氧化苦參堿的鎮(zhèn)痛作用及其在pc12細胞上延遲整流器鉀電流

1、氧化苦參堿的鎮(zhèn)痛作用及其在氧化苦參堿的鎮(zhèn)痛作用及其在PC12PC12細胞上延遲整流器鉀電細胞上延遲整流器鉀電流（流（IKIK）療效觀察）療效觀察摘要摘要：為了觀察電壓激活鉀氧化苦參堿（OMT）和它的作用鎮(zhèn)痛效果呢K通道，鼠標(biāo)醋酸誘發(fā)的腹部收縮模型用于測試體內(nèi)的鎮(zhèn)痛效果，并且在體外，延遲整流器K電流（IK）的PC12細胞（大鼠嗜鉻細胞瘤細胞）使用自動膜片鉗方法記錄下來。結(jié)果表明，應(yīng)用的OMT后，對乙酸引起的動物腹部收縮的數(shù)目是顯著降低，謚

2、PC12細胞是顯著降低，并表現(xiàn)出濃度依賴性的方式。應(yīng)用OMT后，PC12細胞謚既激活和失活曲線轉(zhuǎn)移到負的電位。這項研究表明，OMT在小鼠中顯示鎮(zhèn)痛作用。的電壓激活K時抑制K通道可能是在其中增強的K既激活和失活機理之一K渠道參與，可能會發(fā)揮重要作用。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞：苦參素鎮(zhèn)痛效果PC12細胞全自動膜片鉗K通道介紹介紹苦參（RadixSophaflavescensAit），一個著名的傳統(tǒng)中國草藥，在中國反病毒方面進行了廣泛研究，抗炎和抗疼痛的

3、效果。氧化苦參堿（OMT），一種苦參堿型生物堿，從苦參提取，顯示出抑制組胺的釋放，減少過敏反應(yīng)的和免疫調(diào)節(jié)作用的。最近已經(jīng)報道的苦參堿型生物堿的鎮(zhèn)痛效果[13]，但OMT的鎮(zhèn)痛作用及其機理不明，直到如今。據(jù)了解，疼痛信號通過神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)。多種類型的離子通道，神經(jīng)元興奮性，特別是在K通道，其動作電位的音響環(huán)后復(fù)極化細胞膜，引起在某些神經(jīng)元超極化后，并分別對神經(jīng)元信號[4]突觸后時間積分是至關(guān)重要的。K渠道包括瞬時外向鉀通道，延遲整流鉀通道

4、，內(nèi)向整流鉀通道，鈣激活的鉀離子通道和ATP活性鉀離子通道的電壓依賴性鉀通道，因此，產(chǎn)生了復(fù)雜的細胞的變化。神經(jīng)元電壓依賴性鉀的抑制電流通過一些止痛藥已經(jīng)報警，可能是鎮(zhèn)痛機制研究[57，18]的解釋廣泛。延遲整流器K電流（IK），主電流的作用電位的音響環(huán)后細胞膜的復(fù)極化，是電壓依賴性鉀從而起到如神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，膜興奮性，增殖和細胞凋亡的細胞的信號傳導(dǎo)過程中起重要作用的電流[89]。膜片鉗測量一直是黃金標(biāo)準(zhǔn)分析，離子通道藥物研究。然而，由

5、于費時和勞動密集性，常規(guī)的膜片鉗不適合有效的篩選藥物發(fā)現(xiàn)的早期階段。現(xiàn)在，自動化膜片鉗設(shè)備的開發(fā)克服了所有的缺點，并迅速用于離子通道藥物發(fā)現(xiàn)和安全藥理學(xué)[1012]。克隆嗜鉻細胞瘤（PC12）細胞，從大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細胞衍生的，表達延遲整流器K電流（IK）和代表了電和分泌，而不是背根神經(jīng)節(jié)細胞（DRG）一個很好的神經(jīng)元模型。在這項研究中，乙酸誘導(dǎo)的腹部收縮試驗是用來測試OMT的鎮(zhèn)痛效果和OMT對謚通過神經(jīng)PC12細胞記錄使用自動化膜片

6、鉗法的電壓門控鉀通道的作用。研究結(jié)果將提供應(yīng)用信息，這可能有助于解釋OMT的鎮(zhèn)痛機制。實驗步驟實驗步驟藥物和化學(xué)品OMT（分子式：C15H24N2O2H2O，分子量：282.38CAS號：16837528HPLC純度98％）是由北京雙鷺?biāo)帢I(yè)股份有限公司（北京，中國）提供。聚L賴氨酸，乙二醇雙（二）氨基乙基N，N，N，N四乙酸（EGTA），N2羥乙基哌N02乙磺酸（HEPES）得自SigmaAldrich公司購買（圣路易斯，密蘇里州，美國

7、）。Dulbecco氏改性音響編Eagle氏培養(yǎng)基（DMEM），熱滅活的馬血清（HS）和胎牛血清（FBS）購自Gibco（GrIsl的，NY，USA）購得。其他試劑購自國藥集團化學(xué)試劑有限公司（上海，中國）獲得的。峰值幅度應(yīng)用之前和OMT后，分別地）。為了記錄IK的動能激活曲線，將細胞保持在70mV，而電流是引起與步驟電壓脈沖的應(yīng)用，范圍從70mV到80毫伏，以10毫伏遞增。30.6莫耳濃度被選擇以記錄動力學(xué)活化曲線上的藥物的效果，因為

8、IK被這種藥物濃度（IC50）下抑制近似50％。用于IK的活化動力學(xué)曲線的回歸分析，IK是由下式轉(zhuǎn)換成電導(dǎo)：G=1（VVrev），其中G是電導(dǎo)，我被K電流，V為膜電位，并Vrev是逆轉(zhuǎn)勢。歸一化電導(dǎo)顯示由波爾茲曼方程，GGmax=1EXP[（V12V）k]的，其中GGmax的歸一電導(dǎo)，V12為膜電位在半活化，和k是斜率因子。為了記錄IK的滅活動力學(xué)曲線，將細胞保持在70mV，第二電流分別引出用的測試脈沖至40毫伏，跟隨6080毫伏一個預(yù)

9、脈沖，在10mV遞增。30.6莫耳濃度被選擇以記錄IK的滅活動力學(xué)曲線上的藥物的效果，對于滅活動力學(xué)曲線的回歸分析，穩(wěn)態(tài)失活曲線呈由波爾茲曼方程：II最大=1EXP[（V12V）K]，其中II最大是標(biāo)準(zhǔn)化的電流，V12為膜電位的半失活，而k是斜率因子。記錄只從細胞中，阻力大于1GX.當(dāng)電流達到平衡至少要200秒，細胞外液換成含有使用40微L解決方案NPC16補丁班輪藥物via4槍頭細胞外液。數(shù)據(jù)分析結(jié)果以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差。全細胞數(shù)據(jù)網(wǎng)絡(luò)萊導(dǎo)入

10、到伊戈爾臨（Wavemetrics公司，波特蘭，俄勒岡，美國）。SIGMAPLOT（SPSS科學(xué)，芝加哥，IL，USA），和MicrosoftExcel（Microsoft公司，雷德蒙，美國）軟件被用于顯示或分析。學(xué)生t檢驗和單向方差分析程序被用來比較的藥物作用的差異。p0.05為統(tǒng)計學(xué)顯著的。結(jié)果OMT的在乙酸誘導(dǎo)的腹部收縮試驗中的作用乙酸（0.7％，10毫升千克）給藥產(chǎn)生的腹部收縮行為的典型圖案。立即觀察到腹部收縮的在20分鐘內(nèi)的數(shù)

11、量的乙酸注射后示于表1由乙酸的比較藥（阿司匹林）抑制的腹部收縮。OMT（100毫克千克）的應(yīng)用顯示出顯著的鎮(zhèn)痛活性，這是由腹部收縮醋酸引起腹部收縮試驗的數(shù)量減少重新反映并提出了一些濃度依賴性。OMT對PC12細胞IK的影響如在圖1所示，IK的峰值幅度應(yīng)用OMT之后且在顯眼的濃度依賴性方式被降低。半數(shù)抑制濃度（IC50）和OMT的hillcoefficient為37.2LM，0.87，分別為（N=5）。討論該研究為抗在炎性和鎮(zhèn)痛藥從天然產(chǎn)

12、物過的苦參堿型生物堿得到世上效果的熱點引起廣泛關(guān)注他們提取后和普里音響版，并且據(jù)報道，苦參堿型的酰胺基生物堿是一個重要的官能團，苦參堿型生物堿的影響造成的他們提取和提純后的廣泛關(guān)注，而且據(jù)報道，苦參類生物堿的酰胺基是必不可少的官能團，影響著鎮(zhèn)痛效力[3]。OMT，作為苦參堿的類似物，其包含在一個以上氧原子的1個N比苦參堿，是由中國國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的藥物，并已廣泛用于抗在炎性效果。因此，OMT是否具有鎮(zhèn)痛效果我們感興趣。這項研究