切片標本的制作

1、1切片標本的制作切片標本的制作本次實驗采用的是石蠟切片法。石蠟切片法的程序如下：取材→固定→沖洗（洗滌）→脫水脫水→透明透明→包埋→切片→貼片→烘片→脫蠟脫蠟→復水復水→染色染色→脫水透明→封藏。上述每個程序的要求和方法可歸納為透蠟制片和染色兩大步驟，現(xiàn)簡單介紹如下：脫水脫水步驟為：將組織塊浸入系列酒精70%→80%→95%→100%→100%各30min。脫水的實際時間長短視組織塊的大小而定，但不宜過長。透明透明步驟為：將組織塊浸入二

2、甲苯與無水乙醇（1：1）的混合液30min→二甲苯30min→二甲苯30min。透蠟透蠟步驟為：將組織塊浸入二甲苯與石蠟（1：1）的混合液30min→石蠟30min→石蠟30min。脫蠟脫蠟程序為：純二甲苯（脫蠟）15min→純二甲苯15min→二甲苯：純乙醇（1：1）3min復水復水程序為：純乙醇3min→95%乙醇3min→90%乙醇3min→80%乙醇3min→70%乙醇3min→60%乙醇3min→50%乙醇3min→30%乙醇

3、3min→蒸餾水H、E染色染色程序為：將已復水的切片放入蘇木精染液中（30分鐘以上），水洗2分鐘，在05%的鹽酸水中分色3秒（當在顯微鏡下檢查時，核褪至淡紅色，細胞質及結締組織幾近無色即可）蒸餾水洗1分鐘，01%氨水中藍化（1~3分鐘，核呈藍紫色），蒸餾水洗（1分鐘），切片由低至高濃度的系列酒精中脫水（每級3~5分鐘）至95%乙醇→切片入05%伊紅中復染（3分鐘）（伊紅由95%乙醇配制的）→95%乙醇中分色（顯微鏡檢查呈藍紫色，胞質及結

4、締組織為粉紅色）→95%乙醇輕洗（除去玻片上多余的伊紅染液。動作要迅速，否則組織上的伊紅要脫下來）。透明透明程序為：將已脫水的切片依次放入純乙醇：二甲苯（1：1）→二甲苯⑴→二甲苯⑵中，每級15分鐘。31217、包埋包埋將完成透蠟程序的肌肉組織塊包埋在含有石蠟的小紙盒內，便于保存及制作薄的石蠟切片。包埋時把熔化的石蠟倒入小容器內，然后迅速夾取肌肉組織放入小容器中，并適當調整肌肉組織塊的位置和方向，待容器中的石蠟迅速凝成蠟塊。1218、切

5、片切片肌肉組織塊經上述各程序的處理后，不僅變得較硬，而且有了石蠟的支撐，經修整后便可以放在切片機上切成極薄的石蠟切片。切片的厚度為8um。1219、貼片貼片把由切片機上切下的含有肌肉組織的蠟條割成小段，再將小段蠟條安放在均勻涂過蛋白質的載玻片上，滴上蒸餾水使其在展片臺上加熱，在加熱過程中使蠟條適當?shù)厣煺归_，以此使組織伸展平正，然后把玻片上多余的水分去掉。12110、烘片烘片把貼好蠟片的載玻片置于37℃的恒溫箱中烘烤24小時以上，使切片干

6、燥。122染色染色以下各步驟均需在染色缸中進行，所以需預先準備好一套清潔的染色缸，分別貼上系列標簽并加入相應的藥品。1221、脫蠟脫蠟通過切片、貼片及烘片后，肌肉組織仍埋藏在蠟中，為了使肌肉組織順利染上色，必須先將肌肉組織切片上的蠟去掉，因此要把貼片烘干后的的玻片放入含有二甲苯的染色缸內，使蠟溶解在二甲苯中。脫蠟程序為：純二甲苯（脫蠟）15min→純二甲苯15min→二甲苯：純乙醇（1：1）3min1222、復水復水在肌肉組織透蠟包埋前

7、已把肌肉組織中的水去除干凈了，而沒有經過復水處理的肌肉組織切片不能放入水溶性的染料中染色，所以染色前肌肉組織切片中必須經復水處理，也就是使得肌肉組織中含有水分。肌肉組織切片復水過程必須逐漸進行，即從純乙醇——經下降的各濃度系列酒精直至水，每級3~5分鐘。在水中的放置時間要稍加長，大約10分鐘以上，蘇木精染液才能上色。復水程序為：純乙醇3min→95%乙醇3min→90%乙醇3min→80%乙醇3min→70%乙醇3min→60%乙醇3m

8、in→50%乙醇3min→30%乙醇3min→蒸餾水1223、染色染色組織或細胞的許多結構在自然狀態(tài)下是無色或具有很淡的顏色的，要區(qū)分出組織和細胞的各種結構是極為困難的，為了更好地對組織的各種結構進行觀察，必須染色。染色時將切片放入預先制好的染色劑內，根據不同的目的、不同的染色劑的要求染色一定時間后取出切片，切片再行水洗、分色或復染等程序的處理。本實驗的染色采用蘇木精（hematoxylin）、伊紅（eosin）染色法，簡稱為H、E染色