細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)

1、第二節(jié)細(xì)菌培養(yǎng)細(xì)菌培養(yǎng)檢測(cè)技術(shù)節(jié)概述細(xì)菌的培養(yǎng)技術(shù)是微生物實(shí)驗(yàn)中基本技術(shù)之一。大多數(shù)細(xì)菌均可用人工方法培養(yǎng)，只有將細(xì)菌培養(yǎng)出來(lái)才能對(duì)它進(jìn)行研究和鑒定知識(shí)點(diǎn)導(dǎo)航一.培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基（culturemedium）是細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖所需要的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的人工制品。適宜的培養(yǎng)基能使細(xì)菌在體外迅速生長(zhǎng)繁殖，便于對(duì)細(xì)菌進(jìn)行分離和鑒別?？煞譃榛A(chǔ)培養(yǎng)基、營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、厭氧菌用培養(yǎng)基和特殊培養(yǎng)基。（一）基礎(chǔ)培養(yǎng)基只含有細(xì)菌生長(zhǎng)所需的

2、最基本營(yíng)養(yǎng)成分，應(yīng)用最廣泛，為制備多種培養(yǎng)基的基礎(chǔ)，常見的有肉湯培養(yǎng)基、瓊脂培養(yǎng)基。（二）營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入葡萄糖、血液、血清、腹水或酵母浸膏等有機(jī)物，可供營(yíng)養(yǎng)要求較高的細(xì)菌生長(zhǎng)需要或增菌用。如結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)基中添加雞蛋、馬鈴薯、甘油等。（三）選擇培養(yǎng)基利用不同種類細(xì)菌對(duì)化學(xué)物質(zhì)的敏感性不同而制成，使分離菌大量繁殖而抑制其它細(xì)菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中含有的抑制劑能抑制非目的菌生長(zhǎng)或使其生長(zhǎng)不佳，有利于目的菌的檢出和識(shí)別。選擇

3、培養(yǎng)基多為固體平板，用于從標(biāo)本中分離某些特定的細(xì)菌。（四）鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加有某些特定成分，如糖、醇類和指示劑等，用于檢查細(xì)菌的各種生化反應(yīng)，以資鑒別和鑒定細(xì)菌。（五）厭氧菌用培養(yǎng)基專性厭氧菌須在無(wú)氧條件下才能生長(zhǎng)，故需在培養(yǎng)基中加入半胱氨酸、硫乙醇酸鈉等還原劑，降低培養(yǎng)基中氧化還原電勢(shì)，并應(yīng)與外界空氣隔絕，使培養(yǎng)基本身為無(wú)氧的環(huán)境。（六）特殊培養(yǎng)基為某些需要在特殊條件下才能生長(zhǎng)的細(xì)菌培養(yǎng)細(xì)菌培養(yǎng)之用。如高滲鹽增菌培養(yǎng)基、高滲糖增菌培

4、養(yǎng)基、改良Kagan氏培養(yǎng)基等。二.培養(yǎng)基的制備制備一般培養(yǎng)基的主要過(guò)程基本相似，包括調(diào)配、溶化、調(diào)整pH、過(guò)濾、分裝、滅菌及級(jí)過(guò)濾，從出風(fēng)面吹出的潔凈氣流，以一定的和均勻的斷面風(fēng)速通過(guò)工作區(qū)時(shí)，將塵埃顆粒和微生物顆粒帶走，從而形成無(wú)塵無(wú)菌的工作環(huán)境。使用時(shí)應(yīng)提前50分鐘打開紫外線殺菌燈，30分鐘后關(guān)閉并啟動(dòng)送風(fēng)機(jī)。凈化區(qū)內(nèi)嚴(yán)禁存放不必要的物件，以保持潔凈氣流型不受干擾。（三）無(wú)菌室無(wú)菌室又稱潔凈室（cleanroom），是在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部

5、安裝的用于無(wú)菌操作的小室。室內(nèi)應(yīng)有空氣過(guò)濾裝置、紫外線殺菌燈等。（四）生物安全柜（biologicalsafetycabi，BSC）目前微生物試驗(yàn)中多采用生物安全柜，是為操作原代培養(yǎng)物、菌（毒）株以及診斷性標(biāo)本等具有感染性的實(shí)驗(yàn)材料時(shí)，用來(lái)保護(hù)操作者本人、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境以及實(shí)驗(yàn)材料，使其避免暴露于上述操作過(guò)程中可能產(chǎn)生的感染性氣溶膠和濺出物而設(shè)計(jì)的負(fù)壓過(guò)濾排風(fēng)柜。（五）生物安全實(shí)驗(yàn)室（BiosafetyLabaty），簡(jiǎn)稱“BSL實(shí)驗(yàn)室”，

6、是指通過(guò)規(guī)范的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)設(shè)備的配置、個(gè)人防護(hù)裝備的使用等建造的實(shí)驗(yàn)室。在結(jié)構(gòu)上由一級(jí)防護(hù)屏障（安全設(shè)備）和二級(jí)防護(hù)屏障（設(shè)施）構(gòu)成，實(shí)驗(yàn)室生物安全防護(hù)的安全設(shè)備和設(shè)施的不同組合，構(gòu)成了四級(jí)生物安全防護(hù)水平，一級(jí)為最低。六、接種法根據(jù)待檢標(biāo)本的性質(zhì)，培養(yǎng)目的及所用培養(yǎng)基的種類，采用不同的接種方法。常用的有平板劃線分離培養(yǎng)法、斜面接種法、液體接種法和穿刺接種法。（一）平板劃線分離培養(yǎng)法分離培養(yǎng)法就是通過(guò)劃線使標(biāo)本或培養(yǎng)物中混雜的多種細(xì)菌

7、在培養(yǎng)基表面逐一分散生長(zhǎng)，各自形成菌落，以便根據(jù)菌落形態(tài)及特征，挑選單個(gè)菌落，經(jīng)過(guò)移種而獲得純種細(xì)菌（純培養(yǎng)）。分離細(xì)菌最常用的為平板劃線分離法。1將接種環(huán)火焰滅菌，待冷卻后取標(biāo)本或混合菌液。2用左手持起平板，使平皿蓋向上放于臺(tái)面上或打開平皿蓋。3左手斜持（45℃角）平板，右手持已取材的接種環(huán)，在酒精燈上方5～6cm處作連續(xù)劃線法分離細(xì)菌。劃線時(shí)，接種環(huán)與平板呈30～40角，輕輕接觸平板，以腕力平行滑動(dòng)接種環(huán)。應(yīng)避免將瓊脂劃破。先在平板