胰腺實(shí)性假乳頭狀腫瘤的無(wú)標(biāo)記雙光子激發(fā)熒光成像

1、1胰腺實(shí)性假乳頭狀腫瘤的無(wú)標(biāo)記雙光子激發(fā)熒光成像胰腺實(shí)性假乳頭狀腫瘤的無(wú)標(biāo)記雙光子激發(fā)熒光成像【摘要摘要】胰腺胰腺實(shí)性假乳性假乳頭狀腫瘤（瘤（SPT）是一種）是一種惡性較低的分泌性上皮低的分泌性上皮腫瘤，此瘤，此類(lèi)腫類(lèi)腫瘤在胰腺瘤在胰腺腫瘤中瘤中較為較為罕見(jiàn)但在年但在年輕女性中的女性中的發(fā)病率病率較高，根據(jù)世界高，根據(jù)世界衛(wèi)生組織組織的研究，將的研究，將該疾病命名疾病命名為胰腺胰腺實(shí)性假乳性假乳頭狀腫瘤，患者通常表瘤，患者通常表現(xiàn)為現(xiàn)為

2、非特異性非特異性的臨床癥狀，最常床癥狀，最常見(jiàn)的癥狀有腹部疼痛、腹部的癥狀有腹部疼痛、腹部腫塊腫塊，惡心等，少數(shù)患者心等，少數(shù)患者還會(huì)出會(huì)出現(xiàn)包括黃疸、包括黃疸、貧血、胃血、胃腸道梗阻和胰腺炎等道梗阻和胰腺炎等癥狀。目前，胰腺癥狀。目前，胰腺SPT診斷的國(guó)斷的國(guó)際標(biāo)際標(biāo)準(zhǔn)主要依據(jù)的是病理學(xué)或準(zhǔn)主要依據(jù)的是病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)，胞學(xué)，診斷的主要方法是通斷的主要方法是通過(guò)蘇過(guò)蘇木精、伊木精、伊紅染色染色劑對(duì)劑對(duì)待測(cè)細(xì)測(cè)細(xì)胞進(jìn)行染色行染色利用染色利

3、用染色劑的特性突的特性突顯出待出待測(cè)細(xì)測(cè)細(xì)胞的病理學(xué)或胞的病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)特征，之后利用胞學(xué)特征，之后利用傳統(tǒng)傳統(tǒng)光學(xué)光學(xué)顯微鏡觀鏡觀察其察其結(jié)構(gòu)特征，構(gòu)特征，從而達(dá)到從而達(dá)到診斷的目的。但是，由于斷的目的。但是，由于傳統(tǒng)傳統(tǒng)的染色法十分依的染色法十分依賴(lài)染色染色劑的使用，在染色的的使用，在染色的過(guò)程中不程中不僅時(shí)間長(zhǎng)僅時(shí)間長(zhǎng)速度慢，而且染色速度慢，而且染色劑的用量和染色的用量和染色時(shí)間時(shí)間也不好控制，因而容易造成染色不當(dāng)引起的也不好控制

4、，因而容易造成染色不當(dāng)引起的誤診誤診。本文介。本文介紹了一種新型的光學(xué)了一種新型的光學(xué)診斷技斷技術(shù)，可以很好地，可以很好地在彌在彌補(bǔ)傳統(tǒng)補(bǔ)傳統(tǒng)染色法缺點(diǎn)的同染色法缺點(diǎn)的同時(shí)提高提高診斷的準(zhǔn)確度。具體方法是：利用雙光子激斷的準(zhǔn)確度。具體方法是：利用雙光子激發(fā)熒發(fā)熒光（光（TPEF）顯微鏡在無(wú)需在無(wú)需蘇木精、伊木精、伊紅(H&E)染色的前提下染色的前提下對(duì)人體正常胰腺人體正常胰腺組織組織和SPT組織組織的切片的切片進(jìn)行熒光成像，確定它光成像

5、，確定它們的組織結(jié)組織結(jié)構(gòu)、構(gòu)、細(xì)胞形胞形態(tài)以及以及細(xì)胞質(zhì)的變化。我化。我們的研究的研究結(jié)果顯示：所示：所獲得的正常胰腺得的正常胰腺組織組織的高分辨率的高分辨率TPEF圖像可以像可以較完整地完整地顯示出示出細(xì)胞的形胞的形態(tài)與結(jié)構(gòu)，而構(gòu)，而胰腺胰腺SPT的高分辨率的高分辨率TPEF圖像可以清晰地像可以清晰地顯示出其病理示出其病理結(jié)構(gòu)的特征。此外，基于構(gòu)的特征。此外，基于TPEF圖像，我像，我們還計(jì)們還計(jì)算了胰腺算了胰腺SPT組織組織和正常

6、胰腺和正常胰腺組織組織的核的核質(zhì)比，來(lái)定量描述他比，來(lái)定量描述他們?cè)谛卧谛螒B(tài)學(xué)上的差異。以上的研究學(xué)上的差異。以上的研究結(jié)果表明：利用雙光子激果表明：利用雙光子激發(fā)熒發(fā)熒光成像技光成像技術(shù)能夠?qū)驅(qū)σ认僖认俳M織組織切片切片進(jìn)行無(wú)行無(wú)標(biāo)記標(biāo)記成像，與成像，與傳統(tǒng)傳統(tǒng)的染色法成像相比，不的染色法成像相比，不僅可以可以節(jié)省大量省大量時(shí)間時(shí)間，而且，而且還能提高能提高診斷的準(zhǔn)確率斷的準(zhǔn)確率是一種是一種優(yōu)于傳統(tǒng)診傳統(tǒng)診斷方法的新型光學(xué)斷方法的新型

7、光學(xué)診斷方法。斷方法?！娟P(guān)鍵詞關(guān)鍵詞】雙光子激雙光子激發(fā)熒發(fā)熒光成像；光學(xué)光成像；光學(xué)診斷；胰腺斷；胰腺實(shí)性假乳性假乳頭狀腫瘤；未染色瘤；未染色組織組織切片切片31.緒論胰腺實(shí)性假乳頭狀腫瘤是一種分布于外分泌胰腺細(xì)胞中的低度惡性腫瘤[1]，發(fā)病人群主要集中于年輕女性，它由Frantz在20世紀(jì)50年代首次發(fā)現(xiàn)，并依照此類(lèi)腫瘤的組織學(xué)特征，將該腫瘤命名為囊性實(shí)性乳頭狀上皮性腫瘤[2]。按照2000年世界衛(wèi)生組織（WHO）的分類(lèi)，胰腺SPT

8、通常被定義為由圍繞在毛細(xì)血管周?chē)膯渭?xì)胞組成的上皮性腫瘤，其形態(tài)表現(xiàn)為堅(jiān)實(shí)的團(tuán)塊以及假乳頭狀的組織結(jié)構(gòu)，并伴隨著出血和囊性變性[34]。大約有75–80%的胰腺SPT是在胰腺中發(fā)育的，但其有可能會(huì)入侵鄰近的器官或向遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，如肝、淋巴結(jié)、腸系膜、網(wǎng)膜、腹膜[56]，患者通常表現(xiàn)為非特異性的臨床癥狀[7]，最常見(jiàn)的癥狀為疼痛和腹部腫塊，少數(shù)患者還會(huì)出現(xiàn)包括黃疸、貧血、胃腸道梗阻和胰腺炎等癥狀[8]，從病理學(xué)的角度分析，如果這種腫瘤出現(xiàn)在神

9、經(jīng)、血管的周?chē)蛘呤窍蚱渌鞴俎D(zhuǎn)移，那表明胰腺SPT的惡性增強(qiáng)并且發(fā)展成轉(zhuǎn)移性腫瘤[9]。由于胰腺SPT的起源和非特異性的臨床癥狀都具有不確定性，所以該疾病經(jīng)常會(huì)造成誤診[10]，目前在治療此疾病的過(guò)程中，手術(shù)切除是做好的治療方法[11]，據(jù)報(bào)道，95%的患者可以通過(guò)手術(shù)切除得到治愈[12]。在黃曦等人的臨床研究和統(tǒng)計(jì)中，胰腺SPT在男性、女性中的發(fā)病率之比為1:10，患者的平均年齡為33歲且集中在17～60歲之間。在這些病例中，有4例

10、在毫無(wú)癥狀的情況下被確診，有7例表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀，如腹痛、嘔吐、食欲不佳等，有5例的發(fā)病部位在胰頭部，剩下的患者的發(fā)病部位都為胰體和胰尾部[13]（如表1）。所以，盡早了解SPT的變化就顯得尤為重要，這將有助于在手術(shù)前提高診斷的準(zhǔn)確性。病例性別年齡（歲）部位1女26胰頭2女37胰體、胰尾3女34胰體、胰尾4女17胰頭5女25胰體、胰尾6女60胰頭7女29胰體、胰尾8女23胰頭9女31胰體、胰尾10女24胰頭11男58胰體、胰尾表1:

11、11例胰腺SPT的臨床情況目前，胰腺SPT的病理學(xué)診斷方法主要依靠傳統(tǒng)的H&E染色、B超、CT和MRI法。H&E染色法雖然能呈現(xiàn)較為完整、準(zhǔn)確的胰腺SPT圖像，但是存在耗時(shí)長(zhǎng)、染料用量難以把握、染色時(shí)間難以確定、染料污染嚴(yán)重等缺點(diǎn)；而B(niǎo)超、CT和MRI法雖然無(wú)需染色，但其比較容易造成誤診，原因在于當(dāng)胰腺SPT的直徑較小時(shí)，其囊性結(jié)構(gòu)不夠明顯，主要表現(xiàn)為實(shí)性結(jié)構(gòu)，這樣的影像學(xué)結(jié)構(gòu)與胰腺癌的特稱(chēng)相似，兩者很難區(qū)分；而且，胰腺SPT還有低惡性

12、，生長(zhǎng)速度較低，具有擴(kuò)散生長(zhǎng)成巨大腫瘤的能力等特點(diǎn)，這些特點(diǎn)決定了胰腺SPT從影像學(xué)的角度無(wú)法確定其來(lái)源這一事實(shí)[14]。因此，目前較為常用的診斷方法仍是利用H&E染色等病理分析法，但如果能開(kāi)發(fā)出一種快速、準(zhǔn)確、無(wú)污染的診斷成像工具，同時(shí)這種工具還能獲得在分辨率和圖像質(zhì)量上能媲美H＆E染色圖像，那么這種方法將會(huì)改變?cè)\斷SPT的現(xiàn)狀。近年來(lái)，雙光子激發(fā)熒光（TPEF）成像技術(shù)已廣泛應(yīng)用于組織結(jié)構(gòu)、未染色組織細(xì)胞的成像[15]。這種技術(shù)提供

13、了一種在不添加任何外源性熒光劑且保持組織活性的情況下，對(duì)細(xì)胞和亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行非侵入性的高分辨率激光掃描[1617]。TPEF與傳統(tǒng)的光學(xué)成像技術(shù)相比，具有更深的穿透深度、更高的分辨率和較低的光漂白、光毒性，最重要的是，由生物組織內(nèi)熒光產(chǎn)生的TPEF信號(hào)可以清楚地呈現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)。在本文中，我們?cè)噲D利用TPEF成像技術(shù)得到SPT的病理信息，并分析、對(duì)比正常胰腺組織和胰腺SPT組織的區(qū)別，歸納、總結(jié)出利用TPEP圖像診斷胰腺SPT的方法，從而