高效液相常見問題

1、摘自《丁香園》請問：請問：我的柱壓為什么一直很高？每天做完后我用于5%的甲醇0.2mlmin沖過夜，第二天用甲醇沖30min后再進(jìn)行工作。答：答：柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，我建議你可按下面步驟檢查問題的起因。1、拆去保護(hù)柱（哪個(gè)是保護(hù)柱？），看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問題，若柱壓仍高，再檢查；2、把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢

2、查。3、將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子，(此時(shí)不要連接檢測器，以防固體顆粒進(jìn)入檢測器)。這時(shí)，如果柱壓仍不下降，再檢查；4、更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明你的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請與柱子廠商聯(lián)系。一般情況下，在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線過濾器便可避免柱壓過高的問題。我看到你用5%的甲醇0.2mlmin沖過夜，雖然流速很低，但你的水相占比例大，對柱子

3、的壽命不好，不知道你的是長柱還是短柱，柱壓有多高？請告知！請問：請問：做HPLC時(shí)，基線漂移厲害是怎么回事？做HPLC時(shí)，基線漂移的厲害是怎么回事？時(shí)，基線漂移的厲害是怎么回事？做HPLC時(shí)，不進(jìn)樣，走梯度，020min20%CH3OH100%CH3OH2030min100%CH3OH用H20CH3OH或0.1%TFACH3OH0.1%TFA體系，波長240nm基線漂移的厲害，大概漂移有200MAU，是不是進(jìn)樣池污染了？答：答：1進(jìn)氣泡

4、了流動相脫氣2如果是檢測池污染了.在不接柱的情況下先用水沖20min然后用5%的硝酸沖洗30min最后用水沖洗至中性.1.檢測池可能有氣泡2.檢測池可能被污染3.檢測池流動相未置換完全4.氘燈問題。5.色譜柱污染6.脈動7.溫度影響HPLC常見問題和對策常見問題和對策—對實(shí)驗(yàn)人員十分有用對實(shí)驗(yàn)人員十分有用HPLC色譜常見問題色譜常見問題1.用HPLC進(jìn)行分析時(shí)保留時(shí)間有時(shí)發(fā)生漂移，有時(shí)發(fā)生快速變化，原因何在？如何解決？2.液相色譜中峰出

5、現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么？3.HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法4.做HPLC分析時(shí)，柱壓不穩(wěn)定，原因何在？如何解決？5.我最近更換了另一種牌號的ODS柱，雖然分離情況仍可以，但保留時(shí)間不重現(xiàn)，為什么？6.我購買的HPLC柱驗(yàn)收測試時(shí)柱壓過高，請問為什么？1.用HPLC進(jìn)行分析時(shí)進(jìn)行分析時(shí)保留時(shí)間有時(shí)發(fā)生漂移保留時(shí)間有時(shí)發(fā)生漂移，有時(shí)發(fā)生快速變化，原因何在？如何解決？，有時(shí)發(fā)生快速變化，原因何在？如何解決？關(guān)于漂移問題：①溫度控

6、制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定②流動相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動相發(fā)生蒸發(fā)、反應(yīng)等③柱子未平衡好，需對柱子進(jìn)行更長時(shí)間的平衡關(guān)于快速變化問題①流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設(shè)定流速，使之保持穩(wěn)定②泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出。③流動相不合適，解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內(nèi)進(jìn)行適當(dāng)混合2.液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么？液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么？①篩板堵塞或柱失效，解決辦法是

7、反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。②存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子③可能柱超載，減少進(jìn)樣量。3.HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法靈敏度不夠的主要原因及解決辦法①樣品量不足，解決辦法為增加樣品量②樣品未從柱子中流出?？筛鶕?jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動相或柱子③樣品與檢測器不匹配。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測器④檢測器衰減太多。調(diào)整衰減即可。⑤檢測器時(shí)間常數(shù)太大。解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)？⑥檢測器池