CD3ζRNAi重組質(zhì)粒的構(gòu)建及對T細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的作用研究.pdf

1、本研究采用設(shè)計(jì)的pSUPER-siCD59重組干擾載體，通過穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Jurkat細(xì)胞，探討CD59分子被特異性沉默前后對CD3分子介導(dǎo)的Jurkat細(xì)胞活化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的影響，檢測T細(xì)胞活化通路相關(guān)信號分子變化及T細(xì)胞的增殖狀況來證實(shí)CD59分子對于CD3分子介導(dǎo)的Jurkat細(xì)胞活化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是否存在協(xié)同作用。并且相關(guān)研究也顯示CD59單抗交聯(lián)可介導(dǎo)T細(xì)胞早期的活化信號，推測TCR-CD3復(fù)合體中CD3可將TCR識別的信號傳入T細(xì)胞

2、內(nèi)誘導(dǎo)活化，而對于沉默CD3ζ時CD59分子作為GPI錨蛋白是否仍能向胞內(nèi)傳遞信號，國內(nèi)外文獻(xiàn)尚未見報道。故本實(shí)驗(yàn)采用RNAi技術(shù)設(shè)計(jì)了針對CD3ζ的重組干擾載體，通過構(gòu)建CD3ζRNAi逆轉(zhuǎn)錄病毒載體來沉默細(xì)胞CD3ζ的表達(dá)，然后再次檢測活化過程中相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的變化，為后續(xù)研究CD59與CD3ζ在T細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的相互作用提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，亦為進(jìn)一步研究GPI類錨固蛋白參與T細(xì)胞活化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的機(jī)制提供新思路，將為臨床免疫缺陷