版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、親 和 層 析Affinity Chromatography,一、原理,親和層析是利用生物大分子所具有的專一親和力而設(shè)計的純化技術(shù) 尋找配基配基固定化制成親和層析柱,基本過程,固相化,,,,吸附,解吸,,載體,,,,酶: 基質(zhì)類似物,抑制劑,輔酶抗體: 抗原,病毒,細胞細胞: 細胞表面特異蛋白,外源凝集素核酸: 互補堿基序列,組蛋白,核酸聚
2、合酶 激素或藥物: 受體,載體蛋白外源凝集素: 多糖,糖蛋白,細胞表面受體,細胞,常見具有專一性親和力的生物分子對:,(一) 載體的選擇,1、載體要求:(1)不溶性(2)滲透性:疏松網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),有良好的液 體流動性(3)化學(xué)和機械性能穩(wěn)定(4)具備大量能被活化的基因(5)抗微生物和酶的侵蝕,2、常用載體(1)纖維素 特點:價廉、來源充足 纖維性、非均一性限制大分子
3、的摻入 非專一性吸附嚴重 用于抗體和酶的純化,(2)葡聚糖凝膠特點: 化學(xué)及物理性質(zhì)穩(wěn)定 多孔性比瓊脂糖低,(3)瓊脂糖凝膠,濃度 商品2% Sepharose 2B 4% Sepharose 4B 6% Sepharose 6B,凝膠濃度越低結(jié)構(gòu)越疏松機械強度越低,(4)聚丙烯酰胺凝膠,(5)多孔玻璃特點:不受微生物的侵蝕
4、 耐酸、堿、有機溶劑 表面非專一性吸附,特點:物理化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定 抗微生物侵蝕能力比瓊脂糖強 可供化學(xué)反應(yīng)的酰胺基較多,(二)配基的選擇,1、對于欲純化的物質(zhì)應(yīng)有專一親和力2、必須具備能被修飾的功能基團,以酶和底物為例:,E+L ELKL =[E][L]/[EL]=[E0-EL][L0-EL]/[EL]E0、L0:起始濃度當L0》E
5、0時KL =[E0-EL][L0]/[EL][EL]=[E0-EL][L0]/ KLKd=結(jié)合酶/游離酶=[EL]/[E0-EL]=[L0]/ KL,,KL,,KL:解離常數(shù) E: 酶 L: 底物EL:復(fù)合物,(三)固相化——將配體以共價鍵連接于固相基質(zhì)上制成固相化吸附劑,載體的排斥效應(yīng)載體的空間障礙,二、親和層析分離,1、裝柱和平衡2、上樣、親和吸附3、洗脫,,,,,,,無效洗脫,吸附效率不高,有效吸附,,,,,,
6、,洗脫方法(1)非特異性洗脫:改變洗脫液pH值離子強度梯度洗脫(2)特殊洗脫:當?shù)鞍孜骄o密或上述方法洗脫會引起失活,可用專一的化學(xué)方法裂解配基與載體的連接鍵,再用透析或凝膠層析法去除配基。 斷鍵方法:硫酯鍵、偶氮鍵、二硫鍵(3)專一性洗脫,已使用過和柱,經(jīng)過再生處理,去除非特異吸附的雜質(zhì)后,可重復(fù)使用 再生步驟:起始緩沖液重復(fù)平衡一次用高離子強度和低離子強度溶液處理用弱酸或弱堿溶液處理,4、親和柱的再生:
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 親和層析
- a蛋白親和層析法純化單克隆抗體
- 親和層析法純化胰蛋白酶
- 溶葡萄球菌酶親和層析研究.pdf
- 尿激酶的親和層析分離研究.pdf
- 親和層析法純化磷酸激酶的研究.pdf
- 以殼聚糖為載體親和層析胰蛋白酶.pdf
- 反射模式時域熒光分子層析原理的模擬和實驗研究.pdf
- 谷胱甘肽親和層析介質(zhì)制備及其對蛋白的純化.pdf
- 免疫親和層析法分離水中藻類毒素的初步探索.pdf
- 親和層析法分離、純化油茶籽多糖Ⅰ及其單糖組分的測定.pdf
- 親和層析介質(zhì)的制備及其對家蠅GABA受體的分離純化.pdf
- 16334.酵母gs115中鎳柱親和層析結(jié)合蛋白的鑒定
- 49953.金屬螯合親和層析純化玉米sod及其修飾與固定化
- 人肺癌相關(guān)抗原單克隆抗體的制備及其識別抗原的親和層析純化.pdf
- 殼聚糖載體在酶法測定和親和層析中的應(yīng)用研究.pdf
- 親和層析-酶聯(lián)免疫吸附法檢測β-,2--興奮劑的研究.pdf
- 三角梅核糖體失活蛋白的親和層析法分離研究.pdf
- Allo-A Sepharose 4B親和層析分離血清糖缺失轉(zhuǎn)鐵蛋白.pdf
- 豬肺炎支原體膜蛋白免疫親和層析及ELISA檢測方法的建立.pdf
評論
0/150
提交評論