培養(yǎng)基的配制

1、實驗五實驗五微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌培養(yǎng)基是將微生物生長繁殖所需要的各種營養(yǎng)物質(zhì)，用人工方法配制而成的各種營養(yǎng)基質(zhì)。培養(yǎng)基為微生物的生長提供營養(yǎng)物質(zhì)和生存空間。它具有微生物正常生活所需的各種養(yǎng)料和適宜的環(huán)境條件；（1）適當(dāng)組分和比例的營養(yǎng)物質(zhì)；（2）適宜的pH值；（3）合適的滲透壓；（4）保持無菌狀態(tài)。所以培養(yǎng)基是培養(yǎng)微生物所必需的最主要材料。培養(yǎng)基的配制是微生物學(xué)工作者的主要技術(shù)操作之一。培養(yǎng)基的種類：根據(jù)培養(yǎng)

2、基的組成成分，可將培養(yǎng)基分為三類：合成培養(yǎng)基：由各種純化學(xué)物質(zhì)按一定比例配制而成。半合成培養(yǎng)基：由一部分純化學(xué)物質(zhì)和另一部分天然物質(zhì)配制而成。天然培養(yǎng)基：利用天然來源的有機(jī)物配制而成的。從培養(yǎng)基的物理狀態(tài)來分：液體培養(yǎng)基：不加凝固劑的液態(tài)狀培養(yǎng)基。固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入2％左右的凝固劑的固體狀培養(yǎng)基或固體狀農(nóng)副產(chǎn)品培養(yǎng)基。半固體培養(yǎng)基：在液體培養(yǎng)基中加入0.2％0.5％凝固劑而成的半固體狀培養(yǎng)基。微生物最常用的凝固劑為瓊脂（其次

3、為明膠），又叫洋菜、凍粉。它不是一種營養(yǎng)物質(zhì)，只能被極少數(shù)種類的細(xì)菌分解利用。瓊脂是從海藻中（主要是石花菜）提取而制成的。是一種多糖類化合物，主要成分是復(fù)雜的多糖硫酸酯鈣鹽，瓊脂是一種可逆性膠體，在常規(guī)濃度下加熱到96C以上即成溶膠狀態(tài)，融化的瓊脂，當(dāng)溫度下降到42℃以下，又凝固為固體。一、目的要求一、目的要求l.了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制過程。2.了解幾種滅菌方法，掌握干熱滅菌法和加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。（7）滅

4、菌備用。滅菌后如需制成斜面的，應(yīng)在下磅后取出，擺成斜面（見圖61）。培養(yǎng)基經(jīng)滅菌后，必須放在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，如確無菌生長、方可使用。圖61滅菌的試管培養(yǎng)基趁熱擺成斜面2三種培養(yǎng)基的配方及具體配制方法（1）.牛肉膏蛋白陳瓊脂培養(yǎng)基（用于分離和培養(yǎng)細(xì)菌，是一種天然培養(yǎng)基）。配方：牛肉膏3g蛋白胨5g氯化鈉3g瓊脂20g自來水1000mLpH7.2~7.4滅菌l.05kg／cm2，25~30min本實驗將原配方配成各種濃縮液。各

5、種濃度如下：30％牛肉膏、50％蛋白胨、30％氯化鈉。以配制200mL培養(yǎng)基為例。吸取30％牛肉膏2mL；50％蛋白胨2mL；30％氯化鈉2mL；加入有刻度的搪瓷燒杯中，然后用自來水補(bǔ)足到200mL。用玻棒攪勻，在電爐上稍加熱，調(diào)pH至7.4，加瓊脂4g，加熱熔化，用玻棒不斷攪拌，至瓊脂完全溶解為止，趁熱在漏斗架上裝試管，（見圖6－2）。裝帶有棉塞的無菌試管，裝置1／5的試管高度共12支，作斜面培養(yǎng)基、用鋁殼試管帽的里裝10mL。約試管