乳腺癌放射治療的臨床和實(shí)驗(yàn)研究

1、乳腺癌放射治療的臨床和實(shí)驗(yàn)研究,放射治療在乳腺癌治療中的作用,保乳手術(shù)后 根治術(shù)后 晚期及復(fù)發(fā)乳腺癌,存在的問(wèn)題,療程長(zhǎng)達(dá)5－6周化療與放療的銜接問(wèn)題,劑量分割研究的意義,減少照射的次數(shù)，縮短療程，方便患者優(yōu)化資源利用優(yōu)化放療與化療安排,,,,乳腺癌放射治療的特點(diǎn),術(shù)后亞臨床灶，腫瘤負(fù)荷低乳腺癌細(xì)胞的α/β值可能較低乳腺癌的Tpot較長(zhǎng)，約14天,,,,論文第一部分,乳腺癌根治術(shù)后放射治療的劑量分割方案的臨床研究,198

2、7年1月至1993年1月,,,術(shù)后放療應(yīng)用3種劑量分割方案,,乳腺癌根治術(shù)或改良根治術(shù)后 367例,入組條件,術(shù)后放療三種劑量分割方案,3個(gè)劑量分割方案組的臨床特點(diǎn)(1),3個(gè)劑量分割方案組的臨床特點(diǎn)（2）,3個(gè)劑量分割方案組的放療部位,結(jié)果,局部區(qū)域復(fù)發(fā)率（照射野內(nèi)）,Cox多因素回歸分析照射野內(nèi)復(fù)發(fā)的相關(guān)因素 腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移個(gè)數(shù)有顯著意義 （P＝ 0.0008） 年齡、劑量分割方法、病理類(lèi)型、 有無(wú)化療

3、均無(wú)顯著意義,,,5年無(wú)瘤生存率,正常組織放射反應(yīng),3個(gè)劑量分割方案的等效生物劑量(BED),討論,300 cGy/次組的特點(diǎn),隔日照射總的治療時(shí)間未縮短每周治療次數(shù)減少對(duì)患者和設(shè)備資源來(lái)說(shuō)都有利,,,,快速照射法的特點(diǎn),快速照射組的總劑量較低。 縮短了療程時(shí)間，為高危患者盡早開(kāi)始化療贏得了時(shí)間。 照射的次數(shù)比常規(guī)大大減少，減少了住院時(shí)間或門(mén)診放療的往返不便。,,,,結(jié) 論,300 cGy/次、隔日照射的方法

4、 與常規(guī)分割療效相似,,,快速照射法有待進(jìn)一步研究,,支持乳腺癌α/β值較低的觀點(diǎn),論文第二部分,亞臨床灶放射治療的　動(dòng)物模型研究,研究目的,應(yīng)用動(dòng)物模型比較亞臨床 灶放射治療的劑量分割方案,近交系BALB/C雌性小鼠小鼠乳腺癌EMT－6細(xì)胞株腫瘤體外的倍增時(shí)間12小時(shí),動(dòng)物模型,實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),腫瘤細(xì)胞接種腫瘤亞臨床灶生長(zhǎng)的病理觀察 實(shí)驗(yàn)分組, 不同方案照射觀察腫瘤形成率 、腫瘤控制率,EMT－6細(xì)胞接種,照

5、射的固定示意圖,照射的劑量分割方案,結(jié)果,腫瘤形成外觀圖及解剖圖,1. 亞臨床灶病理觀察 （1）,接種后第一天,接種后第二天,1. 亞臨床灶病理觀察（2）,接種后第三天,接種后第四天,1. 亞臨床灶病理觀察（3）,接種后第五天,接種后第六天,3.不同劑量分割方案的腫瘤形成率,,,,,各組腫瘤形成率兩兩比較的P值,,,,3.不同劑量分割方案的腫瘤控制率,,,,,各組腫瘤控制率兩兩比較的P值,,,,討論,小鼠亞臨床腫瘤照射的特點(diǎn),對(duì)照組可以

6、100%形成腫瘤幾乎不存在乏氧問(wèn)題腫瘤形成率和控制率作為終點(diǎn)指標(biāo)可靠、易于評(píng)價(jià),,,,臨床和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物快速照射的差距的原因分析,小鼠腫瘤細(xì)胞增殖明顯較快療程中休息一周，腫瘤加速再群體化,,,結(jié) 論,對(duì)于細(xì)胞倍增快的腫瘤而言加速超分割的療效最好,,,隔日照射和常規(guī)照射的療效相似,,快速照射療效最差,下一步的研究,多種腫瘤模型驗(yàn)證正常組織損傷的驗(yàn)證 　裸小鼠移植瘤 模型驗(yàn)證,,,,論文第三部分,CDK抑制劑Flavopi

7、ridol增加放射效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究,探討放射增敏的必要性,現(xiàn)代放射治療技術(shù)提高療效有限腫瘤的分子靶向研究進(jìn)展迅速,分子靶向藥物 Flavopiridol,新合成的黃酮類(lèi)生物堿 cdk1 (cdc2)、cdk2、cdk4、cdk7的強(qiáng)力抑制物 誘導(dǎo)G1期的阻滯 誘導(dǎo)凋亡 下調(diào)c-erbB2的表達(dá),,,,,,對(duì)上皮細(xì)胞系（前列腺、食管、肺、頭頸部癌有細(xì)胞毒作用。已進(jìn)行 I-II 期臨床試驗(yàn),分子靶向藥物 Fla

8、vopiridol,,,實(shí)驗(yàn)路線,藥物對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)的影響克隆形成實(shí)驗(yàn)：觀察放射增敏效應(yīng)觀察對(duì)細(xì)胞周期的影響彗星法測(cè)定DNA的初始損傷及修復(fù)Western blot：相關(guān)蛋白的表達(dá)變化,實(shí)驗(yàn)材料,腫瘤細(xì)胞：973肺腺癌細(xì)胞系Flavopiridol：用DMSO配成10mM原液 照射條件：6 MV X線,實(shí)驗(yàn)1.　對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響,75cm2培養(yǎng)瓶 每瓶細(xì)胞接種細(xì)胞數(shù)3×105個(gè) 貼壁后加入不同濃度的Flavopi

9、ridol 每天取各濃度的培養(yǎng)瓶，細(xì)胞消化，計(jì)數(shù)共計(jì)數(shù)5天,Flavopiridol對(duì)于生長(zhǎng)曲線的影響,實(shí)驗(yàn)2.　放射增敏效應(yīng)的研究,在培養(yǎng)瓶中接種細(xì)胞 24小時(shí)后加入Flavopiridol照射劑量0、1、2、3、5、7和10Gy 實(shí)驗(yàn)分組：對(duì)照組、單純藥物、單純照射、照射＋藥物，F(xiàn)lavopiridol濃度均為100 nM。14天后計(jì)數(shù)各組的克隆形成繪制細(xì)胞存活曲線,細(xì)胞存活曲線,1 單純照射,2 照射＋flavopi

10、ridol,1,2,Flavopiridol對(duì)放射敏感性的影響,實(shí)驗(yàn)3. 對(duì)細(xì)胞周期的影響,實(shí)驗(yàn)分組：　1. 單純照射　2. 單純藥物　3. 照射加藥物照射后12小時(shí)收集細(xì)胞 流式細(xì)胞儀檢測(cè),,,對(duì)照組,4Gy 照射后12小時(shí),Flavopiridol 200nM + 4Gy照射后12小時(shí),Flavopiridol 400nM + 4Gy照射后12小時(shí),Flavopiridol和照射對(duì)于G2期的影響,實(shí)驗(yàn)4.　慧星法

11、檢測(cè)DNA損傷,實(shí)驗(yàn)分組：　1. 對(duì)照　2. 單純照射 6 Gy　3. 單純藥物 200 nM　4. 照射加藥物照射后不同時(shí)間行彗星法檢測(cè) 慧星的尾力距（Tail Moment, TM）為DNA損傷指標(biāo),Flavopiridol和照射對(duì)于DNA初始損傷的影響,對(duì)照組,單純照射,Flavo加照射,圖示：慧星法檢測(cè)的結(jié)果,Flavo對(duì)于照射后DNA損傷修復(fù)的影響,實(shí)驗(yàn)5.　相關(guān)蛋白測(cè)定,實(shí)驗(yàn)分組：　1. 單純照射 4Gy　

12、2. 單純藥物 200nM　3. 照射加藥物 4. 對(duì)照,實(shí)驗(yàn)5.　相關(guān)蛋白測(cè)定,照射后12小時(shí)提取總蛋白Western blot測(cè)定:　 Tyr 15 cdc2 c-erbB2βactin作為內(nèi)對(duì)照,照射 藥物　照射+藥物　對(duì)照,Tyr 15 cdc2,c-erbB2,βactin,結(jié) 論,Flavopiridol具有放射增敏作用,,去除照射引起的G2期阻滯，　降低照射后tyr15