鼠李糖乳桿菌肽聚糖對(duì)雞外周血單核細(xì)胞抗菌肽基因表達(dá)的影響及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑.pdf

1、抗菌肽是生物體天然免疫的重要成分，它們不僅具有廣譜抗菌作用，還可作為細(xì)胞間免疫效應(yīng)分子通過多重機(jī)制發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能和抗感染作用。防御素和Cathelicidins是動(dòng)物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的兩個(gè)主要抗菌肽家族，在維持機(jī)體抗感染方面發(fā)揮重要作用。鼠李糖乳桿菌是一種腸道益生菌，從中提取的細(xì)胞壁肽聚糖在鼠李糖乳桿菌發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用特別是促進(jìn)抗菌肽表達(dá)方面起重要作用。然而有關(guān)肽聚糖促進(jìn)抗菌肽的表達(dá)而提高機(jī)體天然免疫和獲得性免疫應(yīng)答能力的調(diào)控機(jī)制仍未完全闡明

2、。因此，本試驗(yàn)研究不同劑量的鼠李糖乳桿菌肽聚糖對(duì)雞外周血單核細(xì)胞中抗菌肽B-防御素9（β-defensin9，AvBD9）和Cathelicidin-B1(Cath-B1)基因表達(dá)的影響，并確定其最佳刺激濃度。同時(shí)，采用熒光定量PCR的方法檢測(cè)肽聚糖促進(jìn)抗菌肽表達(dá)對(duì)可能相關(guān)受體基因表達(dá)的影響。此外，利用特異性抗Toll樣受體2(Toll-like receptor2，TLR2)抗體封閉、特異性抑制劑抑制相關(guān)分子等方法進(jìn)一步探討鼠李糖乳桿

3、菌肽聚糖調(diào)控AvBD9、Cath-B1基因表達(dá)的可能信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。試驗(yàn)結(jié)果如下：
　　(1)不同濃度的鼠李糖乳桿菌細(xì)胞壁完整肽聚糖均能不同程度的促進(jìn)雞外周血單核細(xì)胞內(nèi)AvBD9、Cath-B1基因的表達(dá)。且我們發(fā)現(xiàn)促進(jìn)AvBD9基因表達(dá)的最佳刺激濃度為200μg/ml，促進(jìn)Cath-B1基因表達(dá)的最佳濃度為150μg/ml。
　　(2)200μg/ml鼠李糖乳桿菌肽聚糖可促進(jìn)雞外周血單核細(xì)胞TLR2以及NOD樣受體l(NOD

4、l)、NALP3的表達(dá)，且NOD1的表達(dá)量極顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)。
　　(3)使用抗體封閉TLR2以及用抑制劑抑制NOD1后，與肽聚糖組相比，AvBD9和Cath-B1 mRNA的表達(dá)水平均顯著下降。且用Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，TLR2抗體和NOD1抑制劑預(yù)處理后NF-κBd p65、 P38、JNK蛋白的磷酸化與非磷酸化的比值顯著下降(P＜0.05)。
　　(4)使用NF-κB特異性抑制劑PDTC， J

5、NK MAPK特異性抑制劑SP600125，p38 MAPK特異性抑制劑SB203580，ERKl/2 MAPK特異性抑制劑SCH772984預(yù)處理雞外周血單核細(xì)胞后，PDTC、SB203580、SP600125均不同程度的降低鼠李糖乳桿菌肽聚糖誘導(dǎo)的AvBD9、Cath-B1基因的表達(dá)，且PDTC抑制AvBD9、Cath-B1基因表達(dá)的幅度顯著高于SB203580、SP600125。而SCH772984預(yù)處理后，AvBD9、Cath-

6、B1基因的表達(dá)量反而不同程度的上調(diào)了。
　　綜上所述，鼠李糖乳桿菌完整肽聚糖可促進(jìn)雞外周血單核細(xì)胞中AvBD9、Cath-B1基因的表達(dá)，且對(duì)于不同的基因肽聚糖的最佳刺激濃度不同。鼠李糖乳桿菌肽聚糖可促進(jìn)細(xì)胞表面TLR2受體、胞內(nèi)NOD1、NALP3受體基因的表達(dá)，這表明肽聚糖促進(jìn)抗菌肽的表達(dá)可能是由TLR2或NOD1、NALP3介導(dǎo)。鼠李糖乳桿菌肽聚糖可通過TLR2或NOD1介導(dǎo)的NF-κB和MAPK信號(hào)途徑上調(diào)雞外周血單核細(xì)胞