培養(yǎng)基的制備與滅菌

1、實驗八實驗八培養(yǎng)基的制備與滅菌培養(yǎng)基的制備與滅菌一、目的要求一、目的要求1.掌握微生物實驗室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。2.掌握培養(yǎng)基的配置方法。3.掌握干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌的操作方法。二、基本原理二、基本原理正確掌握培養(yǎng)基的配制方法是從事微生物學實驗工作的重要基礎。由于微生物種類及代謝類型的多樣性因而用于培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基的種類也很多，它們的配方及配制方法雖各有差異。但一般培養(yǎng)基的配制程序卻大致相同例如器皿的準備，培養(yǎng)基的配制與分

2、裝，棉塞的制作，培養(yǎng)基的滅菌，斜面與平板的制作以及培養(yǎng)基的無菌檢查等基本環(huán)節(jié)大致相同。三、實驗材料三、實驗材料1.藥品：待配各種培養(yǎng)基的組成成分、瓊脂、1molL的NaOH和HCl溶液。2.儀器及玻璃器皿：天平、高壓蒸汽滅菌鍋、移液管、試管、燒杯、量筒、三角瓶、培養(yǎng)皿、玻璃漏斗等。3.其他物品：藥匙、稱量紙、pH試紙、記號筆、棉花等。四、操作步驟四、操作步驟（一）玻璃器皿的洗滌和包裝1玻璃器皿的洗滌玻璃器皿在使用前必須洗刷干凈。將三角瓶

3、、試管、培養(yǎng)皿、量筒等浸入含有洗滌劑的水中用毛刷刷洗，然后用自來水及蒸餾水沖凈。移液管先用含有洗滌劑的水浸泡，再用自來水及蒸餾水沖洗。洗刷干凈的玻璃器皿置于烘箱中烘干后備用。2滅菌前玻璃器皿的包裝（1）培養(yǎng)皿的包扎：培養(yǎng)皿由一蓋一底組成一套，可用報紙將幾套培養(yǎng)皿包成一包，或者將幾套培養(yǎng)皿直接置于特制的鐵皮圓筒內，加蓋滅菌。包裝后的培養(yǎng)皿須經(jīng)滅菌之后才能使用。（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脫脂棉)，它的作用是避免外

4、界及口中雜菌進入管內，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花應距管口約0.5cm左右，棉花自身長度約1~1.5cm。塞棉花時可用一外圍拉直的曲別針、將少許棉花塞入管口內。棉花要塞得松緊適宜，吹時以能通氣而又不使棉花滑下為準。圖81移液管的包扎試管或三角瓶內空氣預先進行過濾除菌。通常方法是在試管及三角瓶口加上棉花塞等。1試管棉塞的制作制棉塞時，應選用大小、厚薄適中的普通棉花一塊，鋪展于左手拇指和食指扣成的團孔上，用右手食指將棉花從中央壓入團

5、孔中制成棉塞然后直接壓入試管或三角瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折疊卷塞法制作棉塞。制作的棉塞應緊貼管壁，不留縫隙，以防外界微生物沿縫隙侵入，棉塞不宜過緊或過松，塞好后以手提棉塞，試管不下落為準。棉塞的2／3在試管內，1／3在試管外。目前也有采用硅膠塞代替棉塞直接蓋在試管口上。將裝好培養(yǎng)基并塞好棉塞或硅膠塞的試管捆成一捆，外面包上一層牛皮紙。用記號筆注明培養(yǎng)基名稱及配制日期，滅菌待用。2三角瓶棉塞制作通常在棉塞外包上一層紗布，再塞在瓶

6、口上。有時為了進行液體振蕩培養(yǎng)加大通氣量，則可用8層紗布代替棉塞包在瓶口上，目前也有采用硅膠塞直接蓋在瓶口上。在裝好培養(yǎng)基并塞好棉塞或包扎八層紗布或蓋好硅膠塞的三角瓶口上，再包上一層牛皮紙并用線繩捆好，滅菌待用。（五）培養(yǎng)基的滅菌培養(yǎng)基經(jīng)分裝包扎后，應立即按配制方法規(guī)定的滅菌條件進行進行高壓蒸汽滅菌。（六）斜面和平板的制作1斜面的制作將已滅菌裝有瓊脂培養(yǎng)基的試管，趁熱置于木棒或玻棒上，使成適當斜度，凝固后即成斜面。斜面長度不超過試管長度

7、l／2為宜。如制作半團體或固體深層培養(yǎng)基時，滅菌后則應垂直放置至凝固。2平板的制作將裝在三角瓶或試管中已滅菌的瓊脂培養(yǎng)基融化后，待冷至50℃左右傾入無菌培養(yǎng)皿中。溫度過高時，皿蓋上的冷凝水太多；溫度低于50℃，培養(yǎng)基易于凝固而無法制作平板。平板的制作應在火旁進行，左手拿培養(yǎng)皿，右手拿三角瓶的底部或試管，左手同時用小指和手掌將棉塞打開，灼燒瓶口，用左手大拇指將培養(yǎng)皿蓋打開一縫，至瓶口正好伸入，圖83棉塞的制作圖84正確與不正確的棉塞1.金