生物電鏡在肝病研究中的應(yīng)用

1、生物電鏡在肝病研究中的應(yīng)用(白求恩醫(yī)學(xué)院臨床七年四班孟慶東70100447)摘要電子顯徽術(shù)已成為研究生命和人類(lèi)疾病的重要手段。本文對(duì)電子顯微術(shù)在肝病研究領(lǐng)域中的應(yīng)用情況作了綜述著重介紹了在肝病臨床診斷、肝炎的研究、多種理化因素對(duì)肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響中所做的貢獻(xiàn)。本文通過(guò)查閱多種文獻(xiàn)資料，對(duì)電鏡技術(shù)在肝臟病變研究中的作用進(jìn)行綜述。關(guān)鍵詞：生物電鏡；肝病研究；超微結(jié)構(gòu)一.前言從20世紀(jì)30年代開(kāi)始，隨著電子顯微技術(shù)的問(wèn)世，人們能在原子的尺度

2、上觀察研究物質(zhì)的結(jié)構(gòu)，使人們的對(duì)物體的觀察由宏觀世界進(jìn)入了原子級(jí)的微觀世界。目前的電鏡種類(lèi)很多，有透射電鏡(TEM)、掃描電鏡(SEM)、掃描隧道電鏡、原子力電鏡等，但應(yīng)用于臨床病理診斷中的主要是透射電鏡和掃描電鏡。前者注重組織核細(xì)胞內(nèi)的超微結(jié)構(gòu)，后者則用于觀察組織和細(xì)胞內(nèi)的表面形貌。經(jīng)過(guò)80余年的發(fā)展，電子顯微鏡技術(shù)已成為醫(yī)學(xué)科學(xué)領(lǐng)域內(nèi)不可缺少的研究手段及工具，對(duì)醫(yī)學(xué)科學(xué)研究起著重要作用。臨床病理診斷為最終診斷，目前電鏡診斷技術(shù)已廣泛

3、應(yīng)用于現(xiàn)代臨床病理診斷中，特別是在傳統(tǒng)的臨床診斷手段無(wú)法確診的病例，電子顯微鏡發(fā)揮著重大作用。二.生物電鏡在肝病診斷中的應(yīng)用隨著電鏡技術(shù)的發(fā)展，以前無(wú)法明確通過(guò)病人表征或光鏡診斷和辨別的疾病已經(jīng)可以在電鏡下一覽無(wú)余，電鏡技術(shù)為一些難以確診的疾病提供了豐富的科學(xué)依據(jù)，為醫(yī)學(xué)的進(jìn)步和發(fā)展做出了巨大貢獻(xiàn)。下面本文主要介紹Gilbert綜合征、糖尿病(DM)、肝豆?fàn)詈俗冃曰顧z組織中肝臟超微結(jié)構(gòu)的改變。（1）Gilbert綜合征Gilbert綜合

4、征的肝組織表現(xiàn)不一。某些肝活檢標(biāo)本，可發(fā)現(xiàn)血竇面肝細(xì)胞膜改變，細(xì)胞表面變平滑、微絨毛消失，Disse間隙膠原纖維增加；某些患者，可出現(xiàn)巨大線粒體，常含有增多，副晶格樣包涵體、較明顯的基質(zhì)致密顆粒。肝細(xì)胞常見(jiàn)脂褐素顆粒多分布于毛細(xì)膽管周?chē)渭?xì)胞內(nèi)，可單獨(dú)出現(xiàn)或伴隨其他改變。Gilbert綜合征的色素顆粒大小不等，卵圓形或不規(guī)則形并含有電子致密塊狀顆粒，與電子密度略低的聚集物以及脂滴互相混雜。這些溶酶體顆粒的基質(zhì)由細(xì)小的、弱嗜鋨性的顆粒組成

5、。少數(shù)顆粒類(lèi)似DubinJohnson綜合征的顆粒，但顆粒較小，缺少致密核芯結(jié)構(gòu)。Gilbert綜合征需與其他遺傳性高膽紅素血癥鑒別，如CriglerNajjar綜合征、DubinJohnson綜合征和Rot綜合征。CriglerNajjar綜合征的超微結(jié)構(gòu)改變中肝細(xì)胞缺少脂褐素、Kupffer細(xì)胞有膽色素沉積，DubinJohnson綜合征有特殊的含致密核芯結(jié)構(gòu)的溶酶體，Rot綜合征除含雙色調(diào)溶酶體外，還可出現(xiàn)毛細(xì)膽管發(fā)育不良等表現(xiàn)，

6、可資鑒別。此外，還應(yīng)排除溶血性黃疸，特別是遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥，可通過(guò)掃描電鏡檢查紅細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行確診。有時(shí)Gilbert綜合征還可合并遺傳性球形紅細(xì)胞增多癥，更要注意鑒別診斷。對(duì)于急、慢性肝炎后出現(xiàn)的肝炎后高膽紅素血癥，尤其是非結(jié)合膽紅素持續(xù)或反復(fù)增高的病例應(yīng)注意有無(wú)Gilbert綜合征的背景[1，2]。（2）糖尿病RER脫顆粒在血脂高的DM組更明顯這種病變導(dǎo)致脂蛋白合成障礙內(nèi)質(zhì)網(wǎng)合成甘油三酯貯積增加。與臨床上DM患者常合并脂代謝異常

7、特別是高甘油三酯血癥和脂肪肝相(2)乙型肝炎40例慢性乙型肝炎患者，血清HBVDNA水平和肝組織某些超微結(jié)構(gòu)損傷（線粒體腫脹、溶酶體增多、匯管區(qū)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、Kupffe細(xì)胞增生、肝細(xì)胞淤膽和間質(zhì)纖維組織增生）呈正相關(guān)，但不呈直線相關(guān)（r=0.21，t=1.12，P0.05）；血清HBVDNA水平和肝組織某些超微結(jié)構(gòu)損傷（內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增生擴(kuò)張、高爾基體擴(kuò)張、貯脂細(xì)胞增生、毛細(xì)膽管擴(kuò)張淤膽、毛細(xì)血管增生）無(wú)相關(guān)性（P0.05）。血清HBVDNA

8、定量PCR法可真實(shí)反映乙型肝炎病毒感染、復(fù)制及病程變化。在臨床上動(dòng)態(tài)檢測(cè)慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA含量，有利于動(dòng)態(tài)了解其肝組織某些超微結(jié)構(gòu)損傷（線粒體腫脹、溶酶體增多、匯管區(qū)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、Kupffe細(xì)胞增生、肝細(xì)胞淤膽和間質(zhì)纖維組織增生）變化；但是同時(shí)也提示：不能夠通過(guò)此法動(dòng)態(tài)了解其肝組織另外一些超微結(jié)構(gòu)損傷（內(nèi)質(zhì)網(wǎng)增生擴(kuò)張、高爾基體擴(kuò)張、貯脂細(xì)胞增生、毛細(xì)膽管擴(kuò)張淤膽、毛細(xì)血管增生）。由于乙型肝炎患者血清HBVDNA水平和肝組

9、織某些超微結(jié)構(gòu)損傷（線粒體腫脹、溶酶體增多、匯管區(qū)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、Kupffe細(xì)胞增生、肝細(xì)胞淤膽和間質(zhì)纖維組織增生）不呈直線相關(guān)，所以不能通過(guò)慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA含量水平來(lái)妄加推測(cè)其肝組織某些超微結(jié)構(gòu)損傷（線粒體腫脹、溶酶體增多、匯管區(qū)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、Kupffe細(xì)胞增生、肝細(xì)胞淤膽和間質(zhì)纖維組織增生）的具體水平。HBVDNA是病毒復(fù)制和傳染性的直接標(biāo)志。HBVDNA含量水平測(cè)定對(duì)于判斷乙型肝炎病毒復(fù)制程度、傳染性大小，抗病毒

10、藥物療效，病情變化和預(yù)后，為調(diào)整抗病毒藥物劑量、確定療程，可以提供可靠依據(jù)[8910]。（3）輸血后丙型肝炎過(guò)去大多認(rèn)為肝細(xì)胞的改變均具有非特異性，與慢性乙型肝炎肝組織的改變幾乎相似且無(wú)明顯鑒別特征。本材料所見(jiàn)肝細(xì)胞間隙增寬，胞質(zhì)密度降低，肝細(xì)胞內(nèi)線粒體縮小，形態(tài)異常。PTHC超微結(jié)構(gòu)可見(jiàn)狄氏腔炎細(xì)胞浸潤(rùn)，肝細(xì)胞腔隙有膠原沉積，儲(chǔ)脂細(xì)胞多見(jiàn)。大量的浸潤(rùn)細(xì)胞將產(chǎn)生大量的淋巴因子，促使膠原增生對(duì)肝細(xì)胞產(chǎn)生毒性，從而引起肝損傷并導(dǎo)致炎癥慢性化

11、及纖維化。HCV免疫組化和原位雜交顯示多數(shù)肝小葉呈陰性反應(yīng)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量減少，多成散在性分布；HCVRNA多存在于肝小葉的肝細(xì)胞，并可見(jiàn)枯否氏細(xì)胞，單核細(xì)胞，竇襞內(nèi)皮細(xì)胞，及膽管上皮細(xì)胞。由于HCV的感染水平很低，感染人群血液循環(huán)中的HCVRNA含量波動(dòng)是一般的免疫組化和原位雜交很難檢測(cè)出來(lái)的，但低含量HCVRNA水平即能引起HCV感染[11]。四多種理化因素對(duì)肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響現(xiàn)代社會(huì)中環(huán)境污染日趨嚴(yán)重，各種微波、次聲波和有害氣體充

12、釋在我們身邊，因此，研究微波輻射、次聲波、二氧化硫等對(duì)肝細(xì)胞的影響對(duì)公民健康具有重要意義，下面本文將在這方面進(jìn)行概述。（1）林蛙油營(yíng)養(yǎng)液對(duì)微波輻射的保護(hù)作用林蛙油是地道的東北特產(chǎn)含有多種氨基酸、無(wú)機(jī)元素、維生素和多種復(fù)合多肽等生物活性因子可以提高機(jī)體免疫力功能和抗應(yīng)激能力并能明顯提高巨噬細(xì)胞的吞噬率和吞噬指數(shù)清除自由基增強(qiáng)機(jī)體非特異性免疫功能和體液免疫功能。己糖激酶廣泛存在于以糖為能源的肝細(xì)胞內(nèi)是單糖氧化成能量被人體吸收利用的第一個(gè)關(guān)鍵

13、酶當(dāng)肝臟受到損傷時(shí)該酶隨之下降。從實(shí)驗(yàn)中可以看出C組損傷最為嚴(yán)重超微結(jié)構(gòu)變化主要表現(xiàn)在肝竇明顯出血肝內(nèi)脂肪滴較多可見(jiàn)髓樣小體血清中C組己糖激酶活性也明顯低于空白對(duì)照組(A組)和林蛙油營(yíng)養(yǎng)液超重輻射林蛙油營(yíng)養(yǎng)液組(F組)超微結(jié)構(gòu)變化與酶的變化基本一致。給予林蛙油營(yíng)養(yǎng)液可使肝組織損害有所改善但與損害因素前和損害因素后給予無(wú)明顯關(guān)系(超微結(jié)構(gòu)和酶的變化D組與E組均相差不大)。F組線粒體多、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)豐富特別是糖原顆粒增多同時(shí)F組的己糖激酶水平