培養(yǎng)基的認識及選擇

1、培養(yǎng)基的認識及選擇,培養(yǎng)基的成分,營養(yǎng)物質：水、蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇類、血液、無機鹽、雞蛋、動物血清、生長因子（Vit、aa、嘌呤、嘧啶等）。,氮源,氮源和碳源,無糖,碳源和能源,氯化鈉：維持酶的活性、調節(jié)菌體內外滲透壓磷酸鹽：緩沖作用,培養(yǎng)基的成分,凝固物質：最常用的為瓊脂(agar)，它是從石花菜中提出來的一種半乳糖膠，100℃溶解，40℃凝固，可利用瓊脂來改變培養(yǎng)基的物理性狀(固體或半固體)，它是理想的固體培養(yǎng)基的賦形劑

2、，其本身不被細菌分解利用，也無營養(yǎng)作用。,培養(yǎng)基的成分,抑菌劑和指示劑： 不是細菌生長繁殖的必需物質，是制備細菌的選擇、鑒別培養(yǎng)基和判斷結果的需要。 常用的指示劑有：酚紅、中性紅、甲基紅、溴甲酚紫、溴麝香草酚藍、中國蘭等酸堿指示劑，美蘭為常用的氧化還原指示劑。 常用的抑菌劑有：膽鹽、煌綠、亞硫酸鈉、亞硒酸鈉及一些染料和某些抗生素等。,培養(yǎng)基的分類,液體培養(yǎng)基：牛肉湯(牛肉浸液+1%蛋

3、白胨 +0.5%NaCl pH7.4) 半固體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基+0.2~0.5% agar 固體培養(yǎng)基：液體營養(yǎng)物+ 2% agar,按物理性狀,,培養(yǎng)基的分類,基礎培養(yǎng)基：是其他培養(yǎng)基的基礎，如普通肉 湯、 普通瓊脂平板、斜面、高層營養(yǎng)培養(yǎng)基：BAP、羅—琴培養(yǎng)基、呂氏血清斜

4、面選擇培養(yǎng)基：SS平板、BS平板、Mac平板等鑒別培養(yǎng)基：糖發(fā)酵管、MIU、KIA、TSI等特殊培養(yǎng)基：厭氧培養(yǎng)基、高滲培養(yǎng)基等,按用途,,常用的培養(yǎng)基,血瓊脂平板巧克力平板淋球菌平板念珠菌顯色平板MAC平板SS平板EMB平板TCBS平板M-H平板M-H血平板轉運培養(yǎng)基,,血瓊脂平板,適用于各類細菌生長觀察細菌菌落形態(tài)判斷溶血情況 α-溶血環(huán)：菌落周圍呈綠色，紅細胞不完全溶解 β-溶血

5、環(huán)：菌落周圍的培養(yǎng)基內紅細胞完全被破壞 γ溶血：不溶血,,巧克力平板,主要用于嗜血桿菌的分離：含有Ⅴ、Ⅹ因子添加萬古霉素抑制革蘭陽性菌，但有時α-溶血的鏈球菌會形成草綠色溶血環(huán)大多數(shù)革蘭陰性菌都會生長,,淋球菌平板,用于分離淋病奈瑟菌加入萬古霉素和多粘菌素B溶液抑制革蘭陽性菌和真菌生長,,念珠菌顯色平板,分離酵母樣真菌鑒別培養(yǎng)基：不同的真菌顯示出不同顏色的菌落,,MAC平板,選擇性培養(yǎng)基：供腸道致病菌分離培養(yǎng)

6、 非發(fā)酵菌鑒別抑制劑——膽鹽：抑制革蘭陽性菌指示劑——中性紅：區(qū)分分解乳糖和不分解乳糖的細菌腸道致病菌不分解乳糖，非致病菌分解乳糖,,SS平板,強選擇性培養(yǎng)基：用于志賀菌和沙門菌的分離抑制劑——枸櫞酸鈉、膽鹽、硫代硫酸鈉協(xié)同作用與煌綠共同抑制腸道非病原菌及大部分大腸埃希菌。其中膽鹽還能抑制革蘭陽性菌。指示劑——中性紅沙門菌菌落特點：無色半透明，產H2S與培養(yǎng)基內三

7、價鐵離子反應呈黑色中心。志賀菌菌落特點：無色不透明或透明，邊緣整齊,,EMB平板,弱選擇性培養(yǎng)基抑制革蘭陽性菌伊紅和美藍兩種染料一酸一堿作為指示劑細菌分解乳糖時產酸，使伊紅美藍結合成紫紅色化合物，有時呈金屬光澤不分解乳糖的細菌菌落為無色或灰白色有的細菌產堿過多而出現(xiàn)藍色菌落,,TCBS平板硫代硫酸鹽檸檬酸鹽膽鹽蔗糖瓊脂培養(yǎng)基,霍亂弧菌和副溶血弧菌分離培養(yǎng)堿性瓊脂膽酸鈉、牛膽粉、硫代硫酸鈉和檸檬酸鈉及較高的pH可抑制革蘭

8、氏陽性菌和大腸菌群氯化鈉可刺激弧菌的生長以麝香草酚蘭和溴麝香草酚蘭為指示劑霍亂弧菌分解蔗糖產酸，菌落呈黃色半透明，圓形扁平，帶有黏性不易挑起副溶血弧菌不分解蔗糖，菌落呈藍綠色半透明，大而扁平，帶有黏性,,M-H平板水解酪蛋白瓊脂,用于細菌藥敏試驗瓊脂擴散法（K-B法）胸腺嘧啶核苷酸含量低，不干擾磺胺類藥物測定控制鈣、鎂離子濃度，不干擾氨基糖苷類藥物測定,,M-H血平板,M-H瓊脂中加入5%脫纖維羊血用于鏈球菌藥敏試

9、驗,,轉運培養(yǎng)基,阿米斯轉運培養(yǎng)基：支原體培養(yǎng)拭子Cary-Blair運送培養(yǎng)基：彎曲菌、沙門菌、志賀菌的標本采集和保存緩沖甘油鹽水保存液：糞便標本保存改良Cary-Blair運送培養(yǎng)基：厭氧菌標本,,培養(yǎng)基的選擇,大部分細菌培養(yǎng)標本：血平板、巧克力平板大便培養(yǎng)標本：EMB、SS、MAC、TCBS酵母樣真菌培養(yǎng)標本：念珠菌顯色平板淋球菌培養(yǎng)標本：淋球菌平板中段尿標本：血平板,培養(yǎng)基接種劃線,方法：平板分區(qū)劃線

10、 沾取標本均勻涂布于平板培養(yǎng)基邊緣一小部分（為一區(qū)）；然后將接種環(huán)火焰滅菌，待冷后只通過一區(qū)2 ～3 次后連續(xù)劃線（為二區(qū)）；依次可供劃線3 ～5 區(qū)，火焰滅菌接種環(huán)。目的：分離出單個菌落,培養(yǎng)基接種劃線,方法：穿刺接種 用經滅菌后的接種針挑取菌落或培養(yǎng)物，由培養(yǎng)基中央刺到距管底約0．3 ～0．5cm 處，然后沿穿刺線退出接種針。目的：用于微量生化管接種,培養(yǎng)基接種劃線,方法：液體接種用左手持培養(yǎng)基與菌種管，右

11、手持接種環(huán)，其小指與無名指及無名指與中指之間各拔取并夾持一個棉塞，火焰滅菌試管口， 以滅菌冷卻后的接種環(huán)沾取菌種，傾斜液體培養(yǎng)基管，先在管壁與液面交界處研磨（研磨處以試管直立后液體能淹沒接種物為主），然后再在液體中擺動2 ～3 次接種環(huán)，塞好棉塞后輕輕混合即可。目的：細菌增菌及保存,培養(yǎng)基接種劃線,方法：涂布接種 用無菌棉簽浸滿菌液，在試管壁上擠去少量菌液后均勻涂布于平板上。目的：用于紙片擴散法藥敏試驗、院感監(jiān)測,培養(yǎng)基接