以殼聚糖為載體親和層析胰蛋白酶.pdf

1、胰蛋白酶屬于內(nèi)切酶，專一水解精氨酸、賴氨酸羧基參與形成的肽鍵、酰胺鍵和酯鍵，應(yīng)用廣泛，經(jīng)濟(jì)價(jià)值高。本研究的目的是制備一種廉價(jià)的親和吸附劑用于胰蛋白酶純化，研究親和吸附劑制備工藝及純化胰蛋白酶的操作條件，并研究純化后胰蛋白酶的性質(zhì)。 提出一種親和吸附劑的制備工藝，這種親和吸附劑以殼聚糖為載體，雞卵類粘蛋白為配基。用鹽析的方法從雞蛋清中提取雞卵類粘蛋白，用離子交換層析進(jìn)行純化。將殼聚糖以簡單易行的凝結(jié)法制備殼聚糖微球，然后與雞卵類粘

2、蛋白交聯(lián)制備親和吸附劑。以殼聚糖為載體的親和吸附劑制備過程，與常用的以瓊脂糖為載體的制備過程相比較，更加簡單，安全。 對(duì)親和吸附劑的制備工藝條件進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：在4℃、pH3.5條件下鹽析雞卵類粘蛋白，收率最高，約為16.8％；使用4％NaOH、30％乙醇的水溶液作為凝結(jié)液，可有效制備大量殼聚糖微球；配基與活化后的載體交聯(lián)1h，達(dá)到飽和，交聯(lián)結(jié)果為1g殼聚糖對(duì)雞卵類粘蛋白的偶聯(lián)量為60mg，相應(yīng)地，對(duì)胰蛋白酶的吸附能力為1

3、18U，交聯(lián)后雞卵類粘蛋白的活性回收率為70％。 對(duì)所制備的親和吸附劑的性質(zhì)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：固定化后，配基的最適溫度大大提高，從游離時(shí)的30~C升高到55℃；固定化配基的最適pH上升了0.8，從5.4升到6.2。固定化配基在70℃下保溫2.5h，活性穩(wěn)定，略有升高。制得的親和吸附劑可重復(fù)使用，有較好的機(jī)械強(qiáng)度。 以粗胰酶為原料，采用硫酸銨分級(jí)沉淀和親和層析兩步操作，分離胰蛋白酶。采用30-70[％]飽和度的硫酸銨分