中檢所抗生素合作項目剖析

1、抗生素分析2005版藥典方法及改進(jìn),,注射用阿莫西林克拉維酸鉀 --symmetry,背景: 藥典2005版難重現(xiàn)的方法要求:1主成分峰與相鄰雜質(zhì)的分離,2阿莫西林閉環(huán)二聚體的分離條件: Symmetry Shield RP18 4.6X250mm流動相A 為pH 6.0的0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液，流動相B為pH 6.0的0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液- 乙腈(20:80)，流速為每分鐘1.0ml，線性梯度洗脫；檢測波長

2、為254nm。,,注射用阿莫西林鈉 -- Symmetry Shield RP18,要求：阿莫西林峰和相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)大于1.5,流動相A為0.05mol/L磷酸鹽緩沖液（取0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液，用2mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至5.0）-乙腈（99：1）；流動相B為0.05mol/L磷酸鹽緩沖液（pH 5.0）-乙腈（80：20）檢測波長為254nm，流速為每分

3、鐘1.0mlSymmetry Shield RP18 4.6*150mm 5um 時間（分鐘） 流動相A（％） 流動相B（％）0 92 825 0 10040 0 10041 92

4、 855 92 8,RS=13.8,注射用阿莫西林鈉 -- Xbridge Shield RP18,流動相A為0.05mol/L磷酸鹽緩沖液（取0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液，用2mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至5.0）-乙腈（99：1）；流動相B為0.05mol/L磷酸鹽緩沖液（pH 5.0）-乙腈（80

5、：20）；檢測波長為254nm，流速為每分鐘1.0mlXbridge Shield RP18 4.6*150mm 5um 時間（分鐘） 流動相A（％） 流動相B（％）0 92 825 0 10040 0 10041

6、 92 855 92 8,Rs=26, USP=1.26,吉他霉素的分析,吉他霉素又稱柱晶白霉素（Leucomycin），含有多個組分，其基本結(jié)構(gòu)由16元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯（macrolide）、碳霉素（carbomycin）和碳霉氨糖（L-arcanose）造成，各組分間的差別僅為16元環(huán)大環(huán)內(nèi)酯環(huán)上3位的?；吞济拱碧遣糠?

7、位的酰基（R2）不同。酰基基團越大，極性越小；反之，則極性越大，-COCH3的極性大于-COCH2CH(CH3)2。,,吉他霉素組分-XBridge Shield RP18,Rs(A5,A6)=3.15,以0.1mol/L醋酸銨溶液-甲醇-乙腈（40:55:5）為流動相；柱溫60℃；檢測波長為231nm流速:1ml/minXBridge Shield RP18 4.6*250mm 5um,吉他霉素--Symmetry C18

8、,NH4OAc:MeOH:ACN=30:65:5柱溫60℃檢測波長為231nm流速:1ml/min,色譜柱:Symmetry C18 4.6*150mm 5um,實驗結(jié)果,麥白霉素,麥白霉素（Meleumycin）為麥迪霉素A1（Mydecamycin A1）及吉他霉素A6（Kitasamycin A6）（柱晶白霉素（Leucomycin））兩個組分為主的混合物，含麥迪霉素A1不得低于35.0％ 麥迪霉素A1 R

9、1=COCH2CH3 R2=H R3=COCH2CH3吉他霉素A6： R1=H R2=COCH2CH3 R3=H 挑戰(zhàn):化合物偏堿性---色譜柱壽命和方法的穩(wěn)定性,麥白霉素-- XBridge C18,XBridge C18 150 × 4.6 mm，5μm,XBridge C18 150 × 4.6 mm，5μm流動相: 0.2mol/

10、L甲酸銨溶液（用三乙胺調(diào)節(jié)pH值7.3*）-乙腈（62:38）檢測波長:232nm ,柱溫30℃；*調(diào)整到堿性條件方法會更簡化,紅霉素,1.紅霉素分子由3部分組成：德糖胺克拉定糖和紅霉素內(nèi)脂,經(jīng)分離得到紅霉素A、B、C等組分。2.紅霉素Ａ抗菌活性最強，是主要的藥用成分。紅霉素C為主要雜質(zhì)，毒性比紅霉素A大2倍活性為紅霉素Ａ的20％。挑戰(zhàn): 紅霉素屬堿性化合物，在該色譜條件下峰形拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重。紅霉素及其雜質(zhì)紫外吸收較弱,

11、,紅霉素分析比較,色譜柱：Hypersil BDS 250×4.6 mm，5μm 流動相:以0.2 mol/L磷酸銨緩沖液（取磷酸二氫銨1.15g，加水50ml溶解，用三乙胺調(diào)節(jié)pH值至6.5）0.2mol/L四甲基氫氧化銨溶液（取25%四甲基氫氧化銨14.6ml，加水100ml，用磷酸調(diào)節(jié)pH值至6.5，再加水稀釋至200ml）—乙腈—水（5∶20∶30∶45）檢測波長為215nm,紅霉素--XBridge Shi

12、eld RP18,色譜柱:XBridge Shield RP18 150(mm)×4.6(mm)，5μm 流動相：0.1mol/Ll磷酸氫二銨緩沖液（取磷酸氫二銨13.21g，加水1000ml溶解， pH值為8.03）—乙腈（65 : 35），柱溫：35 C，檢測波長：215nm,Usp =1.04,頭孢克洛膠囊-藥典規(guī)定方法,以0.78%磷酸二氫鈉溶液(取磷酸二氫鈉7.8g，加水溶解并稀釋至1000ml，用磷酸調(diào)節(jié)p

13、H值至4.0)為流動相A，以0.78%磷酸二氫鈉溶液(pH4.0)-乙腈(55∶45)為流動相B，流速為每分鐘1.0ml，檢測波長為220nm，線性梯度洗脫：時間（分鐘）流動相A（％）流動相B（％）0 95 530 75 25 450 100500 100

14、5195 56195 5,要點:相關(guān)雜質(zhì)的分離,頭孢克洛膠囊-XbridgeC18,頭孢克洛膠囊-UPLC方法,色譜柱:Acquity BEH C18 2.1*50mm 1.7um,注射用氨芐西林鈉HPLC方法,,柱溫：25度流動相： A=10mMH2PO4+0.06%HAC,pH=3.24B=CAN色譜柱:Waters X