肺癌患者外周血中Chemerin水平及對(duì)A549細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響.pdf

1、目的：Chemerin是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種類似于趨化因子的趨化蛋白，機(jī)體在正常狀態(tài)下由除外周血白細(xì)胞以外的各個(gè)組織產(chǎn)生的Chemerin是以其前體形式pro Chemerin分泌到細(xì)胞外的。Pro Chemerin活性很低，在中性粒細(xì)胞脫顆粒產(chǎn)生的蛋白水解酶的作用下去除碳末端的6個(gè)氨基酸后轉(zhuǎn)化為Chemerin的活性形式，活化的Chemerin能夠與其受體Chem R23結(jié)合并發(fā)揮對(duì)漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞(pDC)和巨噬細(xì)胞(M())的免疫趨

2、化作用。除免疫趨化作用外，Chemerin在脂肪細(xì)胞的合成和代謝方面也起到作用。前期研究我們通過(guò)消減雜交技術(shù)發(fā)現(xiàn)Chemerin的編碼基因TIG2是肺癌的差異表達(dá)基因，向原本不表達(dá)Chemerin的肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549轉(zhuǎn)染Chemerin的重組質(zhì)粒后，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)能力增強(qiáng)。最近的研究發(fā)現(xiàn)在許多腫瘤細(xì)胞中也存在著Chemerin的分泌及ChemR23的表達(dá)，提示Chemerin—ChemR23這一通路可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展直接相關(guān)。本實(shí)

3、驗(yàn)中我們將通過(guò)研究Chemerin在肺癌患者外周血中的表達(dá)以及其作用于肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549后對(duì)NF—κB、JNK信號(hào)通路的影響來(lái)進(jìn)一步探索Chemerin在肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。 方法：1、選取42例肺癌患者及31例健康體檢者分別作為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組，通過(guò)雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)兩組實(shí)驗(yàn)對(duì)象外周血中Chemerin的濃度，t檢驗(yàn)比較兩組間統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。將肺癌患者外周血中Chemerin的濃度與年齡、性別、病理類型、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)

4、移情況、UICC分期等臨床病理指標(biāo)進(jìn)行比較，應(yīng)用t檢驗(yàn)及單因素方差分析，得出結(jié)論。2、培養(yǎng)肺癌細(xì)胞系A(chǔ)549，取A549細(xì)胞分為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組，采用不同濃度的Chemerin(0.1、1、10nM)作用于實(shí)驗(yàn)組A549細(xì)胞。將Chemerin作用后的A549細(xì)胞裂解，通過(guò)免疫印跡(western blot)法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中A549細(xì)胞表達(dá)的磷酸化P65、JNK蛋白濃度(分別以非磷酸化P65、GAPDH為內(nèi)參)。采用單因素方差分析比

5、較各組間統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)果：42例肺癌患者外周血中Chemerin的濃度與31例健康體檢者外周血中Chemerin的濃度具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，肺癌患者外周血中Chemerin的濃度(1773.21±328.37pg/ml)顯著高于健康體檢者(1373.72±411.62pg/ml)，p<0.001。肺癌患者外周血中Chemerin濃度與各臨床病理指標(biāo)間均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，各p值均大于0.05。免疫印跡結(jié)果顯示，不同濃度的Chemeri

6、n作用后，磷酸化的P65、JNK蛋白表達(dá)量(分別以P65的非磷酸化形式、GAPDH作為內(nèi)參)隨著Chemerin濃度0nM、0.1nM、1nM、10nM遞增，P65的磷酸化比重增加，JNK的磷酸化程度降低。顯示Chemerin能夠濃度依賴性的導(dǎo)致P65的磷酸化比重增加，JNK的磷酸化程度降低。 結(jié)論：1、肺癌患者外周血中Chemerin濃度顯著高于正常人外周血中Chemerin濃度。2、肺癌患者外周血中Chemerin濃度與各臨