豬Toll樣受體9基因胞外區(qū)的克隆及其原核表達(dá).pdf

1、當(dāng)病原體入侵時(shí)，天然免疫是多細(xì)胞生物抵御病原體入侵，迅速控制感染的第一道防線(xiàn)。在脊椎動(dòng)物，參與這種早期免疫反應(yīng)的各種細(xì)胞和分子對(duì)其獲得性免疫的形成具有決定性作用。研究發(fā)現(xiàn)，哺乳動(dòng)物Toll受體家族屬于細(xì)胞因子受體或模式識(shí)別受體，能夠激活類(lèi)似但不完全相同的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，從而發(fā)揮天然免疫和獲得性免疫調(diào)節(jié)作用，以抵御外來(lái)微生物或寄生蟲(chóng)的感染。 本研究以植物血凝素(PHA)和脂多糖(LPS)共同刺激從豬脾臟和淋巴結(jié)分離的淋巴細(xì)胞，提取總

2、RNA，利用RT-PCR技術(shù)，在國(guó)內(nèi)首次以分段克隆法，克隆出豬TLR9基因胞外區(qū)、胞內(nèi)區(qū)序列，片段大小分別為1820bp、1700bp。通過(guò)序列分析所克隆的豬TLR9基因胞外區(qū)、胞內(nèi)區(qū)的核苷酸序列和氨基酸序列與GenBank上的登載的序列的同源性分別為98﹪和100﹪。然后，將具有識(shí)別抗原物質(zhì)功能與pGEX-4T-1連接后轉(zhuǎn)化大腸桿菌，經(jīng)酶切、PCR和測(cè)序鑒定后，用ITPG誘導(dǎo)表達(dá)，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE電泳進(jìn)行分析，結(jié)果表明，表達(dá)