食物中毒及腸道傳染病采樣上傳

1、食物中毒及腸道傳染病采樣,,前 言,食物中毒和腸道傳染病是最常見的衛(wèi)生事件,在食物中毒和腸道傳染病診斷與技術處理過程中,實驗室檢查是非常重要的,檢驗結果直接關系到食物中毒和腸道傳染病事件的控制和病人的救治,在食物中毒和腸道傳染病流行病學調(diào)查中對可疑標本的采集與送檢,是保證檢驗質量的前提,同時也是一項涉及面較廣的基本技能,每個衛(wèi)生工作者都應掌握。,病原學分類,食物中毒：化學性 生物性 生物性：細菌、病毒、真菌毒素

2、細菌性食物中毒：人體攝入了被細菌或其毒素污染的食品后所出現(xiàn)的非傳染性急性、亞急性疾病腸道傳染?。荷镄?生物性：細菌、病毒 細菌性腸道傳染?。簩傥覈ǘ▊魅静?，主要包括霍亂、痢疾、傷寒、副傷寒及其它感染性腹瀉采樣：細菌性食物中毒的樣品采集最具代表性,一、標本的采集原則,1.典型性原則 食物中毒標本的采集不同于衛(wèi)生評價采樣,應根據(jù)中毒病人的臨床表現(xiàn)和現(xiàn)場流行病學調(diào)查,初步判斷中毒類型,根據(jù)可疑食物的性質采集

3、可能含毒最多的標本。如細菌性食物中毒以病人用藥前的排泄物、可疑殘留食物,尤其是動物性食物為主;真菌及真菌毒素性食物中毒以食物原料為主;化學性與植物性食物中毒以可疑殘留食物、食物原料、病人排瀉物及體液為主。,一、標本的采集原則,2.適時性原則 為了防止可疑食物丟失和被檢物質組分發(fā)生變化,保證得到正確結論必須盡快采樣送檢。流調(diào)人員到達現(xiàn)場后應及時采樣送檢,臨床有時需要實驗室結果采用針對性的藥物進行搶救,故采樣送檢的時間性在食物中毒處理中尤

4、其重要。,3.適量性原則 由于引起食物中毒的毒物種類繁多,有時需實驗室檢索的項目很多,這要求有一定的樣本量,在可能的情況下盡量多采。4.程序原則 采樣、送檢、留樣和出具報告必須按規(guī)定的程序進行，各階段都要有完整的手續(xù)，責任分明。,一、標本的采集原則,二、食物中毒標本的采集,通過初步調(diào)查結果和對中毒事故的初步判斷，根據(jù)需要進行采樣，樣品一般情況下有以下幾種：Ａ.食品原料及剩余食品；Ｂ.患者的嘔吐物、糞便、血液、尿

5、液；Ｃ.食品容器及加工工具表面涂抹；Ｄ.食品生產(chǎn)經(jīng)營者的手試、肛試，必要時可做全面的身體健康檢查；Ｅ.其他與中毒食品有關的物品或病人的標本等。,1.采樣用具要求,所有采樣的用具包括標本容器要符合微生物檢驗的無菌及無抑菌物質采樣用具包括酒精燈、鑷子、剪刀、勺子、試管架、滅菌棉拭子、滅菌肛拭管、滅菌生理鹽水管、滅菌１％ＮaCl營養(yǎng)肉湯管、Ｃ-Ｂ運送培養(yǎng)基、分離平板、pH7.6甘油緩沖液、滅菌容器(玻璃瓶、塑料袋、紙袋等)、飲盒；

6、,1.采樣用具要求,止血帶、采樣墊巾、無菌棉簽、復合碘伏消毒液、真空采血管（生化項目用生化管；免疫項目用生化管或肝素抗凝管；血常規(guī)項目用2mlEDTA-K2抗凝管）、持針器、一次性靜脈采血針。,2.采樣人要求,A. 采樣必須由2 名以上專業(yè)人員執(zhí)行,出示證件說明來意及采樣依據(jù),告知被采樣人所享有的權利和義務,在被采樣者的陪同下進行樣品的采集。 B. 注意被采樣人及采樣人員的衛(wèi)生和安全，采樣人員采樣時應著工作服，戴口罩和一次性手套。,

7、3.采樣方法,（1）殘存食物、原料的采集　在沒有明確的可疑中毒食品線索時，采取樣品應注意樣品的代表性;如果已取得可疑中毒食品的部分依據(jù)，則應注意樣品的典型性，即有針對性地采取最容易、最可能、感官異常、最明顯部位的樣品。采樣數(shù)量比衛(wèi)生監(jiān)測采樣應稍多一些，以便多次反復檢測。采取可疑食物時，最好采取餐桌上剩余食物。若做細菌檢驗，必須注意無菌操作，可用滅菌鑷子夾取后，放入滅菌的容器內(nèi)，取200～500克。,,如無剩余食物時，可用滅菌鹽水，

8、沖洗盛裝過可疑食物的容器或食具，并將洗滌水裝入滅菌容器內(nèi)采樣；亦可用沾有滅菌生理鹽水的消毒棉拭子在盛過可疑中毒食物的容器內(nèi)涂擦，用剪刀剪除棉簽柄，或是將棉簽柄在試管口折斷（用酒精燈火焰燒斷），使棉簽頭置入裝有滅菌鹽水的試管內(nèi)。體積較大的肉食及魚類等，可將其表面消后，取內(nèi)部樣品，放入滅菌容器內(nèi)。必要時也可采取半成品及原料送檢。,,（2）食物制售環(huán)節(jié)的采樣炊具、容器、鍋、盆、桶、刀、菜板、抹布等樣品的采取，可用棉拭沾滅菌１％ＮaCl

9、營養(yǎng)肉湯管反復涂擦，棄去手指接觸污染部分棉簽，然后置于增菌液內(nèi)。菜板可用消毒刀刮取其表面，抹布可用滅菌剪刀剪下一塊，剪下的抹布、菜板(墩)刮下的木屑，分別用滅菌工具采取，置入不同的裝有少量滅菌生理鹽水的試管內(nèi)。,,（3）患者吐瀉物及糞便的采集患者嘔吐物、排泄物及洗胃液樣品，應取新鮮的，并避免混入其他雜質和細菌。若懷疑為細菌性食物中毒，采糞便時應用肛拭子采樣，已用抗生素治療后采取糞便樣品，可能影響檢驗效果。若病人正在洗胃或嘔吐，則應直

10、接采取洗胃液或嘔吐物裝入滅菌的容器內(nèi)。中毒者的糞便、嘔吐物樣品，每份取5-10克，洗胃液100～200ml。,,肛拭采樣A、采樣人員采樣前檢查肛拭管表面是否光滑、有無破損及裂痕以防意外；然后將肛拭管放于潤滑液中（滅菌的pH7.6甘油緩沖液、生理鹽水或肉湯)B、被檢者采樣時匍匐于病床或桌椅上，充分暴露其肛門，采樣者囑被檢者放松，避開內(nèi)外痔，將肛拭管輕輕插入肛門約5cm，兒童約２-3cm,輕輕轉動一圈，擦取直腸表面的粘液后取出，放入

11、生理鹽水、增菌液或C-B運送培養(yǎng)基中。C、為防止污染，裝有增菌液的試管在開、蓋塞子時應將試管口在酒精燈火焰上滅菌。,,特別注意：病人痔瘡嚴重？采病人剛排出的新鮮糞便，用滅菌棉簽從糞便中采取樣品，放入采便盒或采便管內(nèi) 若讓中毒病人自行留便可能影響致病菌的檢出率。,（4）血、尿樣采集　懷疑是感染型細菌性食物中毒時，可在發(fā)病初期采血直接培養(yǎng)病原體。觀察從患者血液、排泄物中分離出的菌株，是否與食物中分離出的菌株同一菌型。對疑似細菌性

12、食物中毒,應采患者急性期(3 d 內(nèi)) 和恢復期(2 周左右) 血液。方法:無菌操作抽取靜脈血3m1 于無菌試管中,同時采集1 份正常人血樣作對照；尿樣品每份取100-200毫升。,（5）組織器官的采集　組織器官采集包括尸解或手術后采取的胃、肝、腎、肺等重要器官標本,尸解最好在病人死亡后48 h內(nèi)進行,要注意防止所用器械帶來污染。每一采集部位應更換消毒器械,每種組織應多部位采集,每份標本應采集50～100 g 于無菌潔凈容器

13、中,分別保存冷藏送檢。,（6）從業(yè)人員帶菌檢查　細菌性食物中毒對從業(yè)人員帶菌檢查非常重要,糞便用肛拭管直接采樣(不宜留便) ,保存于增菌液中；對患有呼吸道或皮膚病從業(yè)人員,用無菌拭子對其咽部或皮膚病灶處進行涂抹采樣,保存于無菌試管或增菌液中同時涂片數(shù)張(立即火焰固定) 。,（7）直接平板劃線分離當高度懷疑為某些常見細菌性食物中毒時，為縮短檢測時間，常根據(jù)要求用可疑樣品在采樣現(xiàn)場進行直接平板劃線分離。平板劃線分離培養(yǎng)細菌的目的

14、是將病理材料中的細菌分散，以便使細菌單在，從而發(fā)育成單個菌落，防止長成菌苔，避免可疑菌被雜菌掩蓋。原理：表面劃線，可疑菌被稀 釋，單個菌發(fā)育成肉眼可見的有 某些特征的菌落。,,,方法：1.將整個平板劃分成A、 B、C、D四個面積不等 的區(qū)域（目測）。 各區(qū)之間的交角應為120℃左右（平板轉動一定角度約60℃），以便充分利用整個平板的面積，而且采用這種分區(qū)法可使D區(qū)與A區(qū)劃出的線條相平行，并可避免此兩區(qū)

15、線條相接觸。,2.點燃酒精燈后， 左手持皿，底朝 下，開口向上， 右手持接種環(huán)， 在火焰上燒灼 冷卻后取少許 檢樣涂在培養(yǎng)基邊緣，將接種環(huán)上多余的檢樣在火焰上燒掉，接種環(huán)自涂抹處與平板面成30～40°夾角，以腕力在平板表面輕輕地分區(qū)進行“Z”字形劃線，先在A區(qū)劃3-4條連續(xù)的平行線(線條多少應依挑菌量的多少而定)。,3. 劃完A區(qū)后應立即 燒掉環(huán)上的殘菌，以 免因菌過多而影響

16、后 面各區(qū)的分離效果。4. 將燒去殘菌后的 接種環(huán)在平板培養(yǎng)基 邊緣（無菌）冷卻一 下，并使B區(qū)轉到上方，接種環(huán)通過A區(qū)(菌源區(qū))將菌帶到B區(qū)（注意壓線），進行“Z”字形劃線。再從B區(qū)作C區(qū)的劃線。最后經(jīng)C區(qū)作D區(qū)的劃線，劃D區(qū)時切勿重新接觸A、B區(qū)，以免極該兩區(qū)中濃密的菌液帶到D區(qū)，影響單菌落的形成。5. 隨即將皿底放入皿蓋中，燒去接種環(huán)上的殘菌。,,三、水污染事件的樣品采集,在調(diào)查水域污染狀況時，

17、需進行綜合分析判斷，抓住基本點（如水流入前、流入后充分混合的地點，用水地點，流出地點等），以取得代表性水樣。對江河、湖泊、泉水、井水等水源采樣時，將容器浸入水體中，待水至容器2／3處時取出。在采集管網(wǎng)系統(tǒng)水樣前，先消毒，再放水5分鐘，以保證樣品具有代表性。嚴格按無菌采樣規(guī)范要求采樣。,四、標本的送檢,中毒標本應盡快分析,標本送檢前,應根據(jù)采樣記錄和樣品登記表清點樣品,填好裝箱單和送樣單,盛裝標本的容器或包裝要牢固,防止破碎和污染,

18、把標本放入樣品箱(或塑料桶) 中由專人負責,立即送檢。微生物檢驗和易變質標本一般從取樣到檢驗不應超過2 h ,如超過2 h ,應將標本保持在8 ℃以下,且不得超過6 h。短途(市內(nèi)) 運送加冰保冷即可;長途運送需加干冰保冷（高溫季節(jié)特別注意） 。,,標本采集與送檢是食物中毒調(diào)查處理過程中重要步驟,要求在標本采集后應盡可能地用快速檢驗方法在現(xiàn)場進行定性檢驗,以協(xié)助診斷;對現(xiàn)場無法進行檢驗的標本在保證標本原始狀態(tài)下盡快送檢,以便在最短的時

19、間內(nèi)查明中毒原因,采取有效的搶救措施搶救病人,制定控制措施防止蔓延。,五、注意事項,1.采樣前應通知實驗室做好準備，必要時，邀請實驗室人員到現(xiàn)場采樣。 2.要填寫《采樣記錄》，《采樣記錄》中的采樣目的項要填寫具體的檢驗項目?！恫蓸佑涗洝芬行l(wèi)生調(diào)查人和被采樣人的簽名。3.樣品必須貼上標簽，填寫名稱或編號、時間、地點、數(shù)量、現(xiàn)場條件、采樣人等。4.做到嚴密封閉包裝，置冰箱內(nèi)保存，溫度通?？刂圃? ℃以下，并應在6小時內(nèi)送至實驗室，如

20、無條件時，在樣品采集和運送途中應用冰壺冷藏。,,5.樣品容器最好是清潔的玻璃器皿，也可用無色塑料制品，切勿使用金屬或陶土器皿。如發(fā)現(xiàn)容器可能影響檢驗結果時，應在檢驗報告上注明。6. 食品樣品采集盡量采取中毒患者食用后的剩余食品;無直接剩余食品時，采集可疑中毒食品的包裝或者用滅菌生理鹽水洗滌盛過可疑中毒食品的容器，取洗滌液;必要時采集半成品或原料。7. 可疑細菌性食物中毒或原因不明時，要用無菌采樣方法進行。,,8. 可疑細菌性食物

21、中毒或原因不明時，盡可能采集未用藥患者的樣品，但用藥后的樣品仍可能有價值。9.大便樣品采集必須用采便管采集腹瀉病人大便，若讓中毒病人自行留便可能影響致病菌的檢出率。 10. 對大型食物中毒一般至少應采集10-20名具有典型臨床癥狀的患者的檢驗樣品，同時采集部份且有相同進食史但未發(fā)病者的同類樣品做對照。,,11.血液采集 懷疑感染型細菌性食物中毒時，采中毒病人急性期(3天內(nèi))和恢復期(2周左右)靜脈血各3ml，至少采集5名病

22、人，同時，采集正常人靜脈血作為對照，觀察抗體效價的變化，以便明確致病菌。當可疑化學性食物中毒時，根據(jù)情況也應考慮采集血液樣品。12.當懷疑細菌性食物中毒時，應根據(jù)對食品加工人員帶菌情況調(diào)查結果進行采樣，可用采便管對廚師進行肛拭。對患有呼吸道感染或皮膚病從業(yè)人員，應對其咽部皮膚病灶處進行涂抹采樣。13.送樣要及時，做細菌檢驗的樣品應在冷藏箱內(nèi)保存，溫度通?？刂圃? ℃以下，并應在6小時內(nèi)送至實驗室。,影響檢測的因素,不恰當?shù)倪x擇 不