產(chǎn)前實(shí)驗(yàn)室技術(shù)概要

1、產(chǎn)前實(shí)驗(yàn)室技術(shù),張紅國(guó),吉林大學(xué)第一醫(yī)院產(chǎn)前診斷中心電話：15804300880E-mail: zhanghguo@126.com,,,一、產(chǎn)前實(shí)驗(yàn)室相關(guān)技術(shù),,,二、唐氏篩查申請(qǐng)單填寫注意事項(xiàng),,,三、我們實(shí)驗(yàn)室開展的項(xiàng)目,,產(chǎn)前實(shí)驗(yàn)室相關(guān)技術(shù),衛(wèi)生部《產(chǎn)前診斷技術(shù)管理辦法》要求：,產(chǎn)前診斷實(shí)驗(yàn)室能夠開展： ①生化免疫；②細(xì)胞遺傳；③分子遺傳,具體包括： 唐氏篩查

2、 染色體核型分析 羊水細(xì)胞培養(yǎng)染色體分析 臍帶血染色體核型分析 絨毛染色體核型分析 分子遺傳學(xué)基因診斷 熒光原位雜交 無(wú)創(chuàng)染色體非整倍體產(chǎn)前檢測(cè),1、唐氏篩查,可篩查：①唐氏綜合征（21-三體綜合征）②18-三體綜合征③開放性神經(jīng)管缺陷,（1）實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的母體血清標(biāo)記物方案， 選擇下列任

3、一種： a) 二聯(lián)法：血清甲胎蛋白（AFP）+血清人絨毛膜促性腺激素游離β亞基（Free β-HCG ）或者AFP+血清人絨毛膜促性腺激素（HCG） b)三聯(lián)法：AFP+ Free β-HCG+血清游離雌三醇（uE3）或者 AFP+HCG+uE3 或者AFP+ Free β-HCG+抑制素A（InH-A） c)四聯(lián)法： AFP+ Free β-HCG+uE3+ InH-A或者A

4、FP+ HCG+uE3+ InH-A,中孕期母血清學(xué)產(chǎn)前篩查標(biāo)準(zhǔn),（2）結(jié)果的判別 篩查結(jié)果分為高風(fēng)險(xiǎn)和低風(fēng)險(xiǎn)： a)唐氏綜合征篩查結(jié)果可采用1/270為陽(yáng)性切割值（臨界值），即篩查結(jié)果風(fēng)險(xiǎn)率≧1/270者為高風(fēng)險(xiǎn)妊娠； b)18-三體綜合征篩查結(jié)果可采用1/350為陽(yáng)性切割值，篩查結(jié)果風(fēng)險(xiǎn)率≧1/350者為高風(fēng)險(xiǎn)妊娠； c)開放性神經(jīng)管缺陷宜以母血清AFP ≧2.0-2.5MOM，為

5、陽(yáng)性切割值，篩查結(jié)果AFP ≧2.0-2.5MOM者為高風(fēng)險(xiǎn)妊娠。,（3）產(chǎn)前篩查的檢出率要求 二聯(lián)法： T21 ≧60% 假陽(yáng)性率＜8% T18 ≧80% 假陽(yáng)性率＜5% ONTD ≧85% 假陽(yáng)性率＜5% 三聯(lián)法： T21 ≧70% 假陽(yáng)性率＜5%

6、 T18 ≧85% 假陽(yáng)性率＜5% ONTD ≧85% 假陽(yáng)性率＜5% 四聯(lián)法： T21 ≧80% 假陽(yáng)性率＜5% T18 ≧85% 假陽(yáng)性率＜1% ONTD ≧85% 假陽(yáng)性率＜5%,時(shí)間分辨熒光免疫法,時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定：是一種非同位素免疫分析技術(shù)。用鑭

7、系元素標(biāo)記抗原或抗體，根據(jù)鑭系元素螯合物的發(fā)光特點(diǎn)，用時(shí)間分辨技術(shù)測(cè)量熒光，同時(shí)檢測(cè)波長(zhǎng)和時(shí)間兩個(gè)參數(shù)進(jìn)行信號(hào)分辨。特異性好。發(fā)光時(shí)間長(zhǎng)。由于蛋白質(zhì)等本底物質(zhì)所發(fā)出的熒光發(fā)光時(shí)間較短，因此可以通過(guò)延長(zhǎng)時(shí)間去除本底干擾，提高準(zhǔn)確性。穩(wěn)定。,抽母體外周血，檢測(cè)AFP、 β-hCG、uE3，結(jié)合孕婦年齡、 孕周、等信息，評(píng)估孕唐氏兒 的風(fēng)險(xiǎn)值。 時(shí)間分辨熒光免疫分析儀、 三聯(lián)篩查假陽(yáng)性率小于5%時(shí)，

8、 檢出率70%,（4）我院的檢測(cè)方法,篩查出的高風(fēng)險(xiǎn)孕婦需要進(jìn)一步診斷。21-三體高風(fēng)險(xiǎn)18-三體高風(fēng)險(xiǎn) 羊水穿刺 染色體核型分析NTD高風(fēng)險(xiǎn) 超聲診斷,2、細(xì)胞遺傳學(xué)檢查,染色體檢查、染色體核型分析,取樣方法,絨毛穿刺取樣羊膜腔穿刺取樣臍帶血穿刺取樣外周血取樣,,產(chǎn)前診斷,有自然流產(chǎn)史、死胎、葡萄胎、女性原發(fā)不孕、繼發(fā)不孕的夫婦；生過(guò)遺傳病患兒及先天畸形患兒的父

9、母；男性少精、弱精、畸精、死精癥及婚后不明原因不育的夫婦；兩性畸形及性器官發(fā)育異常的患者；原發(fā)閉經(jīng)、繼發(fā)閉經(jīng)的婦女；染色體異常的患者及患者的父母和同胞；,染色體檢查適應(yīng)證：,原因不明的智力低下及生長(zhǎng)發(fā)育遲緩的患者；本人及家系成員患有某種遺傳疾病或先天畸形的患者；未婚青年的相戀對(duì)方或其家屬患有某種遺傳病或先天畸形的患者；長(zhǎng)期接觸不良環(huán)境因素的婚齡、育齡的男女青年；常規(guī)檢查或常見遺傳病篩查發(fā)現(xiàn)異常者；青年男女的婚（孕）前檢

10、查與咨詢。,A：正常二倍體細(xì)胞核內(nèi) 有2 個(gè)21號(hào)染色體信號(hào) B：21-三體患者細(xì)胞核內(nèi)有3個(gè) 21號(hào)染色體信號(hào),3、熒光原位雜交 以21號(hào)染色體的相應(yīng)片段序列作探針，進(jìn)行原位雜交，可快速、準(zhǔn)確進(jìn)行診斷。 21-三體綜合征患兒的細(xì)胞中呈現(xiàn)3個(gè)21號(hào)染色體的熒光信號(hào)。,FISH具有其不可比擬的優(yōu)點(diǎn)：1.操作簡(jiǎn)便，探針標(biāo)記后穩(wěn)定，一次標(biāo)記后可使用二年。2.方法敏感，能迅速得到結(jié)

11、果。3.在同一標(biāo)本上，可同時(shí)雜交幾種不同探針。4.不僅可用于分裂細(xì)胞染色體數(shù)量或結(jié)構(gòu)變化的研究，而且還可用于靜止期細(xì)胞的染色體數(shù)量及基因改變的研究。,目前羊水FISH產(chǎn)前診斷： 可快速診斷胎兒13、18、21、X、Y染色體數(shù)目的異常。,4、無(wú)創(chuàng)染色體非整倍體產(chǎn)前檢測(cè),母體外周血含有的cffDNA，幾乎全部來(lái)源于胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞懷孕4周可檢出，8周后含量上升并穩(wěn)定存在母體外周血中的cffDNA含量在5%-50%之間。孕

12、周越大外周血中胚胎DNA的含量越高,無(wú)創(chuàng)：10ml外周血，無(wú)須空腹風(fēng)險(xiǎn)?。簾o(wú)流產(chǎn)、感染風(fēng)險(xiǎn)孕12周以上即可檢測(cè)DNA水平檢測(cè)，準(zhǔn)確率99%以上檢測(cè)周期短，10個(gè)工作日出檢測(cè)結(jié)果,無(wú)創(chuàng)DNA產(chǎn)前檢測(cè)技術(shù)與傳統(tǒng)診斷技術(shù)相比具有如下優(yōu)勢(shì)：,嵌合體和多胎目前不能檢 影響因素：,孕婦染色體異常孕婦近期接受過(guò)異體輸血、移植手術(shù)、干細(xì)胞治療胎兒其他染色體異常樣本自然溶血或因個(gè)體差異造成的cffDNA含量過(guò)低孕周計(jì)算不準(zhǔn)確抽血時(shí)孕

13、婦體重超過(guò)100kg,局限性和風(fēng)險(xiǎn)：,,,一、產(chǎn)前實(shí)驗(yàn)室相關(guān)技術(shù),,,二、唐氏篩查申請(qǐng)單填寫注意事項(xiàng),,,三、我們實(shí)驗(yàn)室開展的項(xiàng)目,,唐氏篩查申請(qǐng)單填寫項(xiàng)目,中孕期唐氏綜合征血清學(xué)篩查檢測(cè)的孕周范圍為15-20周6天，早孕期唐氏篩查檢測(cè)的孕周范圍為9-13周6天。請(qǐng)開單醫(yī)生嚴(yán)格把關(guān)。孕婦的電話號(hào)碼一定要如實(shí)填寫，以便核實(shí)信息、高風(fēng)險(xiǎn)通知和日后隨訪。采血日期應(yīng)填寫采血當(dāng)日日期（公歷）。出生日期應(yīng)為孕婦的實(shí)際出生日期（公歷）。如農(nóng)歷生

14、日應(yīng)換算成公歷后再填寫或在申請(qǐng)單上清晰標(biāo)注。,體重單位為公斤，填寫時(shí)需注意。唐氏篩查風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估軟件中體重的檢測(cè)范圍為40-120公斤，如不在此范圍內(nèi)，將按最接近的臨界值計(jì)算（如孕婦體重為38公斤，軟件將按40公斤計(jì)算），因此在采樣時(shí)須告知孕婦，得到知情同意后方可送檢，并在申請(qǐng)單上標(biāo)注。體重可以對(duì)孕婦血清中AFP， free-βhCG，uE3三個(gè)指標(biāo)進(jìn)行校正，以避免因體重的增加，使其在血液中濃度降低。唐氏篩查的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估軟件默認(rèn)規(guī)則的月經(jīng)

15、周期為28-30天，超出此范圍均為不規(guī)則，不能應(yīng)用末次月經(jīng)來(lái)推算孕周，因此必須提供一份超聲信息。單雙胎必須填寫。因?yàn)槿鐬殡p胎，血清學(xué)指標(biāo)會(huì)較單胎時(shí)偏，因此高風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估軟件會(huì)對(duì)結(jié)果進(jìn)行校正。（從2013年4月7日開始，我中心不再對(duì)雙胎做中期篩查）,懷孕方式應(yīng)注明自然懷孕或輔助生殖，如為IVF，應(yīng)填寫取卵日期和植入日期，并提供超聲信息。軟件同樣會(huì)進(jìn)行校正。每一位受檢孕婦均應(yīng)提供一份超聲信息，超聲信息以孕早期超聲頭臀長(zhǎng)（CRL）為最佳，如沒(méi)

16、有孕早期超聲，至少應(yīng)提供一份包括胎兒雙頂徑數(shù)值（BPD）或超聲當(dāng)日提示孕周，二者至少應(yīng)有一項(xiàng)的超聲結(jié)果，并注明超聲日期。懷孕過(guò)程中是否有陰道流血的現(xiàn)象應(yīng)如實(shí)填寫，請(qǐng)開單醫(yī)生在問(wèn)診時(shí)注意。異常妊娠史主要包括不明原因流產(chǎn)、死胎等現(xiàn)象。如孕婦曾生育過(guò)21-三體綜合征、18-三體綜合征，應(yīng)直接建議孕婦做產(chǎn)前診斷，不建議做唐氏篩查。如孕婦特別要求，應(yīng)交代清楚后再送檢，并在申請(qǐng)單上標(biāo)注清楚。,胰島素依賴型糖尿病及吸煙史應(yīng)如實(shí)填寫，且為必填項(xiàng)目。

17、因?yàn)橛幸葝u素依賴型糖尿病病史的孕婦血清中hAFP 低10%；uE3 低7%；free hCGb 低11%。而吸煙的孕婦血清中free-βhCG較正常孕婦降低3%，AFP較正常升高3%。“中孕期母血清學(xué)產(chǎn)前篩查知情同意書”應(yīng)按照知情選擇、孕婦自愿的原則，醫(yī)務(wù)人員應(yīng)事先告知孕婦或其家屬產(chǎn)前篩查的性質(zhì)，孕婦及醫(yī)生同時(shí)簽字，不可由他人代簽。年齡在35歲及35歲以上的孕婦，建議直接做遺傳咨詢。,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,

18、,,,,一、產(chǎn)前實(shí)驗(yàn)室相關(guān)技術(shù),,,二、唐氏篩查申請(qǐng)單填寫注意事項(xiàng),,,三、我們實(shí)驗(yàn)室開展的項(xiàng)目,,早孕期唐氏篩查中孕期唐氏篩查羊水細(xì)胞培養(yǎng)染色體產(chǎn)前診斷臍帶血細(xì)胞培養(yǎng)染色體產(chǎn)前診斷外周血染色體核型分析羊水熒光原位雜交（FISH）產(chǎn)前診斷流產(chǎn)絨毛組織熒光原位雜交（FISH）先天性心臟病FISH產(chǎn)前診斷,開展項(xiàng)目,早孕期篩查：（1）血清學(xué)篩查，是在孕9-13周6天進(jìn)行，抽血檢測(cè)孕婦血清中生化指標(biāo)（PAPP-A和Free-

19、β hCG），結(jié)合孕婦的年齡、體重、孕周等進(jìn)行綜合風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，得出胎兒患21-三體、18-三體綜合征的風(fēng)險(xiǎn)。（2）一站式篩查，是在孕11周-13周6天做超聲NT掃描，確定孕周在11周-13周6天內(nèi)，然后抽血進(jìn)行早孕期血清學(xué)指標(biāo)檢測(cè)，將NT指標(biāo)與血清學(xué)指標(biāo)、孕婦年齡、體重、采血日期等進(jìn)行結(jié)合，評(píng)估胎兒罹患21-三體、18-三體的風(fēng)險(xiǎn)。,早孕期篩查的優(yōu)勢(shì)：（1）早孕期篩查把產(chǎn)前篩查的孕周窗提前，使孕婦更早掌握胎兒罹患21-三體、18-

20、三體的風(fēng)險(xiǎn)，盡早進(jìn)行相關(guān)產(chǎn)前診斷。（2）早孕期篩查還可以與中孕期篩查進(jìn)行整合，提高21-三體、18-三體的檢出率。,流產(chǎn)絨毛組織FISH快速檢測(cè),發(fā)生率：50%以上的早期流產(chǎn)是由胚胎染色體異常引起，且大多數(shù)為染色體數(shù)目異常。原理：FISH快速檢測(cè)使用13、16、18、21、22、X、Y探針，檢測(cè)7個(gè)染色體的非整倍體。檢測(cè)：取流產(chǎn)絨毛組織少許，浸泡生理鹽水中送到產(chǎn)前診斷中心4樓前臺(tái)，進(jìn)行熒光原位雜交檢測(cè)。,先天性心臟病FISH

21、產(chǎn)前診斷,發(fā)生率：活產(chǎn)嬰兒中占8‰，每年新增15-20萬(wàn)例。原因：遺傳因素——心臟調(diào)節(jié)基因的遺傳突變。 環(huán)境因素——藥物、感染、母親患病等。檢測(cè)： 妊娠11-14周進(jìn)行B超檢查，測(cè)量胎兒頸背透明帶厚度。 中期18-22周用胎兒超聲心動(dòng)圖檢測(cè)。 22q11熒光原位雜交檢測(cè)。,,,22q11熒光原位雜交檢測(cè),合作開展項(xiàng)目,1、無(wú)創(chuàng)染色體非整倍體產(chǎn)前檢測(cè)項(xiàng)目2、Array-CGH技術(shù)項(xiàng)目3、單

22、基因遺傳病檢測(cè)項(xiàng)目,1.無(wú)創(chuàng)染色體非整倍體產(chǎn)前檢測(cè),可篩查13、18、21染色體三倍體 （發(fā)報(bào)告） 還可觀測(cè)到其他染色體的非整倍體異常（口頭通知） 檢出率可達(dá)99%有專家建議： 可以代替產(chǎn)前篩查的精密篩查項(xiàng)目提示：可供孕婦及其家屬選擇，但費(fèi)用高。,,,2. Array-CGH技術(shù),Array-CGH技術(shù) 應(yīng)用于羊水細(xì)胞檢測(cè)，是一種產(chǎn)前診斷技術(shù)。,Array-CGH技術(shù)原理與流程,3.

23、 單基因遺傳病檢測(cè),關(guān)鍵：找到先證者；查夫妻雙方為攜帶者，可以指導(dǎo)下一胎生育。,,,目前開展700多種遺傳疾病的診斷。成功案例：一夫妻多次懷孕均為腦膨出，多次就醫(yī)，省內(nèi)多家 醫(yī)院均未查到原因。最近一次懷孕又是腦膨出，到 我中心就診。 我們的醫(yī)生懷疑為： Meckel綜合征 通過(guò)單基因檢測(cè)，胎兒診斷為：Meckel綜合征4型。