梅毒的實驗室檢查概要

1、2014-10-8,梅毒的實驗室檢查,梅毒（TP）生物學(xué)特性,1、小而纖細(xì)的螺旋狀微生物，長5～20um,粗細(xì)﹤0.2um2、有6～12個規(guī)則的螺旋基本結(jié)構(gòu)為一原生質(zhì)的圓柱體，為兩層膜所圍繞。3、螺旋整齊、數(shù)目固定、折光性強，較其他螺旋體亮，運動緩慢而有規(guī)律，有三種運動方式：圍繞其長軸旋轉(zhuǎn)運動；伸縮其螺旋間距離移動；彎曲扭動如蛇行。4、人是梅毒螺旋體的唯一自然宿主，梅毒螺旋體不能在體外培養(yǎng)繁殖，最適生存溫度是37℃，離開人體很快死

2、亡，煮沸、干燥、肥皂水以及一般的消毒劑如雙氧水、酒精等很容易將其殺滅。,3,微生物形態(tài) 規(guī)則螺旋體 一端/兩端鉤狀，菌體成8、S或C形 在暗視野顯微鏡下運動活潑 G-, Fontana鍍銀染色,染成棕褐色,4,形態(tài)與 染色,暗視野顯微鏡下觀察,5,梅毒螺旋體,梅毒螺旋體，F(xiàn)ontana鍍銀染色,傳播途徑,梅毒患者的皮膚、粘膜中含梅毒螺旋體，未患病者在與梅毒患者的性接觸中， 皮膚或粘膜若有細(xì)

3、微破損則可得病。 獲得性梅毒 （后天）早期梅毒病人是傳染源，95%是通過不潔性交傳染，少數(shù)通過接吻， 握手、輸血、接觸污染的內(nèi)衣濕毛巾、茶杯、煙斗、哺乳、尿布等傳染。 胎兒梅毒（先天 ）：孕婦體內(nèi)螺旋體，一般在妊娠3—4月通過胎盤感染嬰兒。,免疫性,特異性抗體感染2周后產(chǎn)生特異性IgM抗體, 不能通過胎盤感染4周后出現(xiàn)特異性IgG及IgA抗體,可通過胎盤，非特異性抗體刺激機體產(chǎn)生抗心磷脂抗體/反應(yīng)素RPR 和 TRUST等

4、方法可檢出：5～7周或硬下疳后2～3周完全治愈的早期梅毒可再感染,梅毒的實驗室檢測方法,顯微鏡檢測法： （1） 暗視野顯微鏡檢查 （2） 鍍銀染色檢查梅毒血清學(xué)檢測法： （1）非梅毒螺旋體抗原血清試驗 （2）梅毒螺旋體抗原血清試驗,暗視野顯微鏡檢查,標(biāo)本類型：梅毒硬下疳、扁平濕疣、黏膜斑等皮膚或粘膜的滲出液、淋巴結(jié)穿刺液觀察：在暗視野顯微鏡下，先用低倍鏡，再轉(zhuǎn)至高倍鏡，梅毒螺旋體在暗背景上呈白色發(fā)光

5、，螺旋整齊，運動規(guī)律。結(jié)果解釋：陰性結(jié)果不能排除梅毒 可能是：①螺旋體數(shù)量不足 ②已用過抗生素或某些外用藥 ③損害接近自然消除,暗視野顯微鏡下的梅毒螺旋體,螺旋體檢查是診斷早期現(xiàn)癥梅毒的最好方 法，WHO指定其為性病實驗室必備項目之一,鍍銀染色檢查,基本原理：梅毒螺旋體具有親銀性，可被銀溶液染色，從而可以在鏡下觀察到梅毒螺旋體結(jié)果：棕褐色的梅

6、毒螺旋體,梅毒血清學(xué)試驗 非梅毒螺旋體抗原試驗：VDRL、RPR、TRUST 梅毒螺旋體抗原試驗：ELISA、TPPA、FTA-ABS,,非梅毒螺旋體抗原試驗,1、人感染TP后組織受到破壞,裂解出的一種類脂成分與梅毒螺旋體的蛋白質(zhì)結(jié)合后成為抗原刺激機體產(chǎn)生抗類脂質(zhì)抗體,即反應(yīng)素。2、其他疾病也可產(chǎn)生此種抗體，可出現(xiàn)假陽性。3、敏感性低，盡60﹪左右，有漏檢現(xiàn)象。4、感染初期（4周內(nèi)），可呈陰性。6～8周后達(dá)10

7、0 ﹪.但治愈后3 ～ 6個月可消失。5、反應(yīng)素的量可反映組織的損傷程度，半定量檢測可提示與梅毒的活動有關(guān)。,非梅毒螺旋體抗原試驗,用心磷脂作抗原，測定血清中抗心磷脂抗體，亦稱反應(yīng)素。敏感性高而特異性較低，且易發(fā)生生物學(xué)假陽性。早期梅毒患者經(jīng)充分治療后，反應(yīng)素可以消失，早期未經(jīng)治療者到晚期，部分病人中反應(yīng)素也可減少或消失。目前一般作為篩選和定量試驗，觀察療效，復(fù)發(fā)及再感染。,非梅毒螺旋體抗原試驗,1、性病研究實驗室試驗（VDRL

8、）：用心磷脂及膽固醇為抗原。缺點：抗原每天配制：血清標(biāo)本加熱滅活；結(jié)果在顯微鏡下觀察。2、不加熱血清反應(yīng)素玻片試驗（USR):也是VDRL抗原的改良，敏感性及特異性與VDRL相似，扔需顯微鏡下觀察。3、快速血漿反應(yīng)素試驗（RPR):是VDLR抗原的改良，敏感性及特異性與VDRL相似，加入特制碳粉，可肉眼讀出結(jié)果。4、甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST):加特制的甲苯胺紅，穩(wěn)定、顆粒均勻，生產(chǎn)批間差小，結(jié)果易觀察。,梅毒螺旋體抗原血

9、清試驗,用活的或死的梅毒螺旋體或其成分來作抗原，測定抗螺旋體抗體。敏感性和特異性均高，一般用作確證試驗。檢測血清中抗梅毒螺旋體IgG抗體，即使患者經(jīng)過足夠治療，仍能長期存在，甚至終身不消失，此抗體無保護(hù)免疫力，血清反應(yīng)仍持續(xù)存在陽性，不能用于觀察療效。,梅毒螺旋體抗原血清試驗,熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS TEST)梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA）梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫試驗（TP-ELISA),FTA-ABS,間

10、接熒光抗體技術(shù)較敏感和較特異的試驗，公認(rèn)為金標(biāo)準(zhǔn)梅毒螺旋體Nichols株作抗原，Reiter株進(jìn)行吸收FITC熒光素標(biāo)記的抗人抗體步驟多，對照多，結(jié)果判定需要經(jīng)驗,TPPA,特異性和敏感性均高，檢測的是IgM抗體，但操作繁瑣，費用高。TPPA取代TPHA明膠顆粒取代紅細(xì)胞用于抗原的致敏，不需要吸收過程。非特異性凝集少對反應(yīng)板、槍頭要求高,TP-ELISA,抗原采用超聲破碎的螺旋體抗原或重組抗原檢測的是IgM或IgG抗

11、體敏感性和特異性與其他試劑基本一致應(yīng)作進(jìn)一步評價,梅毒血清試驗假陽性反應(yīng)因素：技術(shù)性反應(yīng)：標(biāo)本的污染溶血操作失誤生物學(xué)假陽性反應(yīng)：感染性疾病：麻風(fēng)、麻疹、瘧疾、傳染性肝炎、病毒性肺炎、傳染性單核細(xì)胞增多癥、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、非典型肺炎等，疾病發(fā)展過程中釋放心磷脂到血液中，產(chǎn)生反應(yīng)素。生理機能發(fā)生變化：妊娠可出現(xiàn)陽性，但這類患者血清反應(yīng)滴度低，很少超過1：8。半年內(nèi)漸轉(zhuǎn)成陰性。,梅毒血清試驗假陰性反應(yīng)因素：

12、,在梅毒螺旋體感染后1～2周內(nèi)可呈陰性反應(yīng)梅毒螺旋體感染不久即開始治療晚期梅毒患者的血清中反應(yīng)素含量低，敏感性低的梅毒血清試驗易出現(xiàn)陰性反應(yīng)在二期梅毒時RPR試驗也可出現(xiàn)陰性反應(yīng)，即前帶現(xiàn)象,三種方法聯(lián)合檢測,TRUST ELISA TPPA,,,,,,減少假陽性，假陰性,血清學(xué)檢測的幾個特點：,在最初的兩周可能是陰性結(jié)果FTA、TPPA和ELISA在所有階段都最敏感VDRL、RPR/TRUS

13、T在三期梅毒期可能為陰性VDRL-CSF僅用于診斷神經(jīng)性梅毒,梅毒檢測流程圖,,,,,A1(ELISA),,A1+,,,A1-,,,A2(PRP或TRUST）,,,A1+A2+感染：既往或現(xiàn)在,,,,A1+A2-,,,A3（TPPA）,A1+A2-A3+可能是梅毒感染需結(jié)合臨床表現(xiàn),,,A1+A2-A3-基本排除梅毒潛伏期,,,,,,,,,,,,,,,,美國2009年指南,梅毒血清學(xué)檢測策略,WHO推薦同時采用非梅毒螺旋體和