藥物含量測(cè)定概述概要

1、藥物含量測(cè)定概述,第一節(jié) 概 述 藥品的含量測(cè)定是指準(zhǔn)確測(cè)定藥品有效成分或指標(biāo)性成分的含量。 含量測(cè)定是評(píng)價(jià)藥品質(zhì)量、判斷藥物優(yōu)劣和保證藥品療效的重 要手段。 含量測(cè)定需在鑒別無誤和雜質(zhì)檢查符合規(guī)定的基礎(chǔ)上進(jìn)行。除個(gè)別品種不收載含量測(cè)定外，原則上均按藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行含量測(cè)定。應(yīng)根據(jù)所測(cè)成分的物理化學(xué)性質(zhì)選擇相應(yīng)的測(cè)定方法。,測(cè)定藥物含量的方法(1)容量分析法： 儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、易于操作、不需

2、要使用化學(xué)對(duì)照品，成本低、速度較快，其準(zhǔn)確度和精密度都較高。(2)儀器分析法： 當(dāng)組分復(fù)雜、干擾成分較多難于用容量分析法測(cè)定含量時(shí)，選用專屬性較高的儀器分析方法。,第二節(jié) 原料藥的含量測(cè)定,一、選用原則: 根據(jù)藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)和使用該藥物生產(chǎn)制劑劑量等特點(diǎn)綜合考慮適宜的含量測(cè)定法。選用的含量測(cè)定法應(yīng)能準(zhǔn)確測(cè)試有效成分的含量，并應(yīng)具有一定的分辨力、專屬性、穩(wěn)定性和靈敏度，其準(zhǔn)確度和精密度均高。,二、常用方法（

3、一）容量分析法——首選,1、非水溶液滴定法和酸堿滴定法：如氨基酸類、有機(jī)堿及其鹽類 2、醇溶液或水溶液中的銀量法：如膽茶堿、泛影酸、氯化鈉、異戊巴比妥鈉、苯巴比妥等原料藥。 3、碘量法：如維生素C、安乃近等 4、亞硝酸鈉法：如對(duì)氨基水楊酸鈉、鹽酸普魯卡因、苯佐卡因等。 5、鈰量法和高錳酸鉀法：如硝苯地平、尼群地平的含量測(cè)定選用鈰量法；硫酸亞鐵、亞硝酸鈉等選用高錳酸鉀法。 6、配位滴定法：如葡萄糖酸鈣、泛酸鈣

4、、硫糖鋁等。 7、碘酸鉀法：碘化鈉、碘化鉀、卡托普利的含量測(cè)定,(二) 其它化學(xué)分析法——次選1、重量分析法：如順鉑的含量測(cè)定和磺溴酞鈉中硫的含量測(cè)定。2、氮測(cè)定法：如尿素、撲米酮、吡嗪酰胺等原料藥的含量測(cè)定。,(三) 儀器分析方法 1.紫外-可見分光光度法（UV)： 用于分子結(jié)構(gòu)中含有共軛體系結(jié)構(gòu)、苯環(huán)或雜環(huán)的藥物在紫外光區(qū)有特征吸收光譜，可在近紫外光區(qū)進(jìn)行分光光度分析；有色藥物或與顯色劑反應(yīng)后在可見區(qū)有

5、特征吸收的藥物，可選用可見分光光度法測(cè)定含量。,2.色譜法 (1)高效液相色譜法（HPLC)： 用于雜質(zhì)或干擾因素較多的品種的含量測(cè)定；優(yōu)點(diǎn)：分離效能高、分離速度快、應(yīng)用范圍廣、流出組分容易收集。(2)氣相色譜法（GC)： 如維生素E的含量測(cè)定。,5、含量測(cè)定法應(yīng)能適用于含量均勻度和溶出度的共同應(yīng)用，三種測(cè)定盡可能用相同的溶劑。 6、2000年版藥典規(guī)定復(fù)方制劑的含量測(cè)定，若不能直接采用吸收系數(shù)法

6、，而又無其它適宜方法時(shí)，也可用合適的計(jì)算分光光度法，對(duì)于含三個(gè)或三個(gè)以上組分的制品不宜選用此法；2010年版藥典規(guī)定：計(jì)算分光光度法一般不宜用作含量測(cè)定。 7、對(duì)于所含雜質(zhì)或賦形劑干擾含量測(cè)定，需先經(jīng)繁雜的分離才能測(cè)定，或各成分間互相干擾的制劑或復(fù)方制劑，可選用HPLC法。2010年版藥典大量采用了HPLC法。,第三節(jié) 制劑的含量測(cè)定,一、選用原則： 1、可能時(shí)應(yīng)選用與原料藥相同的測(cè)定方法，一般首選容量分析法。

7、 2、共存藥物、輔料、附加劑有干擾時(shí)，可考慮增加預(yù)處理 或改進(jìn)方法，排除干擾后用原料藥的測(cè)定方法。 3、制劑生產(chǎn)中新出現(xiàn)的降解產(chǎn)物有干擾時(shí)，可選用專屬性較高的方法。 4、主藥含量很小的制劑可選用靈敏度較高的方法，可用UV法或HPLC法．但用UV法時(shí)應(yīng)避免溶劑或降解產(chǎn)物的干 擾，選用的波長(zhǎng)應(yīng)具有合適的峰形和吸收，吸收系數(shù)在100 以上，應(yīng)盡量減少使用有機(jī)溶劑，尤其避免使用有毒害作用的溶劑。,二、共存成分無干擾

8、時(shí)常用的含量測(cè)定方法,當(dāng)共存成分無干擾時(shí)，應(yīng)選用與原料藥相同的測(cè)定方法。測(cè)定之前必須對(duì)制劑進(jìn)行處理。用物理方法將輔料除去，如片劑可先溶解、濾過，取續(xù)濾液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，或?qū)V液蒸干，用溶劑溶解后，再測(cè)定；或經(jīng)提取分離并經(jīng)干燥后才進(jìn)行測(cè)定。 共存成分無干擾時(shí)常用的含量測(cè)定方法分三類： （一）容量分析法，如阿司匹林片等含量測(cè)定選用測(cè)定原料藥的酸堿滴定法；鹽酸美西律片選用測(cè)定原料藥的非水溶液滴定法；苯巴比妥片劑選用測(cè)定原料藥的銀量法；維

9、生素C制劑含量測(cè)定選用原料藥的碘量法；對(duì)氨基水楊酸鈉制劑選用原料藥的亞硝酸鈉法永停法指示終點(diǎn)測(cè)定含量；右旋糖酐鐵片劑與原料藥一樣采用高錳酸鉀法測(cè)定含量；,（二）儀器分析法 《中國(guó)藥典》2010年版（二部）中制劑與原料藥的含量測(cè)定選用同一種儀器分析法的藥物很多。如酞丁安制劑、水楊酸鎂制劑用UV法中的對(duì)照品比較法測(cè)定含量，與原料藥一致；柳氮磺吡啶制劑、維生素B2制劑還是采用與其原料藥一致的吸收系數(shù)法測(cè)定含量；維生素A膠丸、維生

10、素AD膠丸、維生素AD 制劑中維生素A 的含量測(cè)定與原料藥一樣，均用三點(diǎn)校正法測(cè)定。、頭孢菌素類、青霉素類和維生素B6的制劑與原料藥相同，均采用HPLC法測(cè)定含量；維生素E制劑與原料藥一樣選用GC法測(cè)定含量。,（三）其他分析法 ，如注射用順鉑、磺溴酞鈉中注射液的含量測(cè)定與其原料藥均選用重量法；撲米酮片劑的含量測(cè)定與原料藥均選用氮測(cè)定法；當(dāng)原料藥未收載含量測(cè)定法時(shí)，其制劑可選用特有的物理性質(zhì)進(jìn)行測(cè)定。如谷氨酸鈉（鉀）的含量測(cè)定、右旋糖酐2

11、0（40、70）的含量測(cè)定選用旋光度測(cè)定法。三、共存成分有干擾時(shí)常用的含量測(cè)定方法 當(dāng)制劑的共存成分對(duì)藥物的含量測(cè)定有干擾，不能沿用原料藥的含量測(cè)定方法時(shí)，則應(yīng)另選合適的測(cè)定方法，以消除共存成分的干擾。其主要方法有：,第四節(jié) 藥物的含量計(jì)算,一、原料藥的含量計(jì)算：（一）計(jì)算公式 原料（%）=測(cè)得重（g）/供試品重（ g） ×100% = mx/ ms ×

12、100%式中 mx 供試品的測(cè)得量，g； ms 供試品的質(zhì)量，g。原料藥的含量計(jì)算公式因所用方法不同而有區(qū)別。,（一）離子對(duì)雙相滴定法：《中國(guó)藥典》2010年版（二部）中鹽酸胺碘酮、鹽酸苯海索、鹽酸氯丙鈉林、聯(lián)芐唑和硝酸益康唑等5種藥物的制劑輔料對(duì)非水溶液滴定法測(cè)定含量有干擾，改用離子對(duì)雙相滴定法。（二）輔料無吸收、主藥有特征吸收的制劑選用UV法： UV法具有一定的專屬性

13、，其準(zhǔn)確度和精密度均較高。當(dāng)制劑測(cè)定不能選用原料藥的化學(xué)測(cè)定方法，而該藥物在紫外光區(qū)又有特征吸收時(shí)，則首選UV法。（三）在紫外-可見區(qū)沒有特征吸收峰的可選用HPLC法，對(duì)制劑中主藥含量很少，又容易產(chǎn)生降解物，分離困難的品種，可選用HPLC法。先用色譜法進(jìn)行分離，然后再進(jìn)行測(cè)定?！吨袊?guó)藥典》2010年版（二部）中大量采用HPLC法測(cè)定制劑的含量，部分制劑應(yīng)用二元梯度洗脫法，可同時(shí)測(cè)定樣品中的多種成分，達(dá)到整體控制藥品質(zhì)量的目的。,（二）

14、　容量分析法 １.直接滴定法 原料（%）= TVF/ ms ×100% F= C實(shí)測(cè)濃度（mol/l）/ C規(guī)定濃度（mol/l） 式中 T 滴定度 V 滴定液的體積，ml ms 供試品的質(zhì)量 F 所用滴定液的濃度與藥典規(guī)定不同時(shí)的校正系數(shù) 例題１ 非那西丁含量測(cè)定：精密稱取本品０.3630

15、g加稀鹽酸 回流１h后，放冷，用亞硝酸鈉液（０.1010mol/L)滴定，用去２０.00ml。每1ml亞硝酸鈉液（0.1mol/L)相當(dāng)于17.92mg的C10H13O2N。計(jì)算非那西丁的百分含量。,２、剩余滴定法 原料（%）= T (V0-V) F/ ms X100%　　或 原料（%）= T (V-V0) F /ms X100% 例題２　尼可剎米的含量測(cè)定：精密稱取本品０．１

16、５１１g，加冰醋酸10ml與結(jié)晶紫指示液１滴，用高氯酸滴定液（0.1026 mol/L)滴定，至溶液顯藍(lán)綠色，消耗高氯酸滴定液8.31ml；并將 結(jié)果用空白實(shí)驗(yàn)校正，空白實(shí)驗(yàn)消耗高氯酸滴定液0.05ml。每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L)相當(dāng)于17.82mg的C10H14N2O。計(jì)算尼可剎米的含量。,（三）紫外－可見分光光度法1.對(duì)照品比較法原料(%) =[CR（Ax /AR ）D V ]/ms X100%式中

17、 CR 對(duì)照品溶液的濃度； AX 供試品溶液的吸光度； AR 對(duì)照品溶液的吸光度； D 稀釋倍數(shù) V 溶液體積,2、吸收系數(shù)法 原料（%） =[ A*1% /（E* L ）] D V/ ms ×100% 式中 A 吸光度 E 吸收系數(shù) L 液層厚度，1cm 例題４ 卡比馬唑的含量測(cè)

18、定：精密稱取本品0.0512g，置 500ml的容量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取 10.0ml，置100ml的容量瓶中，加鹽酸溶液（9→1000） 10ml， 用水稀釋至刻度，搖勻，照紫外-可見分光光度法，在292nm波長(zhǎng)處測(cè)得吸光度為0.555，按C7H10N2O2S的吸收系數(shù)（E)為557，計(jì)算卡比馬唑的含量。,(四) 色譜法 (GC法和HPLC法）１、內(nèi)標(biāo)法加校正因子法（1）系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 理論板數(shù)

19、 n=5.54×(tR/Wh/2)2 分離度 R=2(tR2-tR1) /（W1+W2） 校正因子 f=（As /Cs）/（AR /CR ）（２）　含量測(cè)定原料(%)= f （Cs*Ax/As）/Cx ×100%,例題５　按《中國(guó)藥典》2010年版（二部）的規(guī)定測(cè)維生素E，做系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)時(shí)的數(shù)據(jù)為： 物質(zhì) tR/min Wh/2/min W/

20、min 對(duì)照品 8.88 0.25 0.6 內(nèi)標(biāo)物 5.74 0.6 1.2 取維生素E對(duì)照品20.80mg(98.0%)，精密加入濃度為1.044mg/ml的內(nèi)標(biāo)物（正三十二烷）溶液 10.00ml溶解，?。眜l注入氣相色譜儀，對(duì)照峰面積為481763,內(nèi)標(biāo)物峰面積為238787,求維生素E的理論板數(shù)、

21、維生素E與內(nèi)標(biāo)物的分離度和校正因子各為少？再精密稱取維生素E供試品22.68mg,內(nèi)標(biāo)物28.00mg，用氣相色譜法測(cè)得供試品峰面積為529887，內(nèi)標(biāo)物峰面積為644911，計(jì)算供試品中維生素E的含量。,例題３　貝諾酯的含量測(cè)定：精密稱取本品0.07495g,置100ml容量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量1.0ml，置另一100ml容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，照紫外-可見分光光度法，在240n

22、m的波長(zhǎng)處測(cè)得吸光度為0.473；另取經(jīng)105℃干燥2h的貝諾酯對(duì)照品0.03667g,置100ml容瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1.0ml，置50ml容量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，測(cè)得吸光度為0.462，計(jì)算貝諾酯的含量。,2、外標(biāo)法 原料（%）=（CR Ax / AR ）Cx X100% 例題６　用高效液相色譜法外標(biāo)法測(cè)定頭孢拉定含量時(shí)，取頭孢拉定為94.1%和頭孢氨芐為2.3%的對(duì)照品35.

23、35mg溶解定容為50ml，取10ul注入高相色譜儀，測(cè)得頭孢拉定峰面積為13842558，頭孢氨芐的峰面積為354934；另稱取頭孢拉定供試品35.88mg，溶解定容為50ml，取10ul注入高相色譜儀，測(cè)得頭孢拉定峰面積為14158286，頭孢氨芐的峰面積為472368；按供試品的總量分別計(jì)算頭孢拉定和頭孢氨芐的百分含量。,3、面積歸一化法 A總=∑Ai=A1+A2+…+An ⅰ(%)=Ai / A總×100

24、% 例題7 用氣相色譜法檢查大豆油的脂肪酸組成，相應(yīng)于棕櫚酸、硬酯酸、油酸、亞油酸和亞麻酸的峰面積分別為129758、43286、296522、654868、92570，按峰面積歸一化法，計(jì)算上述脂肪酸的百分含量。,二、制劑的含量計(jì)算 制劑的含量按標(biāo)示百分含量表示，主要討論片劑和注射劑的含量測(cè)定。,標(biāo)示量（%） =實(shí)測(cè)含量/標(biāo)示量×100% =[測(cè)得量(g)/供試品重（g)] 

25、15;平均裝量/標(biāo)示量×100%（一） 片劑的含量計(jì)算片劑的含量限度按標(biāo)示量百分含量表示：標(biāo)示量（%） =每片實(shí)測(cè)含量/標(biāo)示量×100% =[測(cè)得量(g)/供試品重（g) ×平均片重（g/片）]/標(biāo)示量（g/片）×100% 注意：片劑的含量計(jì)算公式因所用的方法不同而有區(qū)別。計(jì)算式中各符號(hào)意義同原料藥。,（二）注射劑的含量計(jì)算注射劑的含量測(cè)定結(jié)果用標(biāo)示百分含量表示