豬Sarlb基因的克隆、染色體定位、原核表達(dá)及其與部分性狀的關(guān)聯(lián)分析.pdf

1、Sar1(secretion-associatedandRas-related)在COPⅡ(coatproteincomplex)型有被小泡的被膜蛋白復(fù)合體的組裝過程中起著分子開關(guān)的調(diào)控作用。在人上研究發(fā)現(xiàn)Sar1b在調(diào)控細(xì)胞內(nèi)乳糜微粒從線粒體向高爾基體的轉(zhuǎn)運(yùn)起著重要作用，而且Sar1b基因內(nèi)部堿基的突變與一些脂肪吸收紊亂癥相關(guān)。該研究將其作為影響豬脂肪沉積的候選基因進(jìn)行研究，通過對其克隆、染色體定位、組織表達(dá)譜分析、原核表達(dá)、多態(tài)位點(diǎn)

2、檢測及其與性狀的關(guān)聯(lián)分析，為進(jìn)一步研究該基因影響豬脂肪沉積的作用打下基礎(chǔ)，并為其將來應(yīng)用于分子標(biāo)記輔助選擇育種提供分子遺傳基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下： 1.依據(jù)人Sar1b基因cDNA信息，通過由生物信息學(xué)及比較基因組學(xué)的策略獲得的豬EST重疊群設(shè)計的豬特異引物克隆出豬Sar1b基因cDNA編碼區(qū)全長序列，該序列與人和小鼠的相應(yīng)序列的同源性分別為93％和91％，已經(jīng)提交到GenBank，獲得的基因收錄號為AY819557。

3、2.利用體細(xì)胞雜交板對豬Sar1b基因進(jìn)行了染色體區(qū)域定位。將PCR分型數(shù)據(jù)提交到在線數(shù)據(jù)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，結(jié)果表明該基因被定位于豬2號染色體上，區(qū)域定位結(jié)果為SSC2(1/2q24)-q29(P=0.8696,相關(guān)系數(shù)為1，錯誤風(fēng)險值低于0.5％)。 3.利用輻射雜交板對豬Sar1b基因進(jìn)行了染色體精細(xì)定位。將PCR分型數(shù)據(jù)提交到在線數(shù)據(jù)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，結(jié)果表明該基因與IL4基因緊密連鎖(LOD=8.37)，并且緊密

4、連鎖的微衛(wèi)星標(biāo)記為SW1879(LOD=6.68)。 4.以鄂西黑豬的肝、小腸、胃、心、肺、脾、肌肉及脂肪組織為材料，利用半定量RT-PCR檢測了豬Sar1b基因的組織表達(dá)譜，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該基因在上述八個組織中均表達(dá)，但在脂肪和肝臟中表達(dá)量相對較高。 5.構(gòu)建了豬Sar1b基因重組原核表達(dá)載體pET28a-Sar1b，利用SDS-PAGE及Western-blot檢測出該重組原核表達(dá)載體成功表達(dá)出了豬Sar1b蛋白。

5、 6.應(yīng)用PCR-SSCP的方法在分離的豬Sar1b基因的3’非翻譯區(qū)(UTR)中距離終止密碼子最后一個堿基為7bp的位置檢測了一個堿基缺失突變位點(diǎn)。分析了不同群體中這個堿基缺失突變位點(diǎn)的多態(tài)性，計算了這個位點(diǎn)的基因型和基因頻率，比較了各基因型在不同豬群的分布差異。 7.在研究中與通城縣畜牧局共同組建的試驗群體中的通城、大長通和長大通中檢測了Sar1b基因3’非翻譯區(qū)的缺失突變位點(diǎn)的多態(tài)性，利用SAS8.2中的廣義線型模型分析了