中藥化學(xué)實驗

1、天然藥物化學(xué)實驗,一、黃柏中生物堿的提取、分離和鑒別二、槐米中蘆丁、槲皮素的提取、分離與鑒別 三、大黃中蒽醌苷元的提取、分離與鑒別 四、穿心蓮中穿心蓮內(nèi)酯的提取、分離與鑒別五、八角茴香揮發(fā)油的提取及鑒別,實驗一 黃柏中生物堿的提取、分離和鑒定,目的要求,掌握從黃柏中提取小檗堿的原理和方法。掌握柱色譜的基本操作以及在中藥有效成分提取分離中的應(yīng)用。掌握小檗堿的理化性質(zhì)和鑒別方法,黃柏簡介,蕓香科植物黃皮樹Phellod

2、endron chinense Schneid及黃檗Phellodendron amurense Rupr．的干燥樹皮，前者習(xí)稱“川黃柏”，后者習(xí)稱“關(guān)黃柏”。性能：苦，寒。功效：清熱燥濕、瀉火解毒、退虛熱。應(yīng)用：濕熱瀉痢、黃疽、帶下、熱淋、腳氣、骨蒸勞熱、盜汗、遺精、瘡瘍腫毒、濕疹騷癢；鹽黃柏滋陰降火，用于陰虛火旺，盜汗骨蒸。,黃柏中主要化學(xué)成分簡介,小檗堿(berberine)，含量為1.4%-4%(川黃柏含量較高) 性狀：

3、黃色結(jié)晶，有5.5個結(jié)晶水，mp.145℃溶解性：能緩緩溶于冷水中（1∶20）微溶于冷乙醇（1∶100）易溶于熱水和熱乙醇微溶或不溶于苯、氯仿和丙酮硝酸鹽極難溶于水鹽酸鹽微溶于冷水（1:500）但較易溶于沸水硫酸鹽和枸櫞酸鹽在水中溶解度較大（1 ∶30）鹽酸小檗堿為黃色結(jié)晶，含2分子結(jié)晶水，220℃時分解并轉(zhuǎn)變?yōu)樽丶t色小檗紅堿，285℃時完全熔融,,藥根堿 鹽酸鹽為黃色結(jié)晶，mp.206℃，在冷水中溶解

4、度比鹽酸小檗堿大，易溶于熱水和乙醇。巴馬丁 鹽酸鹽為黃色針晶，mp.241℃，在冷水中溶解 度比鹽酸小檗堿大，易溶于熱水和乙醇。,,,生物堿堿性強(qiáng)弱與提取分離的關(guān)系,堿性是生物堿最重要的化學(xué)性質(zhì)，也是提取、分離和結(jié)構(gòu)鑒定的理論依據(jù) 生物堿的堿性大小與pKa的關(guān)系：pKa＜2為極弱堿，pKa2~7為弱堿，pKa7~11為中強(qiáng)堿，pKa11以上為強(qiáng)堿 生物堿分子中堿性基團(tuán)的pKa值大小順序一般是：胍基＞季銨堿＞N-烷雜環(huán)＞脂

5、肪胺＞芳香胺≈N-芳雜環(huán)＞酰胺≈吡咯,一般來說雙鍵和羥基的吸電誘導(dǎo)效應(yīng)使生物堿的堿性減小。但具有氮雜縮醛結(jié)構(gòu)的生物堿常易于質(zhì)子化而顯強(qiáng)堿性。,粘液質(zhì)的基本性質(zhì)及對提取分離的影響,定義：與樹膠結(jié)構(gòu)相似的多糖類物質(zhì) ，多存于植物薄壁組織的粘液細(xì)胞內(nèi)基本性質(zhì)：干燥粘液質(zhì)為白色粉末，有強(qiáng)烈的吸濕性，在水中能迅速膨脹，溶解形成粘稠的膠漿，不溶于有機(jī)溶劑。分子中含有酸性基團(tuán)——游離的羧基。在提取中藥其他成分時，少量粘液質(zhì)的存在使其水提取液粘稠性

6、較大而極難過濾稀醇沉淀或加入石灰水形成鈣鹽沉淀,小檗堿提取分離的基本原理,小檗堿為季銨堿，其游離型在水中溶解度較大，其鹽酸鹽在水中溶解度較小。利用小檗堿的溶解性及黃柏中含黏液質(zhì)的特點，首先用石灰乳沉淀黏液質(zhì)，用堿水提出小檗堿，再加鹽酸使其轉(zhuǎn)化為鹽酸小檗堿沉淀析出。,提取,黃柏粗粉200g 加入0.5 %硫酸溶液1000ml，浸泡24h，

7、 雙層紗布濾過 濾液 藥渣,,,,分離,濾液 加入石灰乳調(diào)pH12左右 靜置，抽濾 沉淀 濾液

8、加濃HCI調(diào)pH2左右，加入總體積10%的食鹽 靜置24h，抽濾 鹽酸小檗堿粗品 母液,,,,,,,,,鑒別,生物堿的一般鑒別反應(yīng) 取少量精制鹽酸小檗堿，用稀硫酸溶解，分成4份，分別滴加以下試劑，觀察有無沉淀析出及顏色變化，記錄所觀察到的現(xiàn)象和反應(yīng)結(jié)果，并根據(jù)現(xiàn)象得出結(jié)論。碘化鉍

9、鉀( Dragendorff )試劑 碘化汞鉀( Mayer )試劑 碘化碘鉀( Wagner )試劑 硅鎢酸( Bertrand )試劑,鑒別,特殊鑒別反應(yīng)取鹽酸小檗堿少量，加稀鹽酸2ml溶解后，加漂白粉（或次氯酸鈉）少許，振搖后觀察顏色變化。取鹽酸小檗堿50-100mg，溶于50ml熱水中，加入10%氫氧化鈉2ml，混合均勻后，于水浴中加熱至50℃，加熱丙酮5ml，放置，觀察有無沉淀析出及顏色變化。,鑒別,薄層色譜鑒別樣

10、品：①自制鹽酸小檗堿甲醇溶液（約1mg/ml）。 ②鹽酸小檗堿對照品甲醇溶液（約1mg/ml）。吸附劑：硅膠G—CMC板，濕法鋪板，105℃活化30min。展開劑：①正丁醇—冰醋酸—水(7∶1∶2，上層) ②甲醇—丙酮—醋酸(4∶5∶1) ③醋酸乙酯—異丙醇—甲醇—濃氨試液 (6∶3∶1.5∶1.5)顯色劑：改良碘

11、化鉍鉀試劑。展開后先觀察熒光（365nm，亮黃色）斑點，再噴顯色劑，顯橙色。,實驗二槐米中蘆丁、槲皮素的提取、分離與鑒別,目的要求,1.了解炮制對蘆丁含量的影響。2.掌握黃酮類化合物的提取原理和方法。3.掌握黃酮類成分的主要理化性質(zhì)及鑒別方法。,槐米簡介,槐米為豆科植物槐Sophora japonica L．的干燥花蕾。主產(chǎn)于河北、山東、河南、陜西、江蘇、廣東、廣西、遼寧等地。以河北、山東、河南產(chǎn)量大。 性能：苦，性微寒。

12、功效：涼血止血、清肝瀉火 應(yīng)用：用于便血、痔血、血痢、崩漏、吐血、衄血、肝熱目赤、頭痛眩暈等。,槐米主要化學(xué)成分簡介,主要含有蘆丁、槲皮素，還含少量皂苷類及多糖、粘液質(zhì)等?；泵缀J丁可高達(dá)20%，槐花開放后降至13%。蘆丁可用于治療毛細(xì)血管脆性引起的出血癥，并用作高血壓輔助治療劑。蘆丁還可以作為制備槲皮素、羥乙基槲皮素、羥乙基蘆丁、二乙胺基乙基蘆丁等的原料。,蘆丁為淺黃色粉末或極細(xì)微淡黃色針狀結(jié)晶，含3分子結(jié)晶水（C27H30O16&

13、#183;3H2O），加熱至185℃以上熔融并開始分解。 蘆丁的溶解度，在冷水中1:10000，沸水中1:200，沸乙醇中1:60，沸甲醇中1:7，可溶于乙醇、吡啶、甲酰胺、甘油、丙酮、冰醋酸、乙酸乙酯中，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚。 蘆丁分子中具有較多酚羥基，顯弱酸性，易溶于堿液中，酸化后又可析出。,提?。?）,槐米粉末 取約6倍

14、量水，煮沸，放入槐米及硼 砂適量微沸20～30分鐘，隨時補(bǔ)充失 去的水份，趁熱抽濾，藥渣加4倍量 水，同法再提1次 合并提取液,,分離,合并提取液 用鹽酸調(diào)pH4～5，攪勻，

15、 靜置，抽濾，水洗至洗液呈中性，60℃干燥。 蘆丁粗品,,提?。?）,槐米粉末 加約6倍量水及硼砂適量，煮沸，在攪 拌下緩緩加入石灰乳至pH8～9。

16、 在保持該pH條件下，微沸20～30分鐘，隨 時補(bǔ)充失去的水份，趁熱抽濾，藥渣加 4倍量水，同法再提2次 合并提取液,,分離,合并提取液

17、 在60～70℃下用濃鹽酸調(diào)pH≈5，攪勻， 靜置，抽濾，水洗至洗液呈中性，60℃干燥。 蘆丁粗品,,苷的水解，苷元和糖的分離 蘆丁1g

18、 置150ml圓底燒瓶中，加2％H2SO480ml，加熱微沸1h 水解 (注意觀察有何現(xiàn)象，為什么?)，放冷后抽濾 濾液 沉淀

19、 (保留作糖的鑒別) 水洗至中性， 用乙醇－水（1：1）30ml混合溶劑重結(jié)晶：

20、 加熱溶解，趁熱抽濾，放置析晶，抽干，干燥 ， 苷元(槲皮素),,,,,,鑒別,糖的紙色譜鑒定 濾去槲皮素后的水解母液，取出20 ml，加碳酸鋇細(xì)粉中和，中和時不斷攪拌，至溶液呈中性，濾去白色硫酸鋇沉淀。濾液濃縮至2.3ml，作紙色譜的供試品溶液，與已知糖液作對照，可得到和

21、葡萄糖、鼠李糖相同Rf值的斑點，有時尚能呈現(xiàn)蕓香糖的斑點。 樣品：苷水解后的糖樣品液。 對照品：①葡萄糖對照品水溶液。②鼠李糖對照品水溶液。 支持劑：新華牌一號濾紙(長度15cm，寬度按需要決定)。 展開劑：正丁醇—醋酸—水(4：1：5，上層)。 顯色劑：苯胺—鄰苯二甲酸試劑。噴霧后于105℃烘10min顯色(顯棕色或棕紅色斑點)。,鑒別,黃酮苷的一般鑒別方法 Molish反應(yīng)：取蘆丁少量于試管，加乙醇0.5ml溶解，加1

22、%α—萘酚溶液數(shù)滴，沿管壁滴加濃硫酸0.5ml，觀察兩液面處有何現(xiàn)象。 Fehling’s反應(yīng)：取蘆丁少許溶于熱水中，加斐林試劑lml，沸水浴上加熱后，觀察有何現(xiàn)象? 如無磚紅色沉淀產(chǎn)生則加入鹽酸，使呈酸性，水浴上加熱30min，觀察有無沉淀，如有，過濾除去，濾液加氫氧化鈉溶液調(diào)至弱堿性，再加斐林試劑檢查。 鹽酸鎂粉反應(yīng)：取蘆丁少許，加稀醇熱溶，加鎂粉少許，滴加濃鹽酸數(shù)滴，觀察顏色氯化鐵反應(yīng)：取蘆丁少許，溶于水或乙醇中，加1%三氯

23、化鐵醇溶液1滴，觀察顏色變化。 三氯化鋁反應(yīng)：取蘆丁醇溶液滴于濾紙上，紫外燈下觀察熒光；然后噴三氯化鋁試液，再在紫外燈下觀察熒光顏色的變化。,鑒別,薄層色譜鑒定 樣品：①自制蘆丁乙醇液（1mg/ml）。②自制槲皮素乙醇液（1mg/ml）。 對照品：①蘆丁對照品乙醇液（1mg/ml）。②槲皮素對照品乙醇液（1mg/ml）。 吸附劑：硅膠G—CMC。 展開劑：①氯仿—甲醇—甲酸(15：5：1)。

24、 ②醋酸乙酯—甲酸—水(8：1：1)。 顯色劑：①噴三氯化鋁試液，待乙醇揮干后，置紫外燈(365nm) 下觀察（黃色熒光） 。 ②噴1%氯化鐵水溶液—1%鐵氰化鉀水溶液,實驗三大黃中蒽醌苷元的提取、分離與鑒別,目的要求,1.掌握羥基葸醌類化合物的提取分離方法及主要檢識反應(yīng)。2.掌握pH梯度萃取法的原理及操作技術(shù)。3.掌握利用

25、溶劑的極性差異分離各類成分的方法。,大黃簡介,蓼科植物掌葉大黃Rheum palmatum ，藥用大黃Rheum officinale ，唐古特大黃Rheum tanguticum的根莖和根。主產(chǎn)于四川、西藏等地。 性能：苦、寒。 功效：通里攻下，清熱解毒，活血化瘀等。,大黃主要化學(xué)成分簡介,大黃素型蒽醌類成分 R1 R2

26、 大黃酚 H CH3 大黃素 OH CH3 大黃素甲醚 OCH3 CH3 蘆薈大黃素 H CH2OH 大黃酸 H COOH,蒽醌類成分酸性強(qiáng)弱與提取分離的關(guān)系,醌類化合物

27、多具有酚羥基，故具有一定的酸性。在堿性水溶液中成鹽溶解，加酸酸化后游離又可析出醌類化合物因分子中羧基的有無及酚羥基的數(shù)目與位置不同，酸性強(qiáng)弱表現(xiàn)出顯著差異以游離蒽醌類衍生物為例，酸性強(qiáng)弱按下列順序排列：含-COOH＞含二個或二個以上β-OH＞含一個β-OH＞含二個或二個以上α-OH＞含一個α-OH根據(jù)醌類酸性強(qiáng)弱的差別，可用pH梯度萃取法進(jìn)行這類化合物的分離工作,水解,大黃粗粉100g

28、 置500ml圓底燒瓶，20%H2SO4150ml，加熱 回流，水解2h，抽濾過。 藥渣 水洗至pH≈7，抽干 藥渣（60℃干燥）,,,提取,干燥藥渣 裝索氏提取器，用石油醚、乙酸乙酯各 200ml，回流提取至色淺

29、 提取液(含總游離蒽醌),,分離,鑒別,顯色反應(yīng) 取上述提取液： ①加氫氧化鈉溶液。 ②加醋酸鎂試液。 觀察顏色變化。,鑒別,薄層色譜鑒別樣品：取上述各步萃取物少許，甲醇溶解。 吸附劑：硅膠CMC-Na板，濕法鋪板，105℃活化30min 展開劑：石油醚—醋酸乙酯(8:2) 顯色劑：365nm下觀察熒光、5%氫氧化鉀甲醇液或氨氣薰,實驗四 穿心蓮中

30、穿心蓮內(nèi)酯的提取、分離與鑒別,目的要求,1.掌握從穿心蓮藥材中提取親脂性成分的原理和方法。2.掌握除去葉類藥材中葉綠素的原理和方法。3.掌握內(nèi)酯類成分的主要理化性質(zhì)及鑒別方法。,穿心蓮簡介,為爵床科植物穿心蓮（Andrographis paniculata（Burm．f．） Nees）的地上部分。性味　性寒，味苦。 功能主治　清熱解毒，涼血，消腫。用于感冒發(fā)熱、咽喉腫痛、口舌生瘡、頓咳勞嗽、泄瀉痢疾、熱淋澀痛、癰腫瘡瘍、毒蛇咬傷

31、。,穿心蓮主要化學(xué)成分簡介,含穿心蓮內(nèi)酯（andrographolide）新穿心蓮內(nèi)酯（neoandrographolide）14-去氧穿心蓮內(nèi)酯穿心蓮內(nèi)酯甙（andrographoside）14-去氧穿心蓮內(nèi)酯甙（14-deoxyaandrographoside）以及黃酮類化合物等。,,提取,穿心蓮粗粉100g 95%乙醇600ml浸泡過夜，濾過。

32、 濾液 減壓回收乙醇至200ml 加入活性炭10g，80℃保溫20min，抽濾 濾液,,,分離,濾液 減壓回收乙醇至干，加入10～15ml乙醇洗滌殘渣， 趁熱濾過。 濾

33、液 10℃下靜置過夜，析晶，濾過 穿心蓮內(nèi)酯粗品,,,鑒別,取穿心蓮內(nèi)酯樣品少許，乙醇溶解，加二硝基苯甲酸試液與乙醇制氫氧化鉀試液等容的混合液1～2滴，即顯紫紅色。取穿心蓮內(nèi)酯樣品少許，乙醇溶解，加堿性三硝基苯酚試液1滴，逐漸顯棕色。取穿心蓮內(nèi)酯樣品少許，乙醇溶解，加乙醇制氫氧化鉀試液數(shù)滴，逐漸顯紅色。,鑒別,樣品液：取穿心蓮內(nèi)酯樣品少許，無水乙醇溶

34、解（1mg/ml）。對照品液：取穿心蓮內(nèi)酯對照品，無水乙醇溶解（1mg/ml）。薄層板：①硅膠G-CMCNa，或②硅膠GF254-CMC-Na板展開劑：氯仿-乙酸乙酯-甲醇（4:3:0.4）顯色：①噴3、5-二硝基苯甲酸乙醇溶液與氫氧化鉀乙醇溶液， 日光下觀察，顯紅色。 ②365nm熒光下觀察。,實驗五八角茴香揮發(fā)油的提取及鑒別,目的要求,1.掌握用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油的原理及操作。2

35、.掌握揮發(fā)油中化學(xué)成分的鑒別方法。,八角簡介,為木蘭植物八角茴香Illicium verum Hook．f．的果實。 性味　性溫，味辛。 功能主治　溫陽散寒，理氣止痛。用于胃寒嘔吐、腰痛。,八角茴香油中主要化學(xué)成分簡介,含反式茴腦80%以上。主要含茴香醚（80%～90%），δ-蒎烯、L-水芹烯、а-萜品醇、黃樟醚、甲基胡椒酚、茴香醛、茴香酸、茴香酮、3，3-二甲烯丙基對丙烯苯醚等化學(xué)成分。,,揮發(fā)油性質(zhì),揮發(fā)油(volatile o

36、il)也稱精油(essential oil)，是存在于植物體內(nèi)的一類具有揮發(fā)性、可隨水蒸氣蒸餾、與水不相混溶的油狀液體。揮發(fā)油大多具有芳香嗅味，并具有多方面較強(qiáng)的生物活性，為中藥所含有的一類重要化學(xué)成分。八角茴香油具有促進(jìn)腸胃蠕動，緩解腹部疼痛，促進(jìn)呼吸道分泌細(xì)胞分泌，抑菌等作用。用于健胃及調(diào)味。主要用作食品香料。也可用于分離反式茴腦，作為制備其他香料的原料。有較強(qiáng)的抗革蘭陽性細(xì)菌和革蘭陰性細(xì)菌的作用，對真菌也有一定抑制作用。,揮發(fā)油

37、性質(zhì),組成揮發(fā)油的成分可分為如下四類 ：萜類化合物 、芳香族化合物 、脂肪族化合物 、其它類化合物 。常溫下?lián)]發(fā)油大多為無色或淡黃色的透明液體，多具濃烈的特異性嗅味（其嗅味常是其品質(zhì)優(yōu)劣的重要標(biāo)志），有辛辣灼燒感。 揮發(fā)油常溫下可自然揮發(fā)，揮發(fā)而不留油跡。揮發(fā)油與空氣及光線經(jīng)常接觸會逐漸氧化變質(zhì),提取的基本原理,根據(jù)揮發(fā)油能隨水蒸氣蒸餾出來而不分解的性質(zhì)，可用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，并利用此性質(zhì)來定量測定揮發(fā)油的含量。八角茴香揮發(fā)

38、油比水輕，可用測定相對密度在1.0以下的揮發(fā)油測定儀。,提取,八角茴香100g 置蒸餾瓶中，加水400ml， 水蒸氣蒸餾5-6h 蒸餾液 加食鹽飽和，置分液漏斗

39、，靜置， 分取上層揮發(fā)油 揮發(fā)油,,,鑒別,芳香性：嗅揮發(fā)油的氣味。揮發(fā)性：將揮發(fā)油滴于濾紙屑上，放置后無油斑殘留。與脂肪油對照。測定折光率。不飽和性：將揮發(fā)油滴入0.5ml溴的四氯化碳溶液中，溴褪色。,鑒別,薄層色譜鑒定樣品：八角茴香揮發(fā)油乙醇液。對照品：茴香醚對照品乙醇液。吸