假日8:00-11:30送檢。血培養(yǎng)類：血培養(yǎng)及使用血培養(yǎng)瓶培養(yǎng)的胸腹水膿液樣本可隨時送檢，8:00-16:20送檢至醫(yī)技樓五樓，其他時間及節(jié)假日11:40后送急診化驗室。,四、鑒定藥敏報告解讀,痰及咽拭子等呼吸道樣本----咽部正常喉菌尿培養(yǎng)及菌落計數(shù)-----------無菌生長便及肛門拭子消化道樣本----無致

9、病菌生長膿液及體表創(chuàng)傷口滲出液----無菌生長或無致病菌生長胸腹水腦脊液---------------無菌生長陰道分泌物-----------------無致病生長血培養(yǎng)----------------------需氧及厭氧培養(yǎng)均未生長,細(xì)菌培養(yǎng)鑒定陰性結(jié)果,四、鑒定藥敏報告解讀,痰及咽拭子:革蘭陰性桿菌，金黃色葡萄球菌，乙型溶血鏈球菌均認(rèn)為是致病性細(xì)菌。有真菌生長時，可能為污染菌，需要復(fù)檢.中段尿:需認(rèn)真看菌落計數(shù)提示，腸球

10、菌計數(shù)>10^4cfu/ml認(rèn)為是致病菌；革蘭陰性桿菌計數(shù)>10^5cfu/ml認(rèn)為是致病菌，< 10^5cfu/ml時為可疑結(jié)果，需根據(jù)臨床癥狀進行判斷，必要時重復(fù)送檢。便及肛門拭子:只檢驗沙門菌，志賀菌及四種致病大腸埃希菌。膿液:表皮葡萄球菌可能為污染菌，深部膿腫樣本建議復(fù)檢。重要提示：培養(yǎng)結(jié)果與臨床癥狀不符時需復(fù)檢或聯(lián)系檢驗科。,細(xì)菌培養(yǎng)鑒定陽性結(jié)果,四、鑒定藥敏報告解讀,敏感度提示: 敏

11、感→有效；耐藥→無效；中介→無敏感藥物時才可用，需加大劑量或與其它抗菌藥物合用。耐藥機制: 耐甲氧西林金葡菌(MRSA)→β內(nèi)酰胺類無效 泛耐藥不動桿菌→對臨床現(xiàn)有抗菌藥物無效 超廣譜β內(nèi)酰胺酶(ESBL)→半合成類青霉素,頭孢菌素?zé)o效 多重耐藥菌→對三類以上抗菌藥物耐藥 β內(nèi)酰胺酶(BLAC)→青霉素類無效 誘導(dǎo)克林霉素耐藥(ICD)→紅霉素和克林霉素不可合用 其

12、他:嗜麥芽黃單胞菌只有復(fù)方新諾明,左氧氟沙星,頭孢他定,細(xì)菌藥敏試驗結(jié)果,四、鑒定藥敏報告解讀,藥敏試驗并不針對臨床所有抗菌藥物，基本涵蓋幾大類青霉素類：氨芐西林、哌拉西林青霉素/酶抑制劑類：氨芐/舒巴坦、哌拉/他唑巴坦、阿莫/克拉維酸頭孢菌素：一代(頭孢唑林)、二代(頭孢替坦)、三代(頭孢他啶、頭孢曲松、頭孢噻肟)、四代(頭孢吡肟)頭霉素類：頭孢西丁單酰胺類：氨曲南碳青酶烯類：亞胺培南、厄他培南氨基糖苷類:阿米卡星、慶大

13、霉素、妥布霉素喹諾酮類：左氧氟沙星、環(huán)丙沙星磺胺類：復(fù)方新諾明重要提示：盡可能使用藥敏報告中的抗菌藥物，想用的抗菌藥物不在藥敏報告中，要參照同類的藥敏試驗結(jié)果。,革蘭陰性菌藥敏試驗結(jié)果,四、鑒定藥敏報告解讀,青霉素類：青霉素、氨芐西林、苯唑西林頭孢菌素：三代(頭孢曲松)氨基糖苷類:慶大霉素、妥布霉素喹諾酮類：左氧氟沙星、環(huán)丙沙星、莫西沙星磺胺類：復(fù)方新諾明四環(huán)素類：四環(huán)素、替加環(huán)素大環(huán)內(nèi)酯類：紅霉素林可霉素類：克林霉

14、素多肽類：萬古霉素其他類: 利福平、呋喃妥因,革蘭陽性菌藥敏試驗結(jié)果,五、血培養(yǎng)再認(rèn)識,時間：抗菌藥物使用前，寒戰(zhàn)和發(fā)熱初起時采血。操作：1)確定靜脈穿刺采血部位。 2)75%酒精脫脂（30秒）安爾碘（ 30秒）。 3)75%酒精消毒血培養(yǎng)瓶。 4)20ml注射器換用5ml注射器針頭采血20ml。 5)需氧瓶和厭氧瓶各10ml。務(wù)必保證需氧瓶血

15、量。送檢：樣本采集后立即保溫送檢。血培養(yǎng)瓶保存：未使用的血培養(yǎng)瓶常溫避光保存。送檢指征：發(fā)熱（弛張熱、波浪熱、稽留熱）、低體溫。,血培養(yǎng)采集送檢要求,五、血培養(yǎng)再認(rèn)識,次數(shù)：懷疑菌血癥及敗血癥患者應(yīng)連續(xù)送檢三次，每次均應(yīng)做需氧及厭氧培養(yǎng)。感染性心內(nèi)膜炎：應(yīng)采集5套血培養(yǎng)。血量：成人10ml/每瓶；嬰幼兒1～3ml/瓶(可只采需氧瓶）。采血數(shù)與檢出率關(guān)系,血培養(yǎng)送檢次數(shù),五、血培養(yǎng)再認(rèn)識,陰性報告：經(jīng)5日以上需氧及厭氧培養(yǎng)（現(xiàn)

16、多延至7日）報告需氧培養(yǎng)厭氧培養(yǎng)均無菌生長。陽性報告：提示菌血癥、敗血癥、一過性菌血癥。重要提示：培養(yǎng)出表皮葡萄球菌時，有一定機率為一過性菌血癥，或采血時消毒不徹底的污染菌，此時應(yīng)復(fù)查。題外音：發(fā)熱即為血培養(yǎng)指征，不能以白細(xì)胞多少做為血流感染指征，布病、傷寒及免疫力低下患者白細(xì)胞可不升高。,血培養(yǎng)報告解讀,五、血培養(yǎng)再認(rèn)識,血培養(yǎng)全球分布量,五、血培養(yǎng)再認(rèn)識,每一千人每年用的血培養(yǎng)瓶數(shù)目,六、VITEK2鑒定藥敏分析儀,全自動標(biāo)

17、準(zhǔn)化更快速更準(zhǔn)確專家系統(tǒng)糾正錯誤的發(fā)生,VITEK2鑒定藥敏分析儀,細(xì)菌鑒定藥物系統(tǒng)的更新?lián)Q代,,半自動,全自動,七、微生物室的發(fā)展,,,成 本,微生物室在全院中的作用,七、微生物室的發(fā)展,科室設(shè)備水平,七、微生物室的發(fā)展,人員組成： ***：副主任檢驗師 ***：副主任檢驗師 *** ：主管檢驗師 ***