棉鈴蟲對Bt毒素——Cry1Ac抗性的生化及分子機理研究.pdf

1、南京農(nóng)業(yè)大學博士學位論文棉鈴蟲對Bt毒素——Cry1Ac抗性的生化及分子機理研究姓名：許新軍申請學位級別：博士專業(yè)：農(nóng)業(yè)昆蟲與害蟲防治指導教師：吳益東20050601中：充隆了Cadherin類受體全長基因。敏感品系Cadherin類受體基因推測的氨基酸序列全長1730，與GenBank中已公布的美洲棉鈴蟲、煙芽夜蛾、印度谷螟、家蠶、煙草天蛾、歐洲玉米螟、紅鈴蟲及二化螟的相似性分別達到959％、83％、619％、615％、594％、58

2、3％、54％和537％。而抗性品系中Cadherin類受體基因在第1258位變異產(chǎn)生了一個提前的終止密碼子TAA，從而導致表達的受體蛋白大部分缺失，僅含有428個氨基酸殘基。采用抗性遺傳分析證明GYBT品系中Cadherin類受體基因的缺失與棉鈴蟲對CrylAc毒素抗性緊密連鎖。根據(jù)抗性和敏感品系中Cadherin類受體基因組DNA的差異，篩選出一對用于DNA水平上區(qū)分抗性、敏感個體的特異引物，對抗住和敏感品系F2后代進行基因型檢測，進

3、一步驗證了Cadherin受體缺失與抗性緊密相關(guān)。四、棉鈴蟲中腸受體與CrylAc毒素結(jié)合分析以同位素125I標記的毒素進行配基一受體結(jié)合試驗中發(fā)現(xiàn)，與敏感品系相比，抗性品系BBMV與CrylAc毒素的親合力略有下降，而受體位點濃度(Bmax)差異不顯著，引入Hill因子進行結(jié)合曲線擬合計算的結(jié)果表明毒素與棉鈴蟲BBMV的結(jié)合之間可能存在互作關(guān)系。用生物索標記的CrylAc毒素分別與敏感品系(GY)和抗性品系(GYBT)棉鈴蟲六齡幼蟲中

4、腸BBMV進行雜交試驗，發(fā)現(xiàn)除了85Kd的內(nèi)源性生物素結(jié)合蛋白外，在敏感品系的中腸BBMV中分別有210Kd、190Kd、160Kd及120Kd四個主要的結(jié)合條帶，而在抗性品系中210Kd及190Kd的條帶發(fā)生了缺失，據(jù)此推測210Kd的結(jié)合條帶即為抗性品系發(fā)生基因缺失的Cadherin類受體蛋白，而190Kd的結(jié)合蛋白可能是部分降解的或表達后修飾過的Cadherin類受體蛋白，160Kd和120Kd為APN類受體結(jié)合蛋白。在加入10倍