血液常用檢查一

1、血液常用檢查,一、紅細(xì)胞計數(shù)二、血紅蛋白測定三、紅細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查四、白細(xì)胞計數(shù)五、白細(xì)胞分類計數(shù)六、白細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查七、血小板計數(shù)八、血小板形態(tài)學(xué)檢查,紅細(xì)胞計數(shù),一,血紅蛋白測定,二,紅細(xì)胞形態(tài)檢查,三,第二節(jié)血液常用檢查（一）,教學(xué)目標(biāo),掌握紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白方法熟悉紅細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)了解紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白測定臨床意義,紅細(xì)胞的發(fā)育過程,造血干細(xì)胞 →早幼紅細(xì)胞→中幼紅細(xì)胞→晚幼紅細(xì)胞脫核→網(wǎng)織紅

2、細(xì)胞→成熟紅細(xì)胞,紅系祖細(xì)胞→原始紅細(xì)胞,,（有絲分裂）,48h,成熟紅細(xì)胞,,鐵 →鐵代謝原卟啉 →膽色素代謝珠蛋白 →蛋白質(zhì)代謝,衰老紅細(xì)胞,,紅細(xì)胞的發(fā)育過程,120天,6,,檢測方法1.手工顯微鏡法2.血液分析儀法,一、 紅細(xì)胞計數(shù),7,1.手工顯微鏡法（1）血液分析儀的校正 （2）適用基層醫(yī)療單位和分散就診患者（3）費(fèi)時、重復(fù)性差，準(zhǔn)確性取決操作者技術(shù)水平 2．血液分析儀法 操作簡便、重復(fù)性好，適

3、用大批量集中檢測準(zhǔn)確性取決于儀器性能及工作狀態(tài)，定期校準(zhǔn)、質(zhì)控,方法學(xué)評價,手工顯微鏡法,8,定義：用等滲稀釋液將血液稀釋一定倍數(shù)后，滴入改良Neubauer計數(shù)板，在顯微鏡下計數(shù)一定范圍內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)，經(jīng)換算即可求得每升血液中的紅細(xì)胞數(shù)。,9,改良牛鮑計數(shù)板,計數(shù)板,,,,,,,,,,,,,壓線細(xì)胞的計數(shù)原則：,數(shù)左不數(shù)右，數(shù)上不數(shù)下,,,,,,,,,,,12,血細(xì)胞計數(shù)室各計數(shù)區(qū)的計數(shù)對象、范圍和單位換算,,,計數(shù)區(qū)域

4、 計數(shù)細(xì)胞種類 換算方式（以細(xì)胞個數(shù)/L計）,,四角4個大方格 白細(xì)胞 N/4×10×稀釋倍數(shù)×106四角及中央5個中方格 紅細(xì)胞、血小板 N×5×10×稀釋倍數(shù)×106兩側(cè)計數(shù)室四角及中央 嗜酸性粒細(xì)胞、體 N&

5、#215;稀釋倍數(shù)×1065個大方格共10個大方格 腔液細(xì)胞、精子,,13,紅細(xì)胞稀釋液組成與作用,,,,稀釋液 組成 作用 備注,Hayem液 NaCl、Na2SO4、HgCl2 調(diào)節(jié)滲透壓、增加紅細(xì)

6、 胞懸浮性和防腐作用,高球蛋白血癥時，蛋白質(zhì)沉淀致紅細(xì)胞凝集,枸櫞酸鈉稀釋液 NaCl、枸櫞酸鈉、甲醛 NaCl和枸櫞酸鈉調(diào) 節(jié)滲透壓 ，枸櫞酸鈉

7、 具抗凝，甲醛防腐,生理鹽水 生理鹽水 急診時用1%甲醛生理鹽水 甲醛、生理鹽水 急診時用,14,1.準(zhǔn)備計數(shù)板2.加稀釋液：

8、2ml3.加血：10μl混勻4.充池5.計數(shù)6.計算：紅細(xì)胞數(shù)=N/5*25*10*200*106/L結(jié)果報告方式：X. X×1012/L,紅細(xì)胞計數(shù)操作,15,成年：男性（4～5.5）×1012/L 女性（3.5～5.0）×1012/L新生兒： （6.0～7.0）×1012/L,參考值,16,1.分析前質(zhì)量控制患者準(zhǔn)備、標(biāo)本采集、存儲溫度和時間2.分析中質(zhì)量

9、控制 計數(shù)誤差（技術(shù)誤差和固有誤差）、白細(xì)胞影響 3.分析后質(zhì)量控制結(jié)合臨床資料,質(zhì)量控制,血紅蛋白 (血色素， Hb 或 HGB) 組成,二、血紅蛋白測定,珠蛋白：4條，種屬特異性亞鐵血紅素：4個，無種屬特異性,,,亞鐵血紅素結(jié)構(gòu)示意圖,O2,,HbA： α2β2 成人占95%以上,HbA2： α2δ2 成人約占2～3%,HbF(胎兒Hb)：α2γ2 成人1%以下,每個 Hb 分子由 2 條α類肽鏈和 2 條非α

10、類肽鏈組成，每條珠蛋白肽鏈含有 1 個亞鐵血紅素,,HbO2(氧合血紅蛋白),各種血紅蛋白衍生物(據(jù)鐵原子第六配位鍵的結(jié)合情況),Hbred(還原血紅蛋白),HbCO(碳氧血紅蛋白),Hi (高鐵血紅蛋白),SHb(硫化血紅蛋白),,,主要成分,少量,與氧結(jié)合,未結(jié)合,與CO結(jié)合,Fe2＋→Fe3＋,與S結(jié)合,21,氰化高鐵血紅蛋白(HiCN)測定法 十二烷基硫酸鈉血紅蛋白（SDS-Hb）法疊氮高鐵血紅蛋白(HiN3)法堿羥血紅

11、蛋白法疊氮高鐵血紅蛋白測定法溴代十六烷基三甲胺血紅蛋白測定法（CTAB）,檢測方法,,一. 原理,Hb,＋CN－,,氧化,,HiCN為棕紅色，最大吸收峰540nm。根據(jù)標(biāo)本的吸光度可知Hb濃度。,HiCN,Hi,注：硫化血紅蛋白(SHb)不能被轉(zhuǎn)化,,氰化鉀 0.05g高鐵氰化鉀 0.2g磷酸二氫鉀 0.14g非離子表面活性劑 1.0 ml蒸餾水 加至

12、1000 ml,二. 試劑,HiCN轉(zhuǎn)化液(文齊液),調(diào)pH7.0～7.4，置棕色玻璃瓶中密封保存。,氧化,調(diào)節(jié)pH,促溶,防混濁,提供CN-,,三. 方法,4.實(shí)際工作中，可用HiCN參考液，按生化方 法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，或求出K值后計算。 K＝∑Hb（g）/∑A,1. 5.0 ml Hb轉(zhuǎn)化液＋血20ul,混勻,靜置5min。,2.分光光度計比色，波長540nm，以空白轉(zhuǎn)化 液調(diào)零，測定吸光度“A”。,3.如用符合

13、WHO標(biāo)準(zhǔn)的光度計，則可據(jù)“A”直 接計算Hb濃度。,氰化高鐵血紅蛋白測定法,25,血紅蛋白濃度計算公式：Hb(g/L)=A?540HiCN/44×64458/1000×251 =A×367.7A?540HiCN：測定管吸光度44：毫摩爾消光系數(shù)64458/1000：1mmol/L Hb溶液中所含Hb克數(shù)251為稀釋倍數(shù),,三. 方法,4.實(shí)際工作中，可用HiCN參考液，按生

14、化方 法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，或求出K值后計算。 K＝∑Hb（g）/∑A,1. 5.0 ml Hb轉(zhuǎn)化液＋血20ul,混勻,靜置5min。,2.分光光度計比色，波長540nm，以空白轉(zhuǎn)化 液調(diào)零，測定吸光度“A”。,3.如用符合WHO標(biāo)準(zhǔn)的光度計，則可據(jù)“A”直 接計算Hb濃度。,氰化高鐵血紅蛋白測定法,,Hb(g/L) A 50 0.128 100 0.265 15

15、0 0.385 200 0.523,K=∑Hb/∑A = 500/1.301 = 384.32,Hb=K A,,,氰化高鐵血紅蛋白測定法,,1.KCN為劇毒藥品，防污染。2.HiCN轉(zhuǎn)化液不能存于塑料瓶中。 否則CN-下降，結(jié)果偏低。3.分光光度計應(yīng)定期校正并使用 配套的比色杯。4.標(biāo)準(zhǔn)曲線或K值應(yīng)定期校正。,四. 注意事項(xiàng),氰化高鐵血紅蛋白測定法,29,,,血紅蛋白,SDS

16、-Hb,,SDS,540nm,血紅蛋白濃度,吸光度,十二烷基硫酸鈉血紅蛋白（SDS-Hb）法,,方法學(xué)評價,HiCN法,SDS-Hb法,優(yōu)點(diǎn)：操作簡便；顯色快，結(jié)果穩(wěn)定。,缺點(diǎn)：氰化鉀有劇毒； 高白細(xì)胞或高球蛋白血癥等可致渾濁； HbCO轉(zhuǎn)化慢。,參考方法,優(yōu)點(diǎn)：操作簡單；結(jié)果穩(wěn)定；無公害。,缺點(diǎn)：摩爾消光系數(shù)未確定； 破壞白細(xì)胞； 質(zhì)量差異大 。,次選方法,,如何采用SDS-

17、Hb法進(jìn)行血紅蛋白測定？,1.HiCN法繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,2.SDS-Hb法標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制,1)取4份不同濃度抗凝血或溶血液用HiCN法 測定吸光度，并求出其Hb濃度。,2)再用SDS-Hb法測定4份標(biāo)本的吸光度。,3)以4份標(biāo)本Hb濃度為橫坐標(biāo)，SDS-Hb法測得 的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。,32,分析前質(zhì)量控制：同紅細(xì)胞計數(shù)分析中質(zhì)量控制技術(shù)誤差：稀釋倍數(shù)、分光光度計波長、光縫、比色杯光徑需校正HiCN轉(zhuǎn)化液

18、：棕色玻璃瓶HiCN參考液：關(guān)鍵質(zhì)控物：室內(nèi)質(zhì)控分析后質(zhì)量控制：同紅細(xì)胞計數(shù),質(zhì)量控制,33,①成年：男性：120～160g／L； 女性：llO～150g／L。②新生兒：170～200g／L。③老年(70歲以上)： 男性：94～122g／L；女性87～112g／L。,參考值,34,①輕度貧血，成年男性Hb＜120g/L， 成年女性＜110g/L；②中度貧血＜90g/L；③重

19、度貧血＜60g/L；④極度貧血＜30g/L。,臨床意義,35,三、紅細(xì)胞形態(tài)檢查,紅細(xì)胞大小、形態(tài)、染色和內(nèi)涵物的是否異常,1．顯微鏡分析法 采用人工顯微鏡法血涂片染色觀察， 是儀器法校準(zhǔn)的參考方法和檢測的復(fù)核方法。 2．計算機(jī)圖像分析 建立統(tǒng)計模型，以正常紅細(xì)胞形態(tài) 為參比、作出分析， 可用于與紅細(xì)胞形態(tài)變化疾病的輔助診斷。3. 血液分析儀法 提供紅細(xì)胞數(shù)量及其他

20、相關(guān)參數(shù)，對異 常結(jié)果報警， 但不能提供確切信息，需用鏡檢血涂片核實(shí)。,,,檢測原理和方法學(xué)評價,1.有合格的血液細(xì)胞形態(tài)檢驗(yàn)人員 2.選擇細(xì)胞分布均勻區(qū)域進(jìn)行鏡檢 3.注意完整規(guī)范的檢查順序 低倍鏡 細(xì)胞分布和染色 油鏡 細(xì)胞形態(tài),是否存在其他異常細(xì)胞 4．減少人為影響因素 全片瀏覽,質(zhì)量保證,,,,,38,,39,正常紅細(xì)胞,雙

21、凹圓盤形大小均一，平均7.2μm (6.7-7.7μm)；淡粉紅色，Hb充盈良好，中央部位為生理性淡染區(qū)，大小約為直徑的1／3；胞質(zhì)內(nèi)無異常結(jié)。,40,外周血紅細(xì)胞形態(tài)變化,紅細(xì)胞大小異常 小、大、巨、大小不均紅細(xì)胞性狀異常 球、橢圓、靶、口、鐮、棘、鈍鋸齒、淚滴、裂片、形態(tài)不整血紅蛋白充盈度與著色異常 低色素、高色素、嗜多色、著色不一紅細(xì)胞內(nèi)異常結(jié)構(gòu) 嗜堿性點(diǎn)彩、豪焦小體、卡波環(huán)、寄生蟲 、瘧色素紅細(xì)胞排列異常

22、緡錢狀形成、自凝現(xiàn)象有核紅細(xì)胞,1.紅細(xì)胞大小異常 (1)小紅細(xì)胞： 指直徑小于6μm的紅細(xì)胞。提示血紅蛋白合成障礙，見于缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血。(2)大紅細(xì)胞：指直徑大于l0μm的紅細(xì)胞，常見于巨幼細(xì)胞性貧血，也可見于溶血性貧血、惡性貧血等。,,(3)巨紅細(xì)胞：指直徑大于15μm的紅細(xì)胞。最常見于巨幼細(xì)胞性貧血 。(4)紅細(xì)胞大小不均：指同一患者的紅細(xì)胞之間直徑相差一倍以上。大者紅細(xì)胞直徑可達(dá)12μm，小者直徑僅2

23、.5μm。常見于嚴(yán)重的增生性貧血，巨幼細(xì)胞性貧血時尤為明顯,,2．紅細(xì)胞形態(tài)異常 (1)球形細(xì)胞：該紅細(xì)胞在血液中為球形，而在涂片上則顯示細(xì)胞中心著色深濃，體積較小，有球形之立體感。 (2)橢圓形細(xì)胞：紅細(xì)胞呈橢圓形、桿形，兩端鈍圓，長軸增大，短軸縮短。見于遺傳性橢圓形細(xì)胞增多癥、大細(xì)胞性貧血；偶見于缺鐵性貧血、骨髓纖維化、巨幼細(xì)胞貧血、鐮形細(xì)胞性貧血。正常人血液中約占l％，但不超過15％。,(3)靶形細(xì)胞：紅細(xì)胞中心部位

24、和細(xì)胞周緣染色較深，其間為不染色的蒼白區(qū)環(huán)，形如射擊之靶 。常見于各種低色素性貧血，尤見于珠蛋白生成障礙性貧血、HbC病，也見于阻塞性黃疽、脾切除后狀態(tài)。 (4)口形細(xì)胞：紅細(xì)胞中央有裂縫，中心蒼白區(qū)呈扁平狀，頗似張開的口形或魚口。常見于口形紅細(xì)胞增多癥，小兒消化系統(tǒng)疾患引起的貧血，也可見于乙醇中毒、某些溶血性貧血及肝病患者等。正常人偶見(<4％)。,(5)鐮形細(xì)胞：紅細(xì)胞外形呈鐮刀狀、線條狀。鐮狀細(xì)胞貧血(HbS-S，HbS

25、-C)和鐮狀細(xì)胞特性(HbA-S)的血標(biāo)本，在缺氧的條件下，有大量鐮細(xì)胞。(6)棘形細(xì)胞：紅細(xì)胞表面有針尖狀突起，其間距不規(guī)則，突起的長度和寬度可不一。多見于遺傳性或獲得性β-脂白缺乏癥，可高達(dá)70％～80%；也可見于脾切除后、酒精中毒性肝臟疾病、尿毒癥。,(7)新月形紅細(xì)胞：紅細(xì)胞殘缺不全，體積大，狀如新月形，直徑約20μm 。見于陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿。(8)淚滴形細(xì)胞：成熟紅細(xì)胞形如淚滴或梨狀。多見于貧血、骨髓纖維化癥時，偶見

26、于正常人。,(9)緡錢狀形成：紅細(xì)胞表面電荷發(fā)生改變，而使其互相連接如緡錢狀。(10)裂紅細(xì)胞：為紅細(xì)胞碎片或不完整的紅細(xì)胞。見于彌散性血管內(nèi)凝血、微血管病性溶血性貧血、重型珠蛋白生成障礙性貧血、巨幼細(xì)胞性貧血、嚴(yán)重?zé)齻?。正常人血涂片中裂片?xì)胞小于2%。,(11)紅細(xì)胞形態(tài)不整 指紅細(xì)胞形態(tài)發(fā)生各種明顯改變，出現(xiàn)不規(guī)則的奇異形狀，如豆?fàn)?、梨形、蝌蚪狀、麥粒狀和棍棒形等。此種細(xì)胞在某些感染或嚴(yán)重貧血時多見，最常見于巨幼細(xì)胞性貧血。,3

27、．染色異常 (1)正常色素性：見于正常人外，還見于急性失血、再生障礙性貧血和白血病等。 (2)低色素性：紅細(xì)胞的生理性中心淺染區(qū)擴(kuò)大，提示其血紅蛋白含量明顯減少。常見于缺鐵性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血、鐵粒幼細(xì)胞性貧血、某些血紅蛋白病。,(3)高色素性：中心淡染區(qū)消失，著色較深，胞體成紅色，胞體大。最常見于巨幼細(xì)胞性貧血。 (4)嗜多色性：它是剛脫核而尚未完全成熟的紅細(xì)胞，故其細(xì)胞體積較大。多色性紅細(xì)胞增多提示骨髓造紅細(xì)胞功能活躍

28、。尤見于溶血性或急性失血性貧血。,4．紅細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)異常結(jié)構(gòu) (1)嗜堿性點(diǎn)彩紅細(xì)胞：指在瑞氏染色條件下，成熟紅細(xì)胞或幼紅細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)形態(tài)不一的藍(lán)色點(diǎn)狀物，即核糖核酸(RNA)，屬于未完全成熟紅細(xì)胞，其顆粒大小不一、多少不等。常作為鉛中毒診斷篩選指標(biāo)。,(2)豪焦小體(H-J’s body)：成熟紅細(xì)胞或幼紅細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)含有一個或多個直徑為l～2μm的暗紫紅色圓形小體。可見于巨幼細(xì)胞貧、血脾切除術(shù)后、無脾癥、脾萎縮、脾功能低下