革蘭陰性球菌

1、第九章 革蘭陰性球菌,奈瑟菌屬 （Neisseria）,奈瑟氏菌屬是一群革蘭陰性球菌，常成雙排列，無鞭毛，無芽胞，有菌毛 。人類為奈瑟氏菌屬的自然宿主，在奈瑟菌屬10個種中，對人致病的只有腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌，兩種細(xì)菌DNA序列有70％的同源性，其余8個種視為條件致病菌。主要區(qū)別點為，淋病奈瑟菌寄居于尿道黏膜，引起泌尿生殖系統(tǒng)疾??；而腦膜炎奈瑟菌和其他奈瑟菌均存在于鼻咽腔黏膜。腦膜炎奈瑟菌有多糖成分。,第一節(jié) 腦膜炎奈瑟菌,

2、N. meningitismeningococcus,1. 腦膜炎奈瑟菌,腦膜炎奈瑟菌（N. meningitidis）簡稱為腦膜炎球菌（meningococcus），是流行性腦膜炎（簡稱流腦）的病原菌。,腦膜炎奈瑟菌,1.1 生物學(xué)性狀——形態(tài),腦膜炎奈瑟菌純培養(yǎng)的鏡下形態(tài)（革蘭染色）腦膜炎奈瑟菌為革蘭染色陰性，常呈雙排列，直徑約為0.6-0.8μm的雙球菌。單個菌體呈腎形或豆形。成雙排列時，兩個凹面相對。無鞭毛，不形成芽胞。

3、新分離菌株大多有莢膜和菌毛。,在腦脊液(CSF)直接涂片中，常位于中性粒細(xì)胞內(nèi)外。,1.1 生物學(xué)性狀——培養(yǎng),專性需氧，但在5%~10% CO2條件下生長最佳。營養(yǎng)要求高，需血液血清，最常用巧克力平板。形成光滑透明“露滴樣”菌落?？僧a(chǎn)生自溶酶，需及時轉(zhuǎn)種，培養(yǎng)物如不及時轉(zhuǎn)種，超過48h可死亡。,,巧克力平板：成分：普通營養(yǎng)瓊脂（或哥倫比亞瓊脂），氯化血紅素，萬古霉素（多粘菌素），輔酶A制法：取所需要量的普通營養(yǎng)瓊脂，加蒸餾水

4、溶解后，高壓滅菌。冷卻至60度左右加入一定量的羊血，置85度水浴中搖動10-15分鐘，冷卻到50度左右后加入相應(yīng)量的萬古霉素和輔酶A，搖勻后傾注平板。用途：除可以分離奈瑟菌，嗜血桿菌外，由于加入了萬古霉素，可抑制絕大多數(shù)的革蘭陽性菌的生長，在分離培養(yǎng)基上具有重要意義。血液中有V、X因子是位于紅細(xì)胞中的，一般細(xì)菌不能利用，輕微的加熱使紅細(xì)胞破壞釋放到細(xì)胞外方可利用。,腦膜炎奈瑟菌在巧克力瓊脂平板上的菌落特征,腦膜炎奈瑟菌在巧克力平板上

5、形成圓形、凸起、濕潤、光滑、透明露滴狀菌落。,,血平板：成分：普通營養(yǎng)瓊脂（或哥倫比亞瓊脂），脫纖維羊血制法：取所需要量的普通營養(yǎng)瓊脂，加蒸餾水溶解后，高壓滅菌。冷卻至50度，加入一定量（5%）羊血，傾注平板。用途：適于各類細(xì)菌的生長。,腦膜炎奈瑟菌在血瓊脂平板上的菌落特征,腦膜炎奈瑟菌在培養(yǎng)基上形成圓形隆起、表面有光澤、透明或半透明、直徑約1mm～5mm的露滴樣粘液型菌落。無色素形成。血平板上無溶血現(xiàn)象。,1.1 生物學(xué)性狀——

6、生化反應(yīng),可產(chǎn)生自溶酶，人工培養(yǎng)時若不及時移種，48h后菌體自溶。大多數(shù)腦膜炎奈瑟菌分解葡萄糖和麥芽糖，產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣。氧化酶和觸酶實驗陽性。,1.1 生物學(xué)性狀——抗原構(gòu)造,根據(jù)莢膜多糖抗原不同，分為13個血清群。目前我國流行的血清群，95%以上A群，B群次之，C群較少見，但致病力最強。,1.1 生物學(xué)性狀——抵抗力,很弱：對干燥、熱力、化學(xué)因素敏感，室溫3h即死亡。各種消毒劑敏感。,1.1 生物學(xué)性狀——致病性及免疫性,致病物

7、質(zhì)莢膜（抗吞噬作用，增強細(xì)菌侵襲力）菌毛（黏附細(xì)胞表面，利于進一步侵襲）內(nèi)毒素（主要致病物質(zhì)）所致疾病流行性腦膜炎（簡稱流腦）人類是唯一的易感宿主，常存在于患者或帶菌者的鼻咽腔黏膜中，主要通過飛沫直接從空氣中傳播。致病機制目前尚未完全清楚。免疫性6月～2歲年齡組嬰兒免疫力最低，是易感人群,1.2.1 標(biāo)本采集與分離培養(yǎng),1.病人腦脊液、血液和出血點滲出液的分離培養(yǎng)腦脊液離心取上清液檢測腦膜炎奈瑟菌特異抗原，沉淀物直接

8、接種巧克力瓊脂平板，5%CO2，37℃培養(yǎng)，同時直接染色鏡檢。病人急性期靜脈血用葡萄糖血清肉湯增菌， 5%CO2，37℃培養(yǎng)24-72h。每日從肉湯培養(yǎng)物中取樣分離培養(yǎng)，余下的血液分離血清檢查抗原和抗體效價，病人恢復(fù)期血液血清也檢測抗體效價。新鮮出血點滲出物接種巧克力平板，同時直接染色鏡檢。2.健康者咽拭子的分離培養(yǎng)咽拭子直接接種含多粘菌素B和萬古霉素的巧克力平板。,1.2.2 腦膜炎奈瑟菌的鑒定,,生化鑒定（光滑露珠樣菌落）,

9、氧化酶： +DNA酶： - 營養(yǎng)瓊脂生長： -葡萄糖： +麥芽糖： +,,氧化酶又名細(xì)胞色素氧化酶(C)、或呼吸酶。原理：氧化酶在有分子氧或細(xì)胞色素C存在時，可氧化四甲基對苯撐二胺出現(xiàn)紫色反應(yīng)。用于檢測細(xì)菌是否有該酶的存在。細(xì)菌在與試劑接觸10秒內(nèi)呈紫紅色，為陽性。,氧化酶實驗(oxidase test),1.3 鑒 定 標(biāo) 準(zhǔn),1.菌體

10、和菌落特征典型。2.生化反應(yīng)為分解葡萄糖、麥芽糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。3.普通培養(yǎng)基上不生長。4.能與腦膜炎球菌分群診斷血清發(fā)生凝集反應(yīng)。,1.4 防治原則,綜合性預(yù)防措施隔離病人、檢查帶菌者、預(yù)防性投藥，室內(nèi)通風(fēng)流腦疫苗：6個月-2歲接種兩次，間隔1月A群腦膜炎球菌多糖抗原。制備疫苗青霉素、磺胺大劑量治療,腦膜炎接種,第二節(jié) 淋病奈瑟菌,Gonococcus,淋病奈瑟菌,通稱淋球菌，是淋病的病原體。主要引起人類泌尿生殖系統(tǒng)黏

11、膜的急性或慢性化膿性感染。淋病是危害比較大性傳播疾病，也是目前我國流行的發(fā)病率最高的性傳播疾病。,2.1 生物學(xué)性狀——形態(tài),革蘭染色陰性，0.6-0.8μm 腎形、成雙排列有菌毛，無芽胞和鞭毛，新分離株有莢膜,2.1 生物學(xué)性狀——形態(tài),,男性急性淋病患者的尿道分泌物標(biāo)本直接涂片,淋球菌（n. gonorrhoeae）為嚴(yán)格的人體寄生菌，常存在于急性尿道炎與陰道炎的膿性分泌物的白細(xì)胞中，形態(tài)染色類似于腦膜炎球菌。圖片顯示白細(xì)胞內(nèi)

12、擠滿了革蘭陰性雙球菌，此種表現(xiàn)為典型的淋病柰瑟菌的特征。,男性慢性淋病患者尿道分泌物涂片（革蘭染色）急性病人：細(xì)菌位于中性粒細(xì)胞內(nèi)慢性病人：細(xì)菌位于細(xì)胞外,女性急性淋病患者陰道分泌物涂片（革蘭染色）,2.1 生物學(xué)性狀——培養(yǎng),專性需氧，首次分離時，需供給5%CO2。營養(yǎng)要求高，常用巧克力平板。抵抗力弱，不耐干燥和寒冷，對一般消毒劑敏感，對磺胺、青霉素較敏感，但易產(chǎn)生耐藥性。,2.1 生物學(xué)性狀——生化反應(yīng),生化反應(yīng)只分解葡萄

13、糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解其它糖類。不分解麥芽糖，區(qū)別于腦膜炎球菌。氧化酶及觸酶試驗均陽性。,淋病奈瑟菌在血瓊脂平板上的菌落特征,淋病柰瑟菌在血瓊脂平板上，菌落較小、光滑凸起，無色透明或呈灰白色,淋病奈瑟菌在巧克力瓊脂平板上的菌落特征,淋病奈瑟菌在巧克力瓊脂平板上，菌落較小，凸起，光滑，圓形，無色或灰白色,與腦膜炎奈瑟菌相似，營養(yǎng)要求更高，只能在巧克力平板及專用培養(yǎng)基上生長，形成灰白色細(xì)小S型呈滴露樣菌落,2.1 生物學(xué)性狀——主要菌體

14、表面抗原構(gòu)造,菌毛與粘附有關(guān)，免疫原性不強　脂多糖抗原經(jīng)常變異，相應(yīng)抗體不能防止再感染　外膜蛋白PI：主要外膜蛋白，將淋病奈瑟菌分為18個血清型PII：吸附易感細(xì)菌的蛋白,2.1 生物學(xué)性狀——致病物質(zhì)及所致疾病,致病物質(zhì)菌毛脂多糖（內(nèi)毒素）淋病人類是淋球菌唯一的天然宿主。成人淋病絕大多數(shù)通過性接觸感染，是重要的性傳播疾病（sexually transmitted disease，STD），目前我國流行的發(fā)病率最高

15、的性傳播疾病。新生兒淋球菌性眼結(jié)膜炎“膿漏眼”,2.2 細(xì)菌學(xué)檢查,標(biāo)本采集與注意事項 男性 急性尿道炎患者尿道膿性分泌物；慢性尿道炎患者要求在尿道口內(nèi)3-4cm處采樣；前列腺炎患者采前列腺液。女性 尿道炎患者采尿道分泌物；宮頸炎患者在宮頸口內(nèi)1-1.5cm處取樣。取時用特制棉簽旋轉(zhuǎn)數(shù)周，并停留數(shù)秒種后取出。最好床旁接種，或立即置運送培養(yǎng)基中，盡快送至實驗室接種培養(yǎng)。保暖（運送時35ºC保溫）、保

16、濕、立即送檢,檢驗方法,直接涂片鏡檢 對男性尿道炎患者鏡下見大量白細(xì)胞，其內(nèi)有革蘭陰性雙球菌可判為陽性。分離培養(yǎng)與鑒定 巧克力色培養(yǎng)基快速診斷法 ：觀察典型菌落。ELISA法、核酸雜交、PCR技術(shù)生化反應(yīng)免疫學(xué)實驗藥敏實驗,淋病奈瑟菌鑒定依據(jù)：,1. 涂片染色為革蘭陰性雙球菌； 2. 巧克力平板上為半透明、灰白色、凸起滴露狀菌落；3. 氧化酶及觸酶均陽性； 4. 只分解葡萄糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；5. 血清學(xué)試

17、驗陽性。,,2.3 細(xì)菌鑒別,1.與腦膜炎奈瑟菌鑒別 腦膜炎球菌可發(fā)酵葡萄糖，麥芽糖產(chǎn)酸，淋球菌只分解葡萄糖產(chǎn)酸，還可用血清學(xué)試驗加以鑒別。2.與其他奈瑟菌鑒別 一般沒有必要鑒別。 利用細(xì)菌形態(tài)、色素、糖發(fā)酵試驗。,2.4 防治原則,預(yù)防淋病應(yīng)防止不正當(dāng)?shù)膬尚躁P(guān)系。新生兒1%硝酸銀滴眼，或紅霉素、四環(huán)素眼藥膏。藥物首選青霉素，但多有耐藥性，應(yīng)用新型青霉素族抗生素。,腦膜炎奈瑟