梅毒的實驗室檢查概要_第1頁
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文檔簡介

1、2014-10-8,梅毒的實驗室檢查,梅毒(TP)生物學(xué)特性,1、小而纖細(xì)的螺旋狀微生物,長5~20um,粗細(xì)﹤0.2um2、有6~12個規(guī)則的螺旋基本結(jié)構(gòu)為一原生質(zhì)的圓柱體,為兩層膜所圍繞。3、螺旋整齊、數(shù)目固定、折光性強,較其他螺旋體亮,運動緩慢而有規(guī)律,有三種運動方式:圍繞其長軸旋轉(zhuǎn)運動;伸縮其螺旋間距離移動;彎曲扭動如蛇行。4、人是梅毒螺旋體的唯一自然宿主,梅毒螺旋體不能在體外培養(yǎng)繁殖,最適生存溫度是37℃,離開人體很快死

2、亡,煮沸、干燥、肥皂水以及一般的消毒劑如雙氧水、酒精等很容易將其殺滅。,3,微生物形態(tài) 規(guī)則螺旋體 一端/兩端鉤狀,菌體成8、S或C形 在暗視野顯微鏡下運動活潑 G-, Fontana鍍銀染色,染成棕褐色,4,形態(tài)與 染色,暗視野顯微鏡下觀察,5,梅毒螺旋體,梅毒螺旋體,F(xiàn)ontana鍍銀染色,傳播途徑,梅毒患者的皮膚、粘膜中含梅毒螺旋體,未患病者在與梅毒患者的性接觸中, 皮膚或粘膜若有細(xì)

3、微破損則可得病。 獲得性梅毒 (后天)早期梅毒病人是傳染源,95%是通過不潔性交傳染,少數(shù)通過接吻, 握手、輸血、接觸污染的內(nèi)衣濕毛巾、茶杯、煙斗、哺乳、尿布等傳染。 胎兒梅毒(先天 ):孕婦體內(nèi)螺旋體,一般在妊娠3—4月通過胎盤感染嬰兒。,免疫性,特異性抗體感染2周后產(chǎn)生特異性IgM抗體, 不能通過胎盤感染4周后出現(xiàn)特異性IgG及IgA抗體,可通過胎盤,非特異性抗體刺激機體產(chǎn)生抗心磷脂抗體/反應(yīng)素RPR 和 TRUST等

4、方法可檢出:5~7周或硬下疳后2~3周完全治愈的早期梅毒可再感染,梅毒的實驗室檢測方法,顯微鏡檢測法: (1) 暗視野顯微鏡檢查 (2) 鍍銀染色檢查梅毒血清學(xué)檢測法: (1)非梅毒螺旋體抗原血清試驗 (2)梅毒螺旋體抗原血清試驗,暗視野顯微鏡檢查,標(biāo)本類型:梅毒硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮膚或粘膜的滲出液、淋巴結(jié)穿刺液觀察:在暗視野顯微鏡下,先用低倍鏡,再轉(zhuǎn)至高倍鏡,梅毒螺旋體在暗背景上呈白色發(fā)光

5、,螺旋整齊,運動規(guī)律。結(jié)果解釋:陰性結(jié)果不能排除梅毒 可能是:①螺旋體數(shù)量不足 ②已用過抗生素或某些外用藥 ③損害接近自然消除,暗視野顯微鏡下的梅毒螺旋體,螺旋體檢查是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最好方 法,WHO指定其為性病實驗室必備項目之一,鍍銀染色檢查,基本原理:梅毒螺旋體具有親銀性,可被銀溶液染色,從而可以在鏡下觀察到梅毒螺旋體結(jié)果:棕褐色的梅

6、毒螺旋體,梅毒血清學(xué)試驗 非梅毒螺旋體抗原試驗:VDRL、RPR、TRUST 梅毒螺旋體抗原試驗:ELISA、TPPA、FTA-ABS,,非梅毒螺旋體抗原試驗,1、人感染TP后組織受到破壞,裂解出的一種類脂成分與梅毒螺旋體的蛋白質(zhì)結(jié)合后成為抗原刺激機體產(chǎn)生抗類脂質(zhì)抗體,即反應(yīng)素。2、其他疾病也可產(chǎn)生此種抗體,可出現(xiàn)假陽性。3、敏感性低,盡60﹪左右,有漏檢現(xiàn)象。4、感染初期(4周內(nèi)),可呈陰性。6~8周后達(dá)10

7、0 ﹪.但治愈后3 ~ 6個月可消失。5、反應(yīng)素的量可反映組織的損傷程度,半定量檢測可提示與梅毒的活動有關(guān)。,非梅毒螺旋體抗原試驗,用心磷脂作抗原,測定血清中抗心磷脂抗體,亦稱反應(yīng)素。敏感性高而特異性較低,且易發(fā)生生物學(xué)假陽性。早期梅毒患者經(jīng)充分治療后,反應(yīng)素可以消失,早期未經(jīng)治療者到晚期,部分病人中反應(yīng)素也可減少或消失。目前一般作為篩選和定量試驗,觀察療效,復(fù)發(fā)及再感染。,非梅毒螺旋體抗原試驗,1、性病研究實驗室試驗(VDRL

8、):用心磷脂及膽固醇為抗原。缺點:抗原每天配制:血清標(biāo)本加熱滅活;結(jié)果在顯微鏡下觀察。2、不加熱血清反應(yīng)素玻片試驗(USR):也是VDRL抗原的改良,敏感性及特異性與VDRL相似,扔需顯微鏡下觀察。3、快速血漿反應(yīng)素試驗(RPR):是VDLR抗原的改良,敏感性及特異性與VDRL相似,加入特制碳粉,可肉眼讀出結(jié)果。4、甲苯胺紅不加熱血清試驗(TRUST):加特制的甲苯胺紅,穩(wěn)定、顆粒均勻,生產(chǎn)批間差小,結(jié)果易觀察。,梅毒螺旋體抗原血

9、清試驗,用活的或死的梅毒螺旋體或其成分來作抗原,測定抗螺旋體抗體。敏感性和特異性均高,一般用作確證試驗。檢測血清中抗梅毒螺旋體IgG抗體,即使患者經(jīng)過足夠治療,仍能長期存在,甚至終身不消失,此抗體無保護(hù)免疫力,血清反應(yīng)仍持續(xù)存在陽性,不能用于觀察療效。,梅毒螺旋體抗原血清試驗,熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗(FTA-ABS TEST)梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗(TPPA)梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫試驗(TP-ELISA),FTA-ABS,間

10、接熒光抗體技術(shù)較敏感和較特異的試驗,公認(rèn)為金標(biāo)準(zhǔn)梅毒螺旋體Nichols株作抗原,Reiter株進(jìn)行吸收FITC熒光素標(biāo)記的抗人抗體步驟多,對照多,結(jié)果判定需要經(jīng)驗,TPPA,特異性和敏感性均高,檢測的是IgM抗體,但操作繁瑣,費用高。TPPA取代TPHA明膠顆粒取代紅細(xì)胞用于抗原的致敏,不需要吸收過程。非特異性凝集少對反應(yīng)板、槍頭要求高,TP-ELISA,抗原采用超聲破碎的螺旋體抗原或重組抗原檢測的是IgM或IgG抗

11、體敏感性和特異性與其他試劑基本一致應(yīng)作進(jìn)一步評價,梅毒血清試驗假陽性反應(yīng)因素:技術(shù)性反應(yīng):標(biāo)本的污染溶血操作失誤生物學(xué)假陽性反應(yīng):感染性疾病:麻風(fēng)、麻疹、瘧疾、傳染性肝炎、病毒性肺炎、傳染性單核細(xì)胞增多癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、非典型肺炎等,疾病發(fā)展過程中釋放心磷脂到血液中,產(chǎn)生反應(yīng)素。生理機能發(fā)生變化:妊娠可出現(xiàn)陽性,但這類患者血清反應(yīng)滴度低,很少超過1:8。半年內(nèi)漸轉(zhuǎn)成陰性。,梅毒血清試驗假陰性反應(yīng)因素:

12、,在梅毒螺旋體感染后1~2周內(nèi)可呈陰性反應(yīng)梅毒螺旋體感染不久即開始治療晚期梅毒患者的血清中反應(yīng)素含量低,敏感性低的梅毒血清試驗易出現(xiàn)陰性反應(yīng)在二期梅毒時RPR試驗也可出現(xiàn)陰性反應(yīng),即前帶現(xiàn)象,三種方法聯(lián)合檢測,TRUST ELISA TPPA,,,,,,減少假陽性,假陰性,血清學(xué)檢測的幾個特點:,在最初的兩周可能是陰性結(jié)果FTA、TPPA和ELISA在所有階段都最敏感VDRL、RPR/TRUS

13、T在三期梅毒期可能為陰性VDRL-CSF僅用于診斷神經(jīng)性梅毒,梅毒檢測流程圖,,,,,A1(ELISA),,A1+,,,A1-,,,A2(PRP或TRUST),,,A1+A2+感染:既往或現(xiàn)在,,,,A1+A2-,,,A3(TPPA),A1+A2-A3+可能是梅毒感染需結(jié)合臨床表現(xiàn),,,A1+A2-A3-基本排除梅毒潛伏期,,,,,,,,,,,,,,,,美國2009年指南,梅毒血清學(xué)檢測策略,WHO推薦同時采用非梅毒螺旋體和

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