轉(zhuǎn)化生長因子β亞型及其受體在人類系膜增生性腎小球腎炎各期病變表達(dá)

1、轉(zhuǎn)化生長因子β亞型及其受體在人類系膜增生性腎小球腎炎各期病變表達(dá)的研究20110915魏林王海燕鄒萬忠章友康鄂潔【摘要】目的研究人系膜增生性腎小球腎炎(MsPGN)病變進(jìn)展過程中轉(zhuǎn)化生長因子β(TGFβ)各亞型及其受體的變化。方法應(yīng)用免疫酶染色技術(shù)，檢測人輕度MsPGN、中度MsPGN及重度MsPGN時(shí)，腎組織中TGFβ各亞型及其受體及細(xì)胞外基質(zhì)成分(Ⅳ型膠原、纖粘連蛋白、層粘連蛋白及Ⅲ型膠原)的表達(dá)情況。結(jié)果在輕度MsPGN時(shí)，腎小球

2、中無TGFβ1、β2、β3及其受體(TβRI)的表達(dá)。中、重度MsPGN時(shí)，上述TGFβ各亞型及其受體在腎小球中表達(dá)并增加。同時(shí)腎小球中細(xì)胞外基質(zhì)各成分的含量也顯著增加。結(jié)論TGFβ各亞型及其受體均參與了人MsPGN時(shí)腎小球內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)的過度聚積?！娟P(guān)鍵詞】轉(zhuǎn)化生長因子β腎小球腎炎，膜增生性細(xì)胞外基質(zhì)Expressionoftransfminggrowthfactβisofmsreceptinhumanmesangialprolifer

3、ativeglomerulonephritisWeiLinWangHaiyanZouWanzhongetal.TheFirstHospitalBeijingMedicalUniversityBeijing100034【Abstract】ObjectiveToobservetheroleoftransfminggrowthfact(TGF)βisofmstheirreceptinthedevelopmentofhumanmesengial

4、proliferativeglomerulonephritis(MsPGN).MethodsImmunohistochemicalstaining(LAB)methodwasusedtodetecttheexpressionofTGFβisofms(TGFβ1β2β3)typeⅠrecept(TβRI)depositionofcollagenⅣcollagenⅢfibronectinlaminin.ResultsInmildMsPGNg

5、roupglomerulishowednoimmunostainingfallthreeTGFβisofmsTβRIbutTGFβ1expressedalittleininterstitiumTGFβ2β3TβRIalsoalittleinrenaltubules.InmoderatesevereMsPGNgroupshoweverTGFβ1β2β3TβRIemergedincreasedinglomeruli.Meanwhileglo

6、merulardepositionoffourmatrixcomponents(collagenⅣcollagenⅢfibronectinlaminin)wasalsosignificantlyincreasedwiththeprogressionofMsPGNrevealingacloserelationshipbetweentheincreasedexpressionofallthethreeTGFβisofmsseverityof

7、thedisease.TheexpressionofTGFβ1ininterstitiumTGFβ2β3TβRIinrenaltubuleswasalsoincreased.ConclusionIncreasedexpressionofallthethreeTGFβisofmsTβRIisassociatedwithpathologicalaccumulationofextracellularmatrixinMsPGN.【Keywds】

8、TransfminggrowthfactbetaGlomerulonephritismembranoproliferativeExtracellularmatrix系膜增生性腎小球腎炎(mesangialproliferativeglomerulonephritisMsPGN)是我國最常見的腎小球疾病，約占原發(fā)性腎小球疾病的50%。其病理改變?yōu)橄的ぜ?xì)胞增生及系膜基質(zhì)聚積和擴(kuò)張。而系膜基質(zhì)的過度聚積最終導(dǎo)致腎小球硬化和腎功能衰竭。研究發(fā)現(xiàn)

9、，轉(zhuǎn)化生長因子β(transfminggrowthfactβ，TGFβ)在調(diào)控細(xì)胞外基質(zhì)的聚積中起重要作用［1］。在哺乳類動(dòng)物，TGFβ有三種亞型：TGFβ1、TGFβ2及TGFβ3。在胚胎發(fā)育、組織修復(fù)和纖維化病變中，TGFβ三種亞型的表達(dá)不盡相同，提示在體內(nèi)病理過程中，TGFβ各亞型所起的作用可能不同。TGFβ特異結(jié)合的受體有三種：Ⅰ型受體(TβRⅠ)介導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)的聚積，Ⅱ型受體(TβRⅡ)與TGFβ的抑制細(xì)胞生長的作用密切相關(guān)，

10、Ⅲ型受體(TβRⅢ)則是將結(jié)合的TGFβ分子呈遞于上述的兩種受體而發(fā)揮作用。有關(guān)TGFβ1在腎小球疾病中的作用，已有大量文獻(xiàn)報(bào)道。但有關(guān)TGFβ2、TGFβ3及與細(xì)胞外基質(zhì)聚積有關(guān)的TβRⅠ在腎小球疾病中的作用，目前國外僅有少數(shù)報(bào)道［2，3］，而對(duì)于人MsPGN各期病變TGFβ各亞型及其受體的變化，尚未見報(bào)道。材料和方法1.標(biāo)本：MsPGN患者的腎活檢標(biāo)本38例，其中輕度MsPGN20例，中度MsPGN10例，重度MsPGN8例。以10

11、%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，切片厚度為4μm。2.試劑：第一抗體包括：兔抗人TGFβ1，β2，β3及TβRⅠ多克隆抗體(Couser教授惠贈(zèng)，美國SantaCruze公司產(chǎn)品)，鼠抗人Ⅳ型膠原、層粘連蛋白單克隆抗體、兔抗人纖粘連蛋白抗體(DAKO產(chǎn)品)，山羊抗人Ⅲ型膠原抗體(美國南方生物技術(shù)公司產(chǎn)品)。采用SP試劑盒(美國Zymed公司產(chǎn)品，購于北京中山生物試劑公司)，包括：生物素標(biāo)記抗兔IgG抗體，生物素標(biāo)記抗鼠IgG抗體，生物素標(biāo)

12、記抗山羊IgG抗體；辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記鏈酶親合素(streptavidin)。3.方法：采用免疫酶染色技術(shù)(LAB法)。步驟：脫蠟、水化。0.3%過氧化氫甲醇液滅活內(nèi)源性過氧化物酶。0.1%透明質(zhì)酸酶溶液(TGFβ各亞型及其受體染色)，或0.4%胃蛋白酶溶液(細(xì)胞外基質(zhì)成分染色)，37℃消化30分鐘。2%小牛血清白蛋白(BSA)封閉非特異染色。滴加適當(dāng)稀釋的第一抗體，4℃過夜。滴加生物素標(biāo)記的第二抗體(1∶300稀釋)，37℃

13、孵育30分鐘。滴加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈酶親合素(HRPStreptavidin)，1∶300稀釋，37℃孵育45分鐘。滴加DABH2O2顯色液，于顯微鏡下監(jiān)測顯色。最后蘇木素對(duì)比染色，常規(guī)脫水、透明、封片。上述各步驟間(BSA封閉非特異染色一步除外)，均以TrisHCl緩沖液沖洗。實(shí)驗(yàn)設(shè)空白對(duì)照及第一抗體動(dòng)物正常血清對(duì)照，結(jié)果均為陰性。4.結(jié)果處理：依據(jù)腎小球內(nèi)染色面積，進(jìn)行半定量分級(jí)［2］：0為無染色；1為腎小球內(nèi)微弱的和點(diǎn)狀的染色

14、；2為輕度和節(jié)段性腎小球內(nèi)染色；3為中度節(jié)段性或彌漫性(占腎小球面積50%以上)腎小球內(nèi)染色；4為重度彌漫性腎小球內(nèi)染色。5.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，進(jìn)行秩和檢驗(yàn)。結(jié)果1.TGFβ1、β2、β3及TβRⅠ的免疫組化染色(圖1)：在輕度MsPGN時(shí)，腎小球內(nèi)無TGFβ1、β2、β3及TβRⅠ的表達(dá)。在皮質(zhì)部的腎間質(zhì)中，可見少量的TGFβ1表達(dá)。TGFβ2及TGFβ3主要分布在遠(yuǎn)端腎小管和集合管。TβRⅠ在腎小管中有少量表達(dá)

15、。中度MsPGN時(shí)，腎小球中可見TGFβ2、β3及TβRⅠ少量表達(dá)，TGFβ1僅呈微量表達(dá)。腎間質(zhì)中TGFβ1表達(dá)增加。腎小管中TGFβ2、β3及TβRⅠ的表達(dá)也較輕度MsPGN時(shí)增加。重度MsPGN時(shí)，腎小球內(nèi)可見較為明顯的TGFβ1、β2、β3及TβRⅠ的表達(dá)(P＜0.05，t′值分別為42、53、46、41)。腎間質(zhì)中TGFβ1的表達(dá)顯著增加。腎小管中TGFβ2、β3及TβRⅠ也顯著增加(圖2，3以TGFβ2于輕、重MsPGN之表