torch病原及其實驗室檢測進展概要

1、TORCH病原及其實驗室檢測進展,溫州醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院 鄭曉群,TORCH ?,,,是一組具有胎兒致畸作用病原微生物的英文縮寫。,TORCH,弓形體（Toxplasma，Toxo）其他微生物 (Others)風疹病毒（Rubella virus，RV）巨細胞病毒（Cytomegalo virus，CMV）單純皰疹病毒（herpes simples virus，HSV）,,TORCH的病原學和致病性,TORCH感

2、染可造成孕婦流產、胎兒畸形，是發(fā)病率較高的致畸微生物。許多國家已將TORCH檢測作為孕期常規(guī)篩查項目。,1. 弓形蟲( Toxoplasma ),分類：弓形蟲目前在世界上只有一種，即剛地弓形蟲（T.gondii）。是一種專性細胞內寄生的原蟲，為人獸共患病。生活史：分有性生殖和無性生殖。包括5個期：滋養(yǎng)體、包囊、裂殖體、配子體、卵囊。貓科動物是終宿主；人和哺乳動物是中間宿主。,包囊,速殖子,滋養(yǎng)體,,,傳染源：貓及貓科動物為重要傳

3、染源，人類通過胎盤垂直傳播。,1. 弓形蟲( Toxoplasma ),寄生場所： 中間宿主體內：除紅細胞外的各種有核細胞內。 終宿主體內：小腸上皮細胞內。感染時期：包囊、假包囊、滋養(yǎng)體及卵囊。,感染方式：1）先天性感染 經胎盤感染。2）后天性感染 經口感染 食入含有包囊或假包囊的肉、蛋、奶等制品；食入含有卵囊污染的水、食物等。經皮膚粘膜感染經輸血或器官移植感染,,妊娠早、中、晚期，胎兒受染

4、率分別為17%、25%和65%。早、中期感染：除可引起流產外，還可引起胎兒多發(fā)性 畸形，如腦積水、小眼、無眼癥、先天性白內障、唇腭 裂、先天性心臟病、肛門閉鎖及肢體畸形等。晚期感染：可引早產、圍產兒死亡，也可致腦萎縮、腦 積水、智力發(fā)育遲緩或癲癇等。,1. 弓形蟲( Toxoplasma ),致病性：,,,弓形蟲感染引起的腦膜膨出,視網膜脈絡膜炎眼底出現(xiàn)圓形或橢圓形病灶，約1-3個視乳頭面積大小，邊界清楚，病灶內

5、組織消失。,1. 弓形蟲( Toxoplasma ),,風疹病毒為披膜病毒科風疹病毒屬。病毒粒子具有多形性，大小為50～85 nm單股正鏈 RNA ，并有若干個結構蛋白。病毒核心直徑約為30nm。人是病毒的唯一宿主，不能終身免疫。雙層包膜，表面嵌有具有凝血和溶血活性的刺突。 對乙醚等脂溶劑敏感，不耐熱，紫外線。,,2. 風疹病毒(Rubella virus),2. 風疹病毒(Rubella virus),人是風疹病毒的惟一

6、自然宿主。 病毒進入呼吸道后先在局部粘膜，繼而在頸部、頦下和耳后淋巴結增殖，約7d后入血并擴散至全身，引起皮疹(淡紅色斑丘疹)，疹期3 d，病毒通過呼吸道分泌物排出體外。,2. 風疹病毒(Rubella virus),主要通過飛沫傳播。人群普遍對風疹病毒易感，以兒童最多見。 風疹病毒還可發(fā)生垂直傳播，導致先天性風疹綜合征，亦可導致流產或死胎等。,妊娠初期，母體血液中的病毒可通過胎盤感染胎兒，常導致白內障、小眼球癥、重聽、心臟病和小頭

7、癥等先天性異常。妊娠第一 個月感染風疹，CRS的發(fā)生率達50％，第二個月為30％，第三個月為20％，第四個月為5％。風疹病毒感染后機體能獲得牢固的免疫力(特異性IgG抗體)。,2. 風疹病毒(Rubella virus),致病性與免疫性,3. 巨細胞病毒（CMV）,1956年Smith等首先用組織培養(yǎng)方法分離出病毒。 由于感染的細胞腫大并具有巨大的核內包涵體故而命名巨細胞病毒。,3. 巨細胞病毒（CMV）,巨細胞病毒屬皰疹病毒

8、科乙組皰疹亞科。 病毒的直徑約200 nm，是最大的動物病毒之一。 病毒衣殼是由162個質粒組成的正20面體。 核酸是雙鏈DNA。,3. 巨細胞病毒（CMV）,CMV具有典型的皰疹病毒的形態(tài)結構。病毒感染的宿主和細胞范圍狹窄，種屬特異性高：即人CMV只能感染人，細胞培養(yǎng)時也只能在人的成纖維細胞中增殖。,生物學性狀,3. 巨細胞病毒（CMV）,復制周期長，增殖緩慢，初次分離 有時需1個月才能出現(xiàn)局灶病變。

9、特點是細胞變圓、膨脹、核變大、 形成巨大細胞，核內出現(xiàn)周圍繞有 一輪“暈”的大型嗜酸性包涵體。,3. 巨細胞病毒（CMV）,潛伏部位：唾液腺、乳腺、腎臟、白細胞及其他腺體，長期或間歇地從尿、唾液、淚液、乳汁、精液、宮頸及陰道分泌物排出病毒。傳染源：患者及無癥狀的隱性感染者。傳播途徑：人與人之間的密切接觸，通過口-口或手-口傳播。此外還可通過輸血和器官移植等多種途徑傳播。,3. 巨細胞病毒（CMV）,CMV在人群中的感染極為

10、普遍，初次感染大多在2歲以下，通常呈隱性感染，少數(shù)人有臨床癥狀 。 60%～90%成人有CMV抗體，可長期帶病毒。孕婦一旦感染，可通過血液、胎盤屏障、羊水等感染胎兒，致胚胎發(fā)育異常，造成流產、死胎、早產、先天畸形及出生后持續(xù)感染等一系列嚴重后果。,單純皰疹病毒屬皰疹病毒科，直徑150～200nm，為雙鏈DNA結構，神經節(jié)潛伏感染，根據(jù)其抗原性的不同分為Ⅰ型和Ⅱ型。I型病毒多侵襲腰以上部位，引起如口唇皰疹、皰疹性濕疹、口腔炎、角膜結

11、膜炎等病癥；II型病毒多感染腰以下部位，引起生殖器皰疹，它主要通過性生活傳播，并可能與宮頸癌有關。,4.單純皰疹病毒( Herpes simples virus),單純皰疹病毒在人群中廣泛存在，人是唯一的宿主。 傳染源：患者及無癥狀單純皰疹病毒攜帶者是傳染源。 （病毒常存在于皰疹病灶或健康人唾液中） 傳播途徑：主要通過直接密切接觸和兩性接觸傳播。,4.單純皰疹病毒( Herp

12、es simples virus),妊娠初8周受染：可發(fā)生流產及先天畸形如小腦、先天性無腦、腦積水等多器官畸形。晚期感染HSV：胎兒可見有小頭、小眼球、視網膜脈絡膜炎、大腦半球萎縮、發(fā)育遲緩、智力障礙、嚴重病例可致死亡。,4.單純皰疹病毒( Herpes simples virus),致病性,5. 其他微生物(others),柯薩奇病毒　梅毒螺旋體　微小病毒　乙型肝炎病毒等乙肝病毒經胎盤垂直傳給胎兒，可引起嬰幼兒非致命性傳染

13、性肝炎。妊娠期發(fā)生急性微小病毒B19感染后，超過95 %的胎兒在胎齡12 周內出現(xiàn)并發(fā)癥如水腫，甚至死亡等。,TORCH與優(yōu)生優(yōu)育關系,,TORCH感染的臨床診斷,TORCH常規(guī)檢驗項目,TORCH檢驗目的,TORCH檢驗方法,ELISA化學發(fā)光法Western Blot基因診斷組織細胞培養(yǎng),ELISA,測特異的IgG和IgM間接法和捕獲法特異IgG抗體親和力（Avidity）的測定,特異IgG抗體親和力,基本原理:

14、 機體感染病原體后,初次免疫應答后產生的抗體,通常為低親合力( 有功能的親和力),經過數(shù)周或數(shù)月后,經過親和力成熟的過程,其與抗原的互補更好, 而成為高親合力抗體。,特異IgG抗體親和力,在免疫測定中，臨床標本中加入尿素或其他變性劑，則可測出可經受及不能經受尿素等變性劑作用的抗體，不能經受的則為低親合力抗體，則反映為急性或近期感染。,特異IgG抗體親和力測定的意義,可排除患者前4-5個月內發(fā)生的感染，其 對第一個月的特異IgM和IgG

15、均陽性的妊娠婦女尤其有用，如果此時特異IgG為高親合力,則說明為孕前感染，懷孕前感染對胎兒影響不大。,母嬰成對樣本IgG和IgM蛋白印跡（Western Blot，WB),母嬰成對樣本蛋白印跡可能對在常規(guī)方法測定IgA和/或IgM抗體為陰性但其母親在孕期有確定的或急性獲得性感染的新生兒的感染的診斷最有用。,Western Blot,母嬰成對樣本IgG和IgM蛋白印跡（Western Blot，WB),IgG可通過胎盤由母體至胎兒。Ig

16、A和IgM不能，但在出生過程中卻可能發(fā)生，來 自母體的IgA和IgM持續(xù)時間短，只有數(shù)天。對母體和嬰兒血清進行蛋白印跡檢測,可出現(xiàn) 不同的條帶，其原因可能對病原體的免疫應答 在胎兒和母體間不一樣。使用IgA WB最不敏感，聯(lián)合IgG和IgM的WB 最敏感。,母嬰成對樣本IgG和IgM蛋白印跡（Western Blot，WB),出生后幾天的血清標本，WB陰性結果有可能 為假陰性，因為有可能出生后幾周內都不出 現(xiàn)陽性結果。

17、WB應與其他方法如ELISA測IgA和IgM聯(lián)合應 用。單個方法很難對先天性感染做出診斷。關鍵是對嬰兒進行仔細的重復檢測來確定是 否感染。,基因診斷,測定樣本：血液、羊水、尿液、腦脊液等。PCR測定病原體核酸是測定特定病原體急性感 染的最直接的證據(jù)。采用羊水進行PCR測定是較常規(guī)檢測方法敏感、快速和更安全的方法。,,TORCH檢驗的應用及結果解釋,目前尚不能依靠單個的方法來明確診斷 檢測方案是： 1.使用